牛催乳素cDNA在大肠杆菌中的克隆与表达

从牛垂体中分离出总的mRNA,经逆转录酶及大肠杆菌DNA聚合酶合成双链cDNA,以pBR322作为克隆载体并用加G．C尾的方法进行重组,把重组质粒导人大肠杆菌中,建立了牛垂体mRNA的cDNA文库。用标记的人工合成的牛催乳索基因片段作为探针进行杂交,并从库中筛选到几个阳性克隆,经酶谱分析和DNA序列分析证明克隆中有一个含有全长的牛催乳素cDNA序列。将所获得的克隆进行“剪切”,加上启动子,然后导人大肠杆菌JM 103中并在IPTG诱导下表达。用SDS-PAGE检测,证明有表达产物存在,再通过酶标测定证明该表达产物具有与天然牛催乳素相似的免疫学活性。     

适用于核酸复性动力学分析的微机程序

核酸复性动力学分析对于研究真核生物的基因组结构、生物的进化、基因的表达具有重要的意义。该反应结果的分析,国外一般采用Britten的、适于PDP-10型计算机的程序做数据处理。但是,该程序存在如下缺点:首先,该程序只适于PDP-系列的小型计算机,而不能用于目前国内广泛普及的IBM微型计算机;其次,该程序要求的子     

金鱼精巢支持细胞间连接和血睾屏障

本文主要采用冷冻断裂-蚀刻方法,同时结合超薄切片和镧标记实验,研究金鱼精巢内的支持细胞间连接特点及血-睾屏障的形成。结果发现:1)金鱼精巢内支持细胞间连接呈紧密连接、桥粒和间隙连接同时存在的形式。2)各种连接的数量、面积、分布密度会随着小囊内生精细胞的发育而改变。3)紧密连接在精子发生过程的各个阶段都存在,但在形态上表现为Ⅰ型和Ⅱ型两种。4)血-睾屏障是在粗线期精母细胞期后形成,它是Ⅰ型紧密连接发育为Ⅱ型紧密连接的结果。     

沙冬青高活性抗冻蛋白的发现

关于植物的抗冻作用机制已有许多论述［１—３］,然而低温植物中是否存在高活性的抗冻蛋白？抗冻作用的主要作用机制是什么？为研究这些问题,我们以沙冬青（Ａｍｍｏｐｉｐｔａｎ－ｔｈｕｓｍｏｎｇｏｌｉｃｕｓ）为材料,分离和部分纯化了植物抗冻蛋白。经测定,其分子量包括４５．７ｋＤ和８１．２ｋＤ等,在５０ｍｇ／ｍｌ的浓度下,其熔点约为－１５℃,所以它的抗冻活性比已经发现的鱼类［４—６］或黑麦抗冻蛋白（在６０ｍｇ／ｍｌ的浓度时冰点为－１．１℃）［２］活性高得多。在１００—２００倍的相差显微镜下可观察到其冰晶呈多…     

抗性家蝇cDNA文库的构建(英文)

本文报道了以抗性家蝇头部为材料,参照“QuickPrep~(TM) Micro mRNA Purification Kit”和“Time-Saver~(TM) cDNA Synthesis Kit”操作程序构建的cDNA文库。库容量为每纳克cDNA可产生1×10~4pfu,其中90％以上为重组噬菌斑。目前,正用同源探针杂交技术进行目的基因的筛选。     

兔和小鼠早期胚胎ICM在ES培养系统中行为的比较

比较了兔和小鼠早期胚胎在小鼠ＥＳ培养系统中生长和发育和特点。结果发现,“两者在体外的早期发育程序和时间表”基本一致。但两者的生长方式不同：（１）小鼠胚胎的滋胚层（ＴＢ）能推开饲养层（ｆｅｅｄｅｒ）直接铺展在培养皿上;兔胚的ＴＢ推开饲养层的力量较小,大多数胚胎铺展在饲养之上;（２）小鼠胚外内胚层（ＥｘＥｎ）分化后紧紧包裹在ＩＣＭ（ｉｎｎｅｒ ｃｅｌｌ ｍａｓｓ）之外,而兔胚ＥｘＥｎⅠ和Ⅱ依次从ＩＣＭ     

利用改进的cDNA RDA技术分离胡萝卜(Daucus carota L.)体细胞胚根发育相关的基因

根据链霉亲和素与生物素之间的结合作用及磁性吸附分离的原理,发展出改进的cDNA代表性差式分析(representational difference analysis,RDA)技术,并用来检测在调控和解调控培养12h的胡萝卜体细胞胚中特异表达的基因.结果显示,在解调控12h的胡萝卜体细胞胚中,存在4条特异表达的cDNA片段,命名为NR-1,NR-2,NR-3和NR-4.将这些片段分别克隆在pBS噬菌粒载体中.DNA序列同源性比较表明,片段NR-3和NR-4分别与植物的DnaJ和木质葡聚糖内转糖基化酶(xyloglucan endo-transglycosylase)的编码基因有很高的同源性,而片段NR-2中有一段序列与LEA蛋白(late embryogenesis abundant proteins)基因有一定的同源性.NR-1则可能来自新基因.用32P标记NR-1作探针,与cDNA片段群体进行杂交证实,从解调控12h的胡萝卜体细胞胚中克隆到一种与胚根发育相关的新基因序列.Southern杂交表明,此基因在胡萝卜基因组中可能以单拷贝或低拷贝的形式存在.     

显花植物自体和异体花粉识别的分子机理研究(英文)

显花植物的受精涉及许多识别过程;其中第一个是雌性生殖组织心皮对花粉的识别。自交不亲和性（Ｓｅｌｆ－ｉｎｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ,ＳＩ）是一种广泛分布于显花植物的种内生殖障碍。在多数自交不亲和的植物中,ＳＩ的遗传控制比较简单,受控于一个由复等位基因构成的单一位点,称为Ｓ位点。在以茄科、玄参科和蔷薇科为代表的配子体自交不亲和植物中,Ｓ位点编码一类核酸酶,即Ｓ核酸酶（Ｆｉｇ．１）,控制ＳＩ在花柱中的表达,但是与花粉自交不亲和性的表达无关。后者可能由与Ｓ核酸酶不同的基因控制,这种基因常被称为花粉Ｓ基因。它是目前了解显花植物花粉识别生化和分子机理的关键。近来;通过对影响花粉ＳＩ表达突变体的分子遗传分析提出了一个花粉Ｓ基因产物如何与Ｓ核酸酶相互作用完成自体和异体花粉识别过程的模型（Ｆｉｇ．２）。另外,描述了两个在金鱼草中克隆花粉Ｓ基因的方法,即Ｓ位点选择性的转座子标记和图位克隆。     

受精Ca^2＋波动信号

迄今为止研究的所有动物卵子在受精时都有一个共同的现象,即胞质游离Ca~(2 )浓度升高,从静息状态的40—100nmol/L升高至600—1000nmol/L水平,并以波的形式从精卵结合点向卵子的其他部位扩展。在哺乳类受精诱导的Ca~(2 )浓度变化表现为有规律的跃升,即Ca~(2 )波动或振荡。受精诱导的Ca~(2 )波动可持续达数小时之久,直至原核形成时才消失。小鼠卵受精诱导Ca~(2 )波动的特点是:第1峰高而宽,峰值达617.7±143.5nmol/L,峰宽220.1±43.3sec。将第1峰放大后可观察到许多锯齿状小峰(图1)。第1峰之后Ca~(2 )波动的