作为疫苗和疫苗载体的减毒细菌

减毒细菌不但能作为疫苗,而且已被证实是理想的疫苗载体,尤其是在研制基因工程疫苗方面显现了独特的优越性,减毒细菌作为载体可激发强烈的体液免疫、细胞免疫和黏膜免疫。主要就沙门氏菌、志贺氏菌、李斯特菌和BCG等细菌作为疫苗和疫苗载体的研究进展进行综述,以期为新型疫苗的研制奠定基础。     

下调bla表达提高pcDNA3.1+在重组菌中的稳定性

高拷贝质粒pcDNA3.1＋在鼠伤寒沙门氏菌S1.7207中不稳定。通过去除pcDNA3.1＋中氨繁青霉素抗性基因（bla基因）的启动子序列,仅保留其核糖体结合位点,构建了新质粒pmcDNA3.1＋。SL7207（pmcDNA3．1＋）在岔与不含氨苄青霉素的培养基中均能稳定保留其质粒。SI.7207（pmcDNA3．1＋）的β-内酰胺酶活力明显低于SL7207（pcDNA3．1＋）,且接种SL7207（pmcDNA3．1＋）的液体培养基中的氨苄青霉素不易被降解。腹腔接种小鼠7d后,脾脏中SL7207（pmcDNA3．1＋）的质粒稳定性仍保持在95％以上,而SL7207（pcDNA3．1＋）免疫后第3d99％丢失质粒。所以,通过降低bla基因的表达水平,为解决高拷贝质粒在沙门氏菌中的稳定性问题提供了新方法。     

下调bla表达提高pcDNA3.1+在重组菌中的稳定性*

高拷贝质粒pcDNA3.1+在鼠伤寒沙门氏菌SL7207中不稳定。通过去除pcDNA3.1+中氨苄青霉素抗性基因(bla基因)的启动子序列,仅保留其核糖体结合位点,构建了新质粒pmcDNA3.1+。SL7207(pmcDNA3.1+)在含与不含氨苄青霉素的培养基中均能稳定保留其质粒。SL7207(pmcDNA3.1+)的β-内酰胺酶活力明显低于SL7207(pcDNA3.1+),且接种SL7207(pmcDNA3.1+)的液体培养基中的氨苄青霉素不易被降解。腹腔接种小鼠7d后,脾脏中SL7207(pmcD     

"发酵工程"课程教学的思考与探索

发酵工程是微生物工程、生物制药、生物工程、生物技术等专业的重要专业课,课程内容丰富、涉及面宽.我们通过对教学内容、教学方式与手段以及考试方式等方面的改革和探索,取得了较好效果.     

肠炎沙门菌肽脯氨酰顺反异构酶SlyD的基因敲除、表达及酶学特征

【目的】以肠炎沙门菌肽脯氨酰顺反异构酶SlyD为对象,构建基因缺失株及表达纯化该蛋白,为研究其在肠炎沙门菌致病性与应激等方面的作用奠定基础。【方法】参考Gen Bank登录的肠炎沙门菌基因组序列设计用于slyD基因敲除及原核表达的特异引物,运用自杀质粒介导的同源重组技术对肠炎沙门菌C50041 slyD基因进行敲除,构建C50041ΔslyD缺失株;原核表达SlyD蛋白,通过α-糜蛋白酶耦联法对其PPIase活性进行测定;利用生物信息学相关软件,分析SlyD蛋白的氨基酸序列及功能域。【结果】PCR鉴定与测序结果证明成功构建了肠炎沙门菌C50041ΔslyD缺失株,其生长特性与野生株基本一致;SDS-PAGE及PPIase活性分析表明,获得了具有生物活性的可溶性SlyD蛋白;生物信息学分析显示SlyD蛋白由FKBP样肽脯氨酰顺反异构酶结构域、分子伴侣功能域和金属结合区域3个功能区域组成。【结论】成功获得了肠炎沙门菌C50041ΔslyD缺失株和具有PPIase活性的重组SlyD蛋白。     

嵌合鞭毛蛋白在大肠杆菌BL21(DE3) 和沙门菌SL5928中的表达与组装分析

鞭毛蛋白根据能否组装可以表达为单体或多聚体。目前,关于它们之间的区别少有报道。文中,将重组质粒pET-fliC/M2e2分别导入大肠杆菌BL21(DE3) 和沙门菌SL5928中来表达嵌合鞭毛蛋白mfliC/M和pfliC/M,然后分析它们的组装特性。SDS-PAGE结果表明,两重组菌成功表达了嵌合鞭毛蛋白。透射电镜观察显示,在重组大肠杆菌表面未见鞭毛,而重组沙门菌表面呈现鞭毛。将嵌合蛋白纯化后,圆二色谱 (Circular dichroism,CD) 分析表明,两者的CD信号明显不同,pfliC/M的CD信号与野生型鞭毛蛋白一致,而mfliC/M基本上没有CD信号出现。动态光散射分析表明,mfliC/M的聚集程度明显低于pfliC/M。将嵌合蛋白转染小鼠腹腔细胞3 h后,两者均能诱导产生IL-1β,但mfliC/M组高于pfliC/M组。以上结果对于鞭毛蛋白表达形式的选择具有重要的参考价值。     

