GST-His-Heparinase Ⅰ双标签融合蛋白的原核表达与纯化

以pET15b-HepⅠ为模板,通过PCR技术扩增出上游合有6×His标签的HepⅠ基因序列,克隆至表达载体pGEX-4T-1。测序鉴定后,将重组表达质粒pGEX-His-HepⅠ转入E.coli BL21(DE3)感受态细菌,经IPTG诱导表达。表达产物可溶部分用GSTrap FF和HisTrap HP柱两步亲和纯化,所得产物经SDS-PAGE检测,在66 kDa和43 kDa处显示特异条带,分别与GST-His-HepⅠ和His-HepⅠ融合蛋白预期分子量相符;最终His-HepⅠ融合蛋白的比酶活为86.45 IU/mg,纯度高达99%,与仅一步亲和纯化得到的GST-His-HepⅠ融合蛋白相比,进一步提高了纯化后重组肝素酶的纯度。本研究为制备高纯度的HepⅠ提供了一种方法,对制备高安全性的LMwH和解析HepⅠ晶体结构具有重要意义。     

成年态南丰蜜橘试管嫁接育苗技术研究

为探索适合成年态南丰蜜橘[Citrus reticulata Blanco‘kinokuni’(Tanaka)H.H.Hu]的快速繁殖技术,对其试管茎尖微嫁接育苗进行研究。结果表明,最好的砧木是苦柚种子苗,以腹接方式的成活率最高。嫁接苗接种在MS+GA3 1 mg L–1+蔗糖75 g L–1的培养基中,暗培养7 d后转入光周期下培养,嫁接成活率达67.78%。不同移栽基质对嫁接苗的成活率影响不显著。嫁接苗与成年态南丰蜜橘再生芽在形态和POD、CAT及SOD同工酶分子表达上均无明显差异。这表明通过试管茎尖微嫁接技术可保持其遗传稳定性。     

抗HSV-IICP22蛋白抗原多肽抗体对ICP22定位的检测分析

ICP22作为单纯疱疹病毒进入细胞后最早表达的蛋白之一,对于病毒的复制具有重要的调节功能,由于抗原表位的同源性,使用完整的ICP22蛋白作为抗原难以获得特异性的抗体.通过氨基酸序列预测,ICP22蛋白1～36位氨基酸具有较强的抗原性,将ICP22蛋白1-36位氨基酸偶联于GTS蛋白作为抗原免疫小鼠,所制备抗体能够特异性识别具有正常生理构象的ICP22蛋白.抗体检测结果显示,ICP22不但定位于细胞核内,而且还能够形成特殊的点状结构.     

病毒受体的研究方法

1概况 病毒受体可以定义为位于宿主细胞表面能够被病毒吸附蛋白识别并与之结合,从而引起病毒感染的分子复合物,其化学本质是糖蛋白、蛋白聚糖、脂类或糖脂,大多数属于蛋白质.病毒受体可以是单体也可以是多分子复合物,具有特异性、高亲和性、饱和性、结合位点及靶细胞部位的有限性以及独特的生物学活性等[1].病毒受体是公认的引发病毒感染宿主细胞的主要决定因素,也是影响病毒宿主特异性和组织亲嗜性的决定因素之一.     

直距翠雀花中的降二萜生物碱

从直距翟雀花（Ｄｅｌｈｉｎｉｕｍ ｏｒｔｈｏｃｅｎｔｒｕｎ Ｆｒａｎｃｈ．）全草的甲醇提取物中分离得到了３个降二萜生物碱,通过ＮＭＲ,ＭＳ等波谱分析将其结构鉴定为７,１０－二羟基８,１、４,１６三甲氧基１９,２０－二去氢乌头烷（７β,８β,１４α,１６β）（１）,２０－乙基－２,３－二去氢－６,１０二羟基－７,８－二氧亚甲菜－１,１４,１６－三甲氧基乌头烷（１α,６β,１４α,１６β）（２）和翼北     

直距翠雀花中的降二萜生物碱

直距翠雀花中的降二萜生物碱 丁立生^1* 王静² 彭树林¹陈能煜^2*      

SARS病毒免疫学性状的结构基础分析

运用生物信息学技术,对SARS冠状病毒基因组及其编码区进行了全序列分析,根据其基因和推导蛋白结构特点及同源性分析,探索SARS病毒主要结构蛋白免疫学性状的结构基础及进一步进行免疫学研究的线索,为深入SARS病毒的诊断预防工作提供参考 。     

"叶绿素的提取和分离"实验的一种方法

我们以灯芯柱纸层析法为基础,进行该实验,取得了较好的效果,现介绍如下。　　具体的方法是：①取洗净、揩干的天竺葵叶片５ｇ剪碎,加８５％丙酮５ｍｌ研成匀浆;②取滤纸一张剪成２．５ｃｍ×５．５ｃｍ的长方形,从一端开始卷起,卷成柱状,卷时将两边对齐,捻紧备用;③将纸芯插入滤纸中央并立放于培养皿上,培养皿内装有四氯化碳（不用汽油）,纸芯下端浸入四氯化碳中;④用尖镊夹取研好的色素匀浆均匀堆于纸芯周围,盖上皿盖,静置观察。１５ｍｉｎ左右色素可充分扩展,分离结束。此实验方法具有以下特点：①克服了提取液中色素量少…     

高等师范院校"植物生理学实验"课程改革初探

在高等师范院校(以下简称高师)生物专业课中“植物生理学”是与中学生物特别是高中生物联系最密切的课程之一,该课程的实验教学不仅是理论课教学的重要补充,而且是培养学生操作能力、观察能力、综合分析能力和创新能力的主要     

转基因在玉米中的遗传分离与整合特性的研究

用ＰＣＲ和ＤＮＡ分子杂交方法研究了转基因Ｂｔ在３种不同方法获得的８个转化体后代中的遗传分离、整合性质及其稳定性,结果表明：（１）转基因在大多数转化体后中呈简单的孟德尔遗传;在Ｒ１至Ｒ２代,部分家系中转化体比例偏低,有的发生转基因丢失,但到Ｒ３代以后均趋于正常的孟德尔遗传方式,在群体中固定下来;（２）转基因在不同转化体中的整合类型有一定差异,但整合的位点和拷贝数都较少,且多呈串联或紧密连锁的整合;（