pSV—2neo和HPV—Ⅱ DNA共同转染NIH3T3细胞的结果

本实验将neo及HPV-11两种DNA共同转染NIH 3T3细胞,以G418抗生素作为选择剂,对诱导的转化灶进行筛选。同时还就G418对NIH 3T3细胞的毒性进行了观察。neo单独使用诱导的转化灶数为44.00/1×10~5;neo与HPV-11合用诱导的转化灶数为162.66/1×10~5。由neo转化的细胞含有neo基因,由neo和HPV-11转化的细胞内含有该两种基因。     

小鼠卵母细胞减数分裂染色体的制备

PreparationofMeioticKarytypeofMouseOocyteLiChaojunYanLeipingZhangXiranChenYifeng(BiologyDepartmentofNanjingNormalUniversity,Nanjing210097)哺乳动物的卵母细胞的减数分裂过程中存在两次自发的停滞现象,第一次是在第一次减数分裂前期的双线期,这一静止期持续很长时间,一直到动物性成熟后卵母细胞进入发有周刎,在保住腺激素的作用下,卵母细胞的第一次减数分裂才重新启动．完成第一次减数分裂后．又停滞在第二次减数分裂的中期,在椅子或化学因素刺激的作用下,完成第二次减数分裂[4]．因此,对哺乳动物的卵母细胞在一…     

喹诺酮类药物抗乙型肝炎病毒体外实验研究

本文以２．２．１５细胞株为模型,以ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、ＨＢＶＤＮＡ、细胞存活率为观察指标,综合评价了喹诺酮类药物吡哌酸（ＰｉｐｅｍｉｄｉｃＡｃｉｄ）、氟哌酸（Ｎｏｒｆｌｏｘａｃｉｎ）、环丙氟哌酸（Ｃｉｐｒｏｆｌｏｓｘａｃｉｎ）、氟嗪酸（Ｏｆｌｏｘａｃｉｎ）体外抗ＨＢＶ效果。结果表明：吡哌酸、氟哌酸、环丙氟哌酸、氟嗪酸对ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ５０％抑制浓度（ＩＤ＿（５０））分别为１１μｇ／ｍｌ、６４μｇ／ｍｌ、９３μｇ／ｍｌ、１０５μｇ／ｍｌ和１９９μｇ／ｍｌ、１１１μｇ／ｍｌ、２４μｇ／ｍｌ、２１７μｇ／ｍｌ,细胞存活率为５０％时的药物浓度（ＣＤ＿（５０））分别为２１９μｇ／ｍｌ、９０μｇ／ｍｌ、１８１μｇ／ｍｌ、１６９μｇ／ｍｌ,在所选定的用药浓度范围内不同程度抑制培养上清液及细胞内ＨＢＶＤＮＡ及其复制中间体的产生。尤其对超螺旋结构ＤＮＡ（ｓｃＤＮＡ）有不完全抑制作用。     

Reversion of malignancy in human gastric cancer MKN—45 cells through the transfection of transforming growth factor—β type Ⅱ receptor gene

Human gastric cancer MKN-45 cells which are resistant to TGF-β growth inhibition and possess TGF-β type I and type Ⅲ receptors,but not type Ⅱ receptors,have been used as a model system to reconstitute these cancer cells with TGF-β RII cDNA.The results of these experiments indicated that the reexpression of TGF-β RII gene in MKN-45 cells can restore their sensitivity to TGF-β growth inhibition,decrease their growth rate,reduce their cloning efficiency in soft agar and tumorigenicