SARS冠状病毒囊膜E蛋白的重组表达与单克隆抗体制备

从基因库中调取SARS冠状病毒囊膜E蛋白基因序列,用连接PCR方法合成完整片段。测序确认后与人免疫球蛋白（IgG）序列Fc段连接并克隆至原核表达载体pPRO EX Hta中。从SDS—PAGE凝胶中回收表达产物后免疫BALB／c小鼠,经融合、筛选制备特异性单克隆抗体（mAb）。连接PCR扩增出231bp的DNA,测序结果与GenBank公布的序列一致,与人IgG序列Fc段基因连接后克隆至原核表达载体,在大肠杆菌中获得较好表达。表达产物经SDS—PAGE后,在相对分子质量（Mr）约37000处可见1条明显的诱导表达条带。Western印迹的结果表明,该电泳带与SARS患者的恢复期血清呈特异性免疫反应,,从SDS—PAGE凝胶中回收表达产物并免疫BALB／c小鼠,制备出2株抗E蛋白的mAb。这些mAb与SDS—PAGE凝胶上Mr约为37000的蛋白带也呈现很强的免疫反应。所获得的重组表达E蛋白及特异性mAb为进一步建立SARS病毒感染早期诊断的方法奠定了基础。     

应用SELEX技术筛选人类血型IgG适体的实验研究

目的:建立Rh(D)血型的IgG类抗体适体的筛选方法,为后续合成适体并进行新生儿溶血病的防治研究奠定基础。方法:利用SELEX技术,构建含有52个随机序列的单链DNA文库,利用硝酸纤维素膜法筛选与IgG类抗体分子高亲和力结合的核酸分子,同时探索并优化将其扩增为双链DNA核酸库的PCR反应条件;通过膜结合实验检测核酸分子的富集效果并用凝胶阻滞实验初步测定所得核酸适体与Rh(D)血型IgG类抗体的亲和力。结果:随着筛选的进行,核酸分子的富集库向着与靶分子亲和性增强的方向进化,经过了11个循环,筛选出与Rh(D)血型IgG抗体结合力较强的核酸分子,与核酸结合的IgG分子在凝胶阻滞实验中显示出阻滞带。结论:初步建立了利用SELEX技术筛选人类Rh(D)血型IgG抗体适体的方法。     

薜荔的组织培养和快速繁殖

1 植物名称薜荔(Ficuspumila),采自进口观叶小盆栽(泥炭基质)。 2 材料类别顶芽、带腋芽的茎段、叶片。 3 培养条件诱芽培养基：(B1)MS + 6-BA 2mg·L-1(单位下同)+ NAA 0.5; (B2) MS +6-BA 2 + NAA 0.5 + AC 1500;(B3)MS + 6-BA0.5+IBA0. 1;(B4)MS+6-BA 1 +IBA 0.1;(Bs)MS + 6-BA 0.5 + NAA 0.1; (B6)MS + 6-BA0.5 + NAA 2; (B7)MS + KT 1 + NAA 0.1。生根培养基：(大量元素减半)+ IBA0.1+ NAA 0.1; (R2) 1/2MS + IBA 0.5; (Rs)1/2MS+ NAA 0. 1 + AC 1 500; (P4) 1/2MS + NAA 0.1; (Rs) 1/2MS + NAA 0.05。上述各培养基均加蔗糖2％、琼脂0.75％,pH 5.8。培养温度(20±5)℃,每天光照12 h,光照度1 500～2 000 lx。     

抗生素抗性基因连锁传播的侧翼保守元件分析

抗生素在医疗、畜牧和水产养殖业的大量使用造成了环境中耐药细菌和抗性基因的日益增加,也加速了抗性基因在环境细菌间的传播扩散.本研究以环境样本直接提取的总DNA为模板,运用热不对称交错PCR (thermal asymmetric interlaced PCR, Tail-PCR)技术直接扩增抗生素抗性基因上下游序列.通过优化Tail-PCR反应程序,单循环同时扩增出tetW基因的多条侧翼序列,包括6条上游序列和9条下游序列.基于序列的生物信息学分析发现,上游包括一段反向重复序列和已知的一段tetW调节肽序列以及一个已知的插入序列,下游包括一个保守的未知序列和一个开放式阅读框架(the open reading frame,ORF)编码甲基转移酶.结果不仅发现了可能协助tetW基因传播的功能元件,也提供了一个未知侧翼序列高效和便捷的研究方法,即采用Tail-PCR技术,一组样品即能便捷获得多条侧翼序列.     

