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| GST-His-Heparinase Ⅰ双标签融合蛋白的原核表达与纯化 | |
| 引用本文： | 刘卫超,程咏梅,邓超,丁建文,宋志新,陈敬华.GST-His-Heparinase Ⅰ双标签融合蛋白的原核表达与纯化[J].工业微生物,2014,44(5). |
| 作者姓名： | 刘卫超 程咏梅 邓超 丁建文 宋志新 陈敬华 |
| 作者单位： | 1. 江南大学药学院,江苏无锡,214122 2. 江南大学无锡医学院,江苏无锡,214122 3. 常山生化药业(江苏)有限公司,江苏常州,213149 |
| 基金项目： | 教育部新世纪优秀人才支持计划，教育部博士点基金 |
| 摘 要： | 以pET15b-HepⅠ为模板,通过PCR技术扩增出上游合有6×His标签的HepⅠ基因序列,克隆至表达载体pGEX-4T-1。测序鉴定后,将重组表达质粒pGEX-His-HepⅠ转入E.coli BL21(DE3)感受态细菌,经IPTG诱导表达。表达产物可溶部分用GSTrap FF和HisTrap HP柱两步亲和纯化,所得产物经SDS-PAGE检测,在66 kDa和43 kDa处显示特异条带,分别与GST-His-HepⅠ和His-HepⅠ融合蛋白预期分子量相符;最终His-HepⅠ融合蛋白的比酶活为86.45 IU/mg,纯度高达99%,与仅一步亲和纯化得到的GST-His-HepⅠ融合蛋白相比,进一步提高了纯化后重组肝素酶的纯度。本研究为制备高纯度的HepⅠ提供了一种方法,对制备高安全性的LMwH和解析HepⅠ晶体结构具有重要意义。 |
| 关 键 词： | 肝素酶Ⅰ GST-His双标签 原核表达 纯化 |
Prokaryotic expression and purification of GST-His-Heparinase Ⅰ double labelled fusion protein |
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| LIU Wei-chao,CHENG Yong-mei,DENG Chao,DING Jian-wen,SONG Zhi-xin,CHEN Jing-hua.Prokaryotic expression and purification of GST-His-Heparinase Ⅰ double labelled fusion protein[J].Industrial Microbiology,2014,44(5). | |
| Authors: | LIU Wei-chao CHENG Yong-mei DENG Chao DING Jian-wen SONG Zhi-xin CHEN Jing-hua |
| Abstract: | |
| Keywords: | heparinase Ⅰ GST and His tags prokaryotic expression purification |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ | |