大鼠瘦素基因重组腺相关病毒的构建及在原代神经元细胞中的过表达

目的构建携带大鼠瘦素(leptin)基因的重组腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV),并鉴定其在原代鼠神经元细胞中介导的瘦素过表达,为肥胖症基因治疗研究奠定实验基础。方法提取大鼠脂肪组织总RNA,利用RT-PCR技术,获取目的基因瘦素cDNA,通过重组DNA技术,得到瘦素cDNA与pGEM-T载体的重组质粒,阳性重组子用PCR及测序分析鉴定。用Spe I和EcoR V双酶切将pGEM-Leptin中的瘦素基因片段切出,再克隆到AAV2表达质粒pTR-UF22中,构建瘦素重组AAV2载体pAAV2-CBA-leptin。以pDG作为辅助质粒用HEK293细胞包装AAV2-CBA-Leptin,并用一步重力流柱法纯化病毒,由荧光定量PCR测定病毒基因组DNA的拷贝数即为病毒滴度。然后将AAV2-CBA-Leptin及对照病毒AAV2-CBA-EGFP感染大鼠原代神经元细胞,分别用免疫染色和Western blotting鉴定外源基因在神经元的表达。结果测序证实瘦素基因与GenBank提供的原始序列完全一致。重组载体经酶切鉴定与预期结果完全一致,HEK293细胞包装病毒效果良好,得到滴度为1.5×1012vg/mL纯化的重组瘦素病毒AAV2-CBA-Leptin。Western blotting检测显示AAV2-CBA-Leptin能介导瘦素在大鼠神经元细胞中过表达,并随着病毒量的增加而增强。AAV2-CBA-EGFP感染鼠神经元细胞5d后95%左右的细胞有明显的绿色荧光,免疫染色和DAPI核酸染色显示荧光细胞均为神经元而神经胶质细胞无荧光。结论成功构建并包装了瘦素重组AAV2病毒并可介导瘦素在神经元细胞中高效、特异表达,从而为研究瘦素在中枢神经系统控制体重和糖尿病等方面的功能及基因治疗研究打下基础。     

增强UV-B辐射对小麦TaRAN1蛋白分布与定位的影响

以增强UV-B(10.08 kJ.m-2.d-1)辐射后的小麦根尖细胞为材料,采用间接免疫荧光标记技术,利用激光共聚焦扫描显微镜,观察分析小麦根尖分裂期细胞Ran蛋白在分裂周期的分布及形态变化。研究结果显示,正常细胞中,Ran蛋白在细胞分裂间期主要定位于核膜周边,在后期定位于赤道板上和纺锤体上,末期又回到子细胞核膜周边;增强UV-B辐射处理后,在细胞分裂间期和前期有点状荧光分布在核膜的周围;中期和后期点状荧光分布在细胞质中;在末期部分点状荧光又回到核膜的周围,部分仍分散在核内,且出现落后染色体、染色体桥、不均等分裂等染色体畸变类型和异常分裂现象。     

辐照对水溶液中亚硝酸盐降解效果研究

以亚硝酸盐水溶液为研究对象,研究了辐照剂量、亚硝酸盐初始浓度、Vc和NaCl含量对亚硝酸盐降解效果的影响.结果表明,辐照能有效降低水溶液中亚硝酸盐含量,亚硝酸盐降解率与辐照剂量呈正相关,与初始浓度呈负相关,Vc对辐照降解亚硝酸盐具有协同作用,NaCl对辐照降解亚硝酸盐具有抑制作用.亚硝酸盐水溶液经辐照后,硝态氮和铵态氮均有一定的增加,当辐照剂量为10.55 kGy,初始浓度为100 mg· L-1时,硝态氮含量由14.857 mg·L-1增加到17.270 mg·L-1,铵态氮含量由0.013 mg·L-1增加到0.041 mg·L-1.     

铜绿假单胞菌氨基糖苷类修饰酶基因探讨

目的了解浙江省丽水地区铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,Pa)临床分离株中氨基糖苷类修饰酶(aminoglycoside-modifying enzymes,AMEs)基因存在状况。方法从分离的40株Pa中,用微量稀释法测定其对3种氨基糖苷类抗生素的敏感性,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析AMEs基因{aac(3)-Ⅱ、aac(6')-Ⅰ、aac(6')-Ⅱ、ant(3")-Ⅰ、ant(2")-Ⅰ}类型。结果40株Pa分离株中ant(2")-Ⅰ和aac(6')-Ⅱ基因阳性率分别为52.5%和45.0%,未检出aac(3)-Ⅱ、aac(6')-Ⅰ、ant(3')基因类型。结论丽水地区耐氨基糖苷类抗生素的铜绿假单胞菌存在ant(2")-Ⅰ和aac(6')-Ⅱ基因,且Pa对氨基糖苷类抗生素耐药严重,应注意对其进行临床检测和监控。     