应用数据包络分析方法评价医院临床科室相对效率的探讨

目的 利用数据包络分析方法评价厦门市某三级综合性医院临床科室的配置效率，为医院管理者提供有益的决策信息。方法 在Excel的规划求解模块上进行数据包络分析计算，得出各临床科室的相对效率得分。结果 数据包络分析有效单元为15个，其余单元不同程度存在产出不足的现象。结论 大型综合性医院在自身的生存和发展中，应注重以资源调整和优化配置为主的内涵式发展。     

以减毒沙门氏菌运送的H5亚型禽流感病毒DNA疫苗的构建及其对小鼠的免疫原性

根据GenBank中已发表的H5亚型禽流感病毒HA基因序列,设计一对引物,通过RTPCR扩增鹅源H5亚型高致病力禽流感病毒HA基因,测序确认后,将其克隆入真核表达载体pVAX1和asdpVAX1得到重组表达载体pVAX1HA和asdpVAX1HA。将重组质粒转染P815细胞,经间接免疫荧光试验证实,HA基因在细胞内得到了瞬时表达。进一步将重组质粒转化减毒鼠伤寒沙门氏菌X4550得到两种运送DNA疫苗的重组沙门氏菌X4550（pVAX1HA）和X4550（asdpVAX1HA）,以1×109CFU/只的剂量两次口服免疫BALB/c小鼠,免疫小鼠不仅可以检测到HA特异性的血清抗体应答,而且还能抵抗稳定表达H5亚型禽流感病毒HA基因的P815肥大细胞瘤的攻击,说明该运送DNA疫苗的减毒沙门氏菌系统在体内能够成功释放所携带的质粒,并且能够刺激机体产生保护性免疫应答。     

鸡γ-干扰素在杆状病毒系统中的表达

目的：获得具有生物学活性的重组鸡γ-干扰素（ChIFN-γ）。方法：应用RT-PCR方法扩增ChIFN-γ基因cDNA,将其克隆入杆状病毒表达系统的转移载体pFastBac1,构建重组质粒pFast-ChIFN-γ,通过位点特异性转座,将ChIFN-γ基因整合到Bacmid穿梭载体中,构建重组质粒pBac-ChIFN-γ并转染昆虫细胞Sf9,采用间接免疫荧光试验（IFA）、ELISA试验鉴定重组ChIFN-γ的表达,通过细胞病变抑制法检测重组蛋白的抗病毒活性。结果：IFA、ELISA与细胞病变抑制试验结果显示,重组ChIFN-γ在杆状病毒系统中获得表达,其抗病毒活性达5×103～1×104U/mL。结论：重组ChIFN-γ的获得为其开发应用提供了重要的生物材料。     

结核分枝杆菌Rv1886c的原核表达及其免疫生物学特性

【目的】Rv1886c基因编码的Ag85B是结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,M.tb)感染早期的分泌蛋白,本研究对其所诱导的免疫应答特性进行了探索。【方法】对Ag85B进行原核表达和鉴定,并通过夹心ELISA、间接ELISA及ELISPOT方法测定其诱导的细胞免疫和体液免疫应答水平。【结果】SDS-PAGE及Western blot鉴定结果表明,以包涵体形式表达的Ag85B蛋白,经变性、复性后能与结核病人的抗血清及免疫重组李斯特菌LM-Ag85B的小鼠抗血清发生特异性反应,表明His-Ag85B融合蛋白具有较好的免疫活性。将纯化的Ag85B蛋白皮下免疫C57BL/6小鼠,夹心ELISA的测定结果表明,Ag85B蛋白免疫组诱导小鼠产生的特异性IFN-γ水平显著高于IL-4的水平(P0.001),呈现Th1型细胞免疫应答趋势;以结核菌素PPD作为包被抗原,通过间接ELISA测定的血清抗体效价达到1∶6400,表明Ag85B也能诱导有效的体液免疫应答。此外,以尾静脉途径初次免疫小鼠42天时,ELISPOT测定结果显示,结核分枝杆菌H37Rv诱导小鼠产生Ag85B240-259特异性的IFN-γ水平极显著高于卡介苗(BCG)免疫组(P0.001)。【结论】Ag85B蛋白能激发小鼠产生较强的Th1型细胞免疫应答和较好的体液免疫应答;BCG单次免疫后诱导小鼠产生的Ag85B特异的细胞免疫应答水平较低。本研究为揭示结核分枝杆菌的致病机理、新型疫苗的研制和早期诊断试剂的开发奠定了基础。