人端粒保护蛋白hPot1的一种新选择性剪接体的克隆及鉴定

hPot1是端粒单链结合蛋白,在维持染色体末端的稳定性中发挥着重要作用。从前列腺癌细胞C4-2中提取总RNA,以反转录得到的cDNA为模板,扩增全长的hPot1 cDNA,发现hPot1基因的一种新的剪接形式。这种新的剪接形式缺失了野生型hPot1基因的第2个外显子,并且造成了读码框架的改变,使翻译提前终止,表达出一段有45个氨基酸残基的短肽。进一步检测表明,这一hPot1 mRNA新剪接体广泛存在于多种组织来源的细胞中,提示这一剪接形式可能是细胞调控hPot1功能的一种调节机制。     

含尿激酶mRNA的人胚肾培养细胞的poly(A)+RNA的提取及鉴定

人胚肾原代培养细胞经换无血清培养液后4～6天,可产生较高的尿激酶活性,从2ml细胞沉淀中(2×10~5细胞)可提取60～100μgpoly(A)~+RNA。6M尿素酸性琼脂糖凝胶电泳表明,其大小为9S～28S,以此poly(A)~+RNA为模板可用于体外翻译及反转录实验,DNA-RNA点杂交表明,此poly(A)~+RNA含有编码尿激酶的mRNA,通过Northern blot杂交实验,估计mRNA大小在1～3 kb之间,本制品可供应反转录途径获得尿激酶基因之用。