凋落物和根系输入对南亚热带季风常绿阔叶林土壤养分的影响

植被凋落物和根系输入在调节森林土壤元素生物地球化学循环中扮演着关键作用。目前仍然不清楚凋落物和根系输入对热带原始林土壤主要元素含量的调控作用。针对该研究现状,以中国南亚热带季风常绿阔叶林为研究对象,通过开展凋落物与根系输入改变的控制试验（6个处理,每处理4次重复：对照、凋落物加倍、凋落物去除、断根、断根+凋落物加倍、断根+去除凋落物）,探讨了凋落物和断根处理对土壤可溶性离子、土壤酸中和能力（ANC）和阳离子交换量（CEC）的短期影响。凋落物与根系处理半年后的结果显示：（1）凋落物去除与加倍处理都显著增加了0-40 cm土壤NO₃^-含量,并且凋落物去除效应大于添加效应;去除凋落物增加了表层土壤（0-20 cm） Ca²⁺、Mg²⁺、Na⁺的含量。（2）断根处理显著增加0-40 cm土壤NO₃^-和表层土壤Ca²⁺、Mg²⁺含量。（3）断根和去除凋落物交互处理显著增加了0-40 cm土壤NO₃^-和表层土壤Ca²⁺、Mg²⁺、K⁺含量,产生了叠加效应。（4）凋落物和断根处理并没有改变土壤pH,但降低了土壤酸中和能力（除凋落物加倍外）,其降低的原因主要与阳离子交换量的降低和NO₃^-含量的增加有关。这些结果表明,土壤养分离子的可利用性（尤其是NO₃^-和Ca²⁺、Mg²⁺）和酸缓冲能力对凋落物和根系输入改变响应敏感,森林植物及其凋落物对土壤养分保留和缓冲性能具有重要调节作用。在人为干扰和气候变化加剧背景下,该研究可为森林生态系统可持续管理提供重要的理论参考。此外,植被凋落物和根系输入改变引起的长期生态学效应仍值得进一步关注。     

从典型硝化细菌到全程氨氧化微生物：发现及研究进展

生物硝化过程在全球氮循环中起关键性作用,被认为由氨氮氧化成亚硝酸盐和亚硝酸盐氧化成硝酸盐两个步骤组成,分别由氨氧化微生物(Ammonia oxidizing microorganisms,AOM)和硝化细菌(Nitrite oxidizing bacteria,NOB)催化完成。AOM包括氨氧化细菌(Ammonia oxidizing bacteria,AOB)和氨氧化古菌(Ammonia oxidizing archaea,AOA),AOB与AOA分布广泛,两者的相对丰度和氨氮浓度密切相关。2015年底,3个硝化螺菌属(Nitrospira)谱系Ⅱ的NOB被证实含有AOM的特征功能酶,包括氨单加氧酶(AMO)和羟胺脱氢酶(HAO),并证明NOB同时具有氨氧化和亚硝酸盐氧化的能力,命名为全程氨氧化微生物(Complete ammonia oxidizer,Comammox)。根据AMO的α亚基基因amoA的相似性将Comammox分为两大分支clade A和clade B。它们广泛分布于自然环境和人工系统,包括土壤(稻田、森林)、淡水(湿地、河流、湖泊沉积物、蓄水层)、污水处理厂和自来水厂等。本文综述了Comammox的发现及其最新的研究进展,并展望了Comammox作为氮循环关键功能菌群的研究方向和应用前景。     

单操作孔电视胸腔镜手术对老年孤立性肺结节患者肺功能和免疫球蛋白的影响

目的:探讨单操作孔电视胸腔镜手术(VATS)对老年孤立性肺结节(SPN)患者肺功能和免疫球蛋白的影响。方法:回顾性分析2016年2月～2019年1月期间南京医科大学附属无锡人民医院收治的78例老年SPN患者的临床资料。根据手术方式的不同将患者分为对照组(n=43)和研究组(n=35),对照组给予传统多孔VATS肺结节切除术治疗,研究组给予单操作孔VATS肺结节切除术治疗,比较两组患者临床指标、肺功能、免疫球蛋白、视觉疼痛模拟评分量表(VAS)、并发症以及复发情况。结果:两组手术时间比较无差异(P0.05),研究组住院时间短于对照组,术后引流量、住院费用、术中出血量均少于对照组(P0.05)。两组均未见严重的并发症,且两组均无复发病例。两组术后1个月第1 s用力呼气容积(FEV1)、每分钟最大通气量(MVV)、用力肺活量(FVC)均下降,但研究组高于对照组(P0.05)。两组术后3 d免疫球蛋白A(Ig A)、免疫球蛋白M(Ig M)、免疫球蛋白G(Ig G)均下降,但研究组高于对照组(P0.05)。术后1 d、3 d、5 d研究组VAS评分较对照组降低(P0.05)。结论:单操作孔VATS治疗老年SPN,可有效改善围术期指标,提高免疫力,减轻肺功能损伤,且安全性较好,临床应用价值较高。     

