肠炎沙门菌肽脯氨酰顺反异构酶SlyD的基因敲除、表达及酶学特征

【目的】以肠炎沙门菌肽脯氨酰顺反异构酶SlyD为对象,构建基因缺失株及表达纯化该蛋白,为研究其在肠炎沙门菌致病性与应激等方面的作用奠定基础。【方法】参考Gen Bank登录的肠炎沙门菌基因组序列设计用于slyD基因敲除及原核表达的特异引物,运用自杀质粒介导的同源重组技术对肠炎沙门菌C50041 slyD基因进行敲除,构建C50041ΔslyD缺失株;原核表达SlyD蛋白,通过α-糜蛋白酶耦联法对其PPIase活性进行测定;利用生物信息学相关软件,分析SlyD蛋白的氨基酸序列及功能域。【结果】PCR鉴定与测序结果证明成功构建了肠炎沙门菌C50041ΔslyD缺失株,其生长特性与野生株基本一致;SDS-PAGE及PPIase活性分析表明,获得了具有生物活性的可溶性SlyD蛋白;生物信息学分析显示SlyD蛋白由FKBP样肽脯氨酰顺反异构酶结构域、分子伴侣功能域和金属结合区域3个功能区域组成。【结论】成功获得了肠炎沙门菌C50041ΔslyD缺失株和具有PPIase活性的重组SlyD蛋白。     

短柄草柄锈菌在感病寄主二穗短柄草上发育过程的组织学研究

本研究采用荧光染色和荧光显微镜技术,系统研究了短柄草柄锈菌Puccinia brachypodii (分离系F-Co和K-Ki)在感病二穗短柄草Brachypodium distachyon自交系Bd21-3叶片中的发育过程。荧光显微镜观察结果表明,接种12-18 h时,病原菌通过芽管侵入短柄草叶表皮气孔后形成气孔下囊,产生初生菌丝并形成吸器母细胞,进而侵入植物细胞形成吸器;接种24-48 h后,病原菌初生菌丝分支并形成次生菌丝;接种72 h后,短柄草锈菌开始形成菌落。F-Co的发育过程快于K-Ki,在120-216 h时,F-Co的菌落扩展面积明显高于K-Ki。本研究证实F-Co、K-Ki和二穗短柄草均为亲和互作。     

莠去津降解菌泛基因组测序及比较基因组分析

Arthrobacter aurescens TC1和Pseudomonas sp. ADP是目前莠去津降解菌的模式菌株,筛选出Microbacterium sp.HBT4,旨在挖掘这3株不同种属细菌基因组间生物学信息的异同,并预测重要基因。通过Illumina Hiseq 4000测序平台采用DNA小文库制备和测序技术,进行了泛基因组测序,使用相关软件进行基因组组分分析、基因功能注释、基因间变异检测和比较基因组学分析,将分离得到的微杆菌HBT4与模式菌株进行核苷酸组成、共线性及菌株间变异差异分析。得到该菌株基因组大小约为3.53Mb,预测到菌株HBT4编码基因3 397个、重复序列含量为1.33%、非编码RNA 63个,通用数据库基因功能注释共3 324个,专用数据库基因功能注释共1 149个,通过菌株间差异变异分析发现SNP、Small InDel和水平转移基因,未发现结构变异基因,获得该菌株特有基因中GO注释到的基因在细胞组分、分子功能和生物学进程中的数量和比例,从KEGG代谢通路富集图中发现特有基因编码的二氢硫基赖氨酸残基琥珀酰转移酶位于三羧酸循环中α-酮戊二酸和琥珀酰辅酶A的代谢通路之间。获得3个菌株核心基因组与非必需基因组比例分布、系统进化树和共线性关系,发现三者之间共有基因家族986个、菌株HBT4特有基因家族1 171个。得到的菌株HBT4与两株模式菌株相比,其基因家族之间既有相同之处,又有较大差异。     

壳聚糖及其改性材料对骨髓基质细胞的作用

壳聚糖是一种广泛应用的生物可降解材料,该论文研究了几种与壳聚糖相关的材料对骨髓基质细胞生长和分化的作用,主要实验方法是在材料表面培养骨髓基质细胞并对其进行诱导促使其向成骨细胞方向分化。通过对细胞生长和分化情况的观察和测定,对几种材料与骨髓基质细胞的亲和性作出了评价。另外,通过ELISA法测定了细胞外基质分子在材料上的吸附量,测量了各材料的表面接触角以研究细胞在材料表面的铺展和增殖。结果表明尽管壳聚糖本身与骨髓基质细胞并不具有很好的亲和性,但通过与明胶混合,壳聚糖的生物相容性得到了明显提高,是很有应用前景的骨修复材料。     

保妇康栓联合小剂量雌激素对老年阴道炎血清雌激素水平及生活质量的影响

目的:探讨应用保妇康栓联合小剂量雌激素治疗老年阴道炎患者的临床疗效及其对血清雌激素水平和生活质量的影响。方法:选择我院于2017年1月-2019年3月收治的老年阴道炎患者96例,按随机数字表法将其分为研究组(n=48)与对照组(n=48)。对照组应用高锰酸钾进行冲洗消毒加已烯雌酚片治疗,研究组在此基础上应用保妇康栓治疗。观察两组治疗效果和治疗前后孕酮(P)、雌二醇(E_2)、黄体生成激素(LH)及卵泡刺激素(FSH)变化以及SF-36生活质量量表评分变化。结果:研究组阴道分泌物异常、外阴瘙痒或灼热、阴道黏膜萎缩症状消失时间短于对照组,总有效率高于对照组(P0.05)。治疗后两组患者血清雌激素水平与SF-36量表各子项评分均较治疗前有改善,且研究组P、LH及FSH水平低于对照组(P0.05),SF-36量表中的总体健康、社会功能、生理功能、躯体疼痛、精神健康、活力评分高于对照组(P0.05)。结论:在小剂量雌激素基础上联合保妇康栓治疗可有效提升老年阴道炎的临床有效率,改善患者的雌激素水平,快速缓解阴道分泌物异常、外阴瘙痒或灼热、阴道黏膜萎缩症状的同时还可提高患者的生活质量,疗效令人满意,具有较好的临床价值。     

山苍子叶内生真菌的纯化与鉴定

本研究选用PDA培养基,通过组织块分离法从山苍子叶中分离得到两株内生真菌。对照真菌鉴定手册,根据菌株和菌丝体形态学特征,并给合ITS区段的碱基序列分析,鉴定两株内生分别属于顶孢霉属和芒果球座菌属。     

高原鼠兔低氧诱导因子- 1α的初步研究

Hypoxia-induced factor-1 plays a key role during the cell hypoxia trausduction. Hypoxia induced factor-1α (HIF-1α) is a functional subunit of hypoxia-indueed factor-1. Plateau pika ( Ochotona curron/ae), which is a Qinghai-Tibet plateau native animal lived above 3 000 m, has high ratio of oxygen utilization to adapt to plateau hypoxia environments. One fragment of the coding re-gion of eDNA sequence of plateau pika HIF-1α was obtained by RT-PCR technique using a degeneracy PCR primer based on previ-ously reported eDNA sequence in human, cattle, house mouse and Norway rat HIF-1α gene. It was directly inserted into the vector pMD18-T. DNA sequencing proved that it was highly homology with human (91%), cattle (91%), house mouse (89%) and Nor-way rat 89%) HIF-1α gene. The study provides basic important information for the HIF-1α cDNA whole sequence cloning of pla-teau pika and its functional study.