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11.
目的:克隆sFGFR1Ⅲc胞外段进行原核表达和纯化。方法:将sFGFR1Ⅲc胞外段基因转入pET3c载体后转化BL21工程菌,以包涵体形式表达胞外段。经凝胶层析法复性(复性率为20%)和肝素亲和层析纯化后得到纯度95%以上的目的蛋白。通过电泳鉴定其纯度以及MTT法检测其生物学活性。结果:成功获得大小为660bp的人sFGFR1Ⅲc基因片段,转化菌诱导表达了24kDa的sFGFR1Ⅲc胞外段并通过MTT证实它对小鼠胚胎成纤维细胞(NIH3T3)的增殖具有明显的抑制作用,其抑制FGF2引起的细胞增殖呈剂量依赖性,其中作用最为明显的是80ng/ml。结论:成功获得了高纯度的sFGFR1Ⅲc胞外段,该胞外段具备较好的生物学活性,为下一步的研究工作奠定了良好的物质基础。 相似文献
12.
以本实验室构建保存的天冬氨酸脱羧酶工程菌为研究材料,通过基因表达,对所得到的重组胞内融合表达型天冬氨酸脱羧酶蛋白进行体外复性研究,考察温度、复性液的pH、复性时间、复性液种类等因素对重组天冬氨酸脱羧酶体外复性的影响。结果表明:最佳复性液为pH8.7的Tris-HCl缓冲液,在保温时间2h,温度40℃下,复性效果最好。另外一些pH能达到8.7的缓冲液复性效果都不如Tris-HCl缓冲液。 相似文献
13.
根据Genebank报道的VEGF(NM-003376)、SEA(A28664)基因序列,对密码子进行优化,合成血管内皮细胞生长因子和超抗原基因序列,将VEGF-SEA基因片段插入质粒pET22b构建重组质粒pET22b-VEGF-SEA.重组质粒经序列分析正确,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析蛋白条带与预期一致,证明融合蛋白原核表达成功.产物经His·Bind Buffer kit试剂盒纯化,纯度达到90%,这一成果为进一步研究VEGF-SEA融合蛋白的活性及其功能,探讨超抗原抑制肿瘤生长作用奠定了基础. 相似文献
14.
载脂蛋白AI(apolipoproteinAI,apoAI)是高密度脂蛋白HDL的主要组成成分 ,流行病学研究表明apoAI的含量决定血浆中HDL的高低 ,而HDL具有胆固醇逆向转运的功能 ,起到降低冠心病发生概率的作用。通过大肠杆菌表达系统来生产apoAI的蛋白原proapoAI,蛋白的表达形式为包涵体 ,通过疏水柱进行柱上复性。同时在proapoAI和apoAI之间设计一个酸水解位点 ,通过将蛋白原proapoAI进行酸水解来得到成熟蛋白apoAI。最终得到的成熟蛋白apoAI在结构分析和脂结合特性上都与天然的apoAI相似 ,从而为该蛋白的工业生产上提供了一个良好的基础。 相似文献
15.
16.
利用稀释法、凝胶过滤、脲浓度梯度凝胶过滤3种方法研究了抗肿瘤血管抗体功能片段VH/κ的体外复性.通过考察复性液中还原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽(GSH/GSSG)比例、精氨酸浓度、pH值、洗脱速度、变性液中蛋白质浓度、凝胶过滤脲梯度长度等因素,发展了脲梯度凝胶过滤柱复性VH/κ的方法.结果表明,与传统的稀释法和柱复性法相比,脲梯度法复性获得的VH/κ的活性回收率和相对亲和力均有显著提高. 相似文献
17.
抗肿瘤血管抗体AA98功能片段VH/κ的脲浓度梯度柱复性 总被引:1,自引:1,他引:0
利用稀释法、凝胶过滤、脲浓度梯度凝胶过滤3种方法研究了抗肿瘤血管抗体功能片段VH/κ的体外复性.通过考察复性液中还原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽(GSH/GSSG)比例、精氨酸浓度、pH值、洗脱速度、变性液中蛋白质浓度、凝胶过滤脲梯度长度等因素,发展了脲梯度凝胶过滤柱复性VH/κ的方法.结果表明,与传统的稀释法和柱复性法相比,脲梯度法复性获得的VH/κ的活性回收率和相对亲和力均有显著提高. 相似文献
18.
huGM-CSF(9-127)-IL-6(29-184)融合蛋白的复性及纯化研究 总被引:1,自引:0,他引:1
利用Q Sepharose H.P.离子交换柱层析在8mol/L尿素变性条件下对huGM-CSF(9-127)-IL-6(29-184)融合蛋白进行初步纯化,然后再利用Sephacryl S-200分子筛柱层析复性及纯化后获得目的蛋白,其纯度达到95%以上。该纯化方案成功地解决了稀释复性或透析复性产物在进行Q Sepharose H.P.离子交换柱层析时目的蛋白不稳定而沉积于柱上的问题,获得了较好的复性效果,复性率达到80%以上。使用该纯化方案,1天内便可基本完成重组蛋白的复性及纯化过程,而且也便于扩大。 相似文献
19.
huGM-CSF(9-127)-IL-6(29-184)融合蛋白的复性及纯化研究 总被引:1,自引:0,他引:1
利用Q Sepharose H.P.离子交换柱层析在8mol/L尿素变性条件下对huGM-CSF(9-127)-IL-6(29-184)融合蛋白进行初步纯化,然后再利用Sephacryl S-200分子筛柱层析复性及纯化后获得目的蛋白,其纯度达到95%以上。该纯化方案成功地解决了稀释复性或透析复性产物在进行Q Sepharose H.P.离子交换柱层析时目的蛋白不稳定而沉积于柱上的问题,获得了较好的复性效果,复性率达到80%以上。使用该纯化方案,1天内便可基本完成重组蛋白的复性及纯化过程,而且也便于扩大。 相似文献
20.
目的 :获得具有生物学活性的重组人生长激素 (rhGH)。方法 :PBV -GH/DH5α菌体经超声破菌、反复洗涤后获得包涵体。将包涵体变性、复性 ,用硫酸铵盐析 ,离子交换层析和凝胶层析进行纯化。产物经SDS -PAGE、HPLC、N末端 15个氨基酸序列检测验证。结果 :终产物rhGH纯度达 98.2 % ,比活性大于 3.0IU/mg。分子量为 2 2kDa ,N末端氨基酸序列与DNA序列推导的氨基酸序列完全一致。结论 :从自构建的PBV -GH/DH5α工程菌中获得高纯度、高活性重组人生长激素。其纯化工艺为中试生产提供可靠依据。 相似文献