病毒受体的研究方法

1概况 病毒受体可以定义为位于宿主细胞表面能够被病毒吸附蛋白识别并与之结合,从而引起病毒感染的分子复合物,其化学本质是糖蛋白、蛋白聚糖、脂类或糖脂,大多数属于蛋白质.病毒受体可以是单体也可以是多分子复合物,具有特异性、高亲和性、饱和性、结合位点及靶细胞部位的有限性以及独特的生物学活性等[1].病毒受体是公认的引发病毒感染宿主细胞的主要决定因素,也是影响病毒宿主特异性和组织亲嗜性的决定因素之一.     

日光温室秋冬茬番茄果实发育期的适宜夜温

为了明确秋冬季节夜温对设施栽培中果实发育期番茄的影响,在昼温相同情况下,利用自制的自然光照生长室,设定自然夜温(CK)、14、16、18℃4个夜温处理,相应的实测值分别为13.1、13.4、14.7、16.3℃,研究夜温控制对番茄植株的生理响应、光合作用、物质积累和产量的影响.结果表明:CK番茄植株受到部分时段的低温胁迫,膜系统受到破坏,导致干物质积累最少,前期几乎没有产量(成熟果仅每株28 g).与CK相比,14℃夜温处理的单株干物质积累显著增加,前期产量为每株304 g,总产量(包括未成熟果)显著增加58%;18℃夜温处理的植株净光合率显著增加10.6%~12.5%,单株干物质积累显著增加26%,开花时间提前4~12 d,单株采收果实数为3.8个,单果质量显著增加42.7 g,前期产量为每株476 g,总产量增加101%;16℃处理的各项指标介于18℃和14℃处理之间.表明昼温22℃时,13.4℃是秋冬季节华北设施番茄生长的低夜温极限,理想夜温应控制在16.3℃以上.     

β-EP和胃泌素在大鼠舌下腺的免疫组织化学定位

In order to study the distribution of β-EP and gastrin immunoreactive cells in the sublingual gland, we used the Advidin Biptin-Peroxidase Complex (ABC) immunohistochemical technique to detect the expression of β-EP and gastrin in rat sublingual glands. The results show that the epithelial cells of striated ducts and interlobular ducts appeared β-EP and gastrin positive in immunoreaction and the mucosus and serous acinar cells were immunoreactive negative. The poei-tive substances were distributed in the cytoplasm with negative nuclei. These results suggest that β-EP and gastrin are ex-pressed in the epithelial cells of ducts in the rat sublingual gland, which may play an important role in the secretion and functional regulation of the sublingual gland.     

溃疡病胃窦幽门腺β-内啡肽样免疫反应细胞体视学分析

应用真彩色图象分析仪,对１５例ＤＵ、ＧＵ和Ｃｏｎ组患者,非病变区胃窦粘膜幽门腺,１５１个β－内啡肽样免疫反应细胞（β－ＥＰ细胞）的１２个参数进行检测及每组７５个单位面积（５０００μｍ２）的β－ＥＰ细胞进行计数。β－ＥＰ细胞的周长、面积、长径、短径和平均体积数值是ＤＵ组＜ＧＵ组＜Ｃｏｎ组,各组间两两相比,均呈高度显著性差异,Ｐ＜０．０１。在ＤＵ与Ｃｏｎ组、或ＧＵ与Ｃｏｎ组之间,比表面、平均截距、平均表面积和平均直径数值相比,亦呈高度显著性差异,Ｐ＜０．０１。ＤＵ组β－ＥＰ细胞数增高,与ＧＵ或Ｃｏｎ组分别相比,均呈高度显著性差异,Ｐ＜０．０１。在三组中,β－ＥＰ细胞的比表面积、平均截距、平均表面积、平均直径数值和细胞数的显著性差异率在６０％以上,周长、面积、长径、短径和平均体积数值达１００％。本文首次建立了ＤＵ、ＧＵ和Ｃｏｎ组非病变区胃窦粘膜幽门腺β－内啡肽细胞的二维和三维形态计量学参数数据,提示β－ＥＰ细胞参与了溃疡病的内分泌调控活动。     

组织学技术教学的探索与实践

组织学技术是多学科研究工作的基础。在组织学技术课程教学过程中,如何提高听课效果,使学生在以后的科研活动中能够灵活运用所学知识和技术是这门课程最关键的问题。本文就近两年我们在组织学技术教学实践过程中进行的几方面尝试作一介绍。     

骨髓小粒组织学检查压片技术探索

骨髓小粒是骨髓穿刺抽吸时组织细胞及其网络的幼稚细胞、毛细血管等组织团块，是造血微环境真实状况的反应。对骨髓小粒结构和组成研究有利于疾病的正确诊断。