金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)对小鼠体内肉瘤抑制效果

以实验室建立的$180小鼠肿瘤模型为研究对象,采用腹腔注射给药,观察葡萄球菌肠毒素A（SEA）在体内抑制肿瘤的效果。实验表明,SEA抑肿瘤率为40．18％,显示对肿瘤有一定的抑制作用;能显著刺激脾脏细胞增殖,使脾指数升高至11．3mg/g;使血清和脾组织中IL-2水平分别升至69．77pg/mL和682．43pg/mL;且能诱导肿瘤组织中产生大量的CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞。结果显示,SEA在机体内对免疫功能有正向调节作用,从而在一定程度上抑制了肿瘤细胞的生长。     

超抗原融合基因VEGF-SEA的克隆、原核表达及蛋白纯化

根据Genebank报道的VEGF(NM-003376)、SEA(A28664)基因序列,对密码子进行优化,合成血管内皮细胞生长因子和超抗原基因序列,将VEGF-SEA基因片段插入质粒pET22b构建重组质粒pET22b-VEGF-SEA.重组质粒经序列分析正确,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行IPTG诱导表达,表达产物经SDS-PAGE分析蛋白条带与预期一致,证明融合蛋白原核表达成功.产物经His·Bind Buffer kit试剂盒纯化,纯度达到90%,这一成果为进一步研究VEGF-SEA融合蛋白的活性及其功能,探讨超抗原抑制肿瘤生长作用奠定了基础.     

金黄色葡萄球菌肠毒素A对H22小鼠移植瘤的抑制作用

旨在探讨金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)在KM鼠体内的抑瘤效果.建立H22荷瘤小鼠模型,将20只小鼠随机分为对照组(生理盐水)、低剂量组(15 μg/ml)、中剂量组(25 μg/ml)和高剂量组(50 μg/ml),观察肿瘤生长趋势,计算抑瘤率,通过ELISA检测IL-2的含量.结果显示,给药组肿瘤生长趋势均较对照组缓慢;对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组的抑瘤率分别为0,28.9%,34.0%,51.0%(P<0.05);血清中IL-2含量分别为58.9 pg/ml、83.6 pg/ml、91.8 pg/ml、118.1 pg/ml.金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)可抑制H22肿瘤的生长,并上调IL-2的分泌.     

EGF-SEA融合蛋白在大肠杆菌中的表达和纯化

根据基因库中查到的金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因序列和人体表皮生长因子(EGF)基因序列进行密码子优化,以适于大肠杆菌表达.人工合成SEA基因与EGF基因.将两目的基因克隆至原核表达栽体pFT22b中,经测序验证表明成功构建了重组表达质粒pET22b-EGF-SEA.将构建好的pET22b-EGF-SEA质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导进行表达;SDS-PAGE分析表明融合基因EGF-SEA在大肠杆菌BL21(DE3)中以包涵体的形式得到了高效表达,产物相对分子质量约为44kDa,与理论值大小一致.包涵体经洗涤,变性、复性后用His Bind Kit进行分离纯化,所得蛋白纯度≥95%.高纯度EGF-SEA融合蛋白的获得为进一步研究其生物学活性及肿瘤治疗奠定了基础.     

人细胞毒性T淋巴细胞TALL-104抗癌细胞活性的检测

检测人细胞毒性T淋巴细胞TALL-104对癌细胞的杀伤活性以及此杀伤活性对白细胞介素-2的依赖性,动态观察其体外增殖能力.用台盼兰拒染法计算细胞扩增倍数;用MTT法检测细胞毒杀伤活性,实时观察细胞的杀伤过程.结果表明, 在200 IU/ml IL-2刺激下,TALL-104细胞增殖能力较强;在效靶比5∶ 1,作用时间为24 h,TALL-104细胞表现出对癌细胞MCF-7和A-431较高的杀伤率分别为50.4%和69.5%;当作用时间在72 h以内,效靶比不高于10∶ 1时,杀伤率随作用时间和效靶比的增加而明显升高(P<0.05);最大杀伤率分别为79.8%(MCF-7细胞)和90.4%(A431细胞).因此,TALL-104细胞体外增殖能力较强,其细胞毒活性不严格依赖于IL-2的存在.