CD8~+ T细胞在系统性硬皮病组织纤维化中的作用

系统性硬皮病是一种累及皮肤和黏膜组织、内脏器官,引起组织纤维化和硬化性的慢性结缔组织病,主要分为局限肢端型和弥漫型,对患者身心健康及生活质量造成严重影响。其病因及发病机制仍在不断研究过程中,较为公认的结论包括CD8+T细胞参与调控成纤维细胞中胶原表达异常与硬皮病的发病相关,其中白介素13介导的CD8+T细胞参与的皮肤纤维化过程得到多方验证。本综述旨在总结和讨论CD8+T细胞在系统性硬皮病皮肤及皮下组织纤维化过程中的角色和作用机制。     

日光温室秋冬茬番茄果实发育期的适宜夜温

为了明确秋冬季节夜温对设施栽培中果实发育期番茄的影响,在昼温相同情况下,利用自制的自然光照生长室,设定自然夜温(CK)、14、16、18℃4个夜温处理,相应的实测值分别为13.1、13.4、14.7、16.3℃,研究夜温控制对番茄植株的生理响应、光合作用、物质积累和产量的影响.结果表明:CK番茄植株受到部分时段的低温胁迫,膜系统受到破坏,导致干物质积累最少,前期几乎没有产量(成熟果仅每株28 g).与CK相比,14℃夜温处理的单株干物质积累显著增加,前期产量为每株304 g,总产量(包括未成熟果)显著增加58%;18℃夜温处理的植株净光合率显著增加10.6%~12.5%,单株干物质积累显著增加26%,开花时间提前4~12 d,单株采收果实数为3.8个,单果质量显著增加42.7 g,前期产量为每株476 g,总产量增加101%;16℃处理的各项指标介于18℃和14℃处理之间.表明昼温22℃时,13.4℃是秋冬季节华北设施番茄生长的低夜温极限,理想夜温应控制在16.3℃以上.     

控(微囊)藻鲢、鳙排泄物光能与生长活性

利用叶绿素荧光技术,通过原位培养滤食性鱼类鲢(Hypophthalmichthys molitrix)、鳙(Aristichthys nobilis)摄食微囊藻(Microcysis)后的排泄物,研究鲢、鳙滤食对藻类光能及生长活性的影响。结果表明,微囊藻经鲢、鳙滤食后,排泄当天,其叶绿素荧光参数PSⅡ最大光能转化效率(Fv/Fm)、PSⅡ潜在光合活性(Fv/Fo)、PSⅡ实际光能转化效率(Yield)和光合电子传递速率(ETR)显著低于对照组(P0.05),而光化学猝灭(qP)和非光化学猝灭(NPQ)显著高于对照组(P0.05)。随后,微囊藻的光合活性逐渐恢复,鲢、鳙组的Fv/Fm、Fv/Fo、Yield和qP分别在第3天和第5天开始呈上升趋势,至实验结束时显著高于对照组,其中鲢组高于鳙组。而NPQ呈下降趋势,第13 d极显著低于对照组(P0.01)。原位培养期间,鲢、鳙组藻细胞密度和叶绿素a(Chl a)浓度呈增长趋势,且鲢组明显高于鳙组;鳙组藻类游离胞外多糖含量增长幅度高于鲢组。实验结束时,鲢、鳙组浮游藻类总生物量分别为对照组7.78、6.55倍,绿藻(Chlorophyta)和硅藻(Bacillariophyta)相对生物量增加,但微囊藻贡献率达93%以上。相关性分析显示,鲢组藻细胞密度、Chl a浓度和胞外多糖含量与Fv/Fm、Fv/Fo、Yield、ETR、qP均极显著正相关(P0.01),而与NPQ呈极显著负相关(P0.01)。鳙组藻细胞密度、Chl a浓度和胞外多糖含量仅与ETR呈极显著正相关(P0.01),与NPQ呈极显著负相关(P0.01)。可见,鲢、鳙单次滤食未对微囊藻造成生理上的致命损伤,藻类由于超补偿生长,其光合及生长活性在短期恢复并显著增强,有潜在加速水体富营养化可能,鲢、鳙增殖放流以控制蓝藻水华的措施值得商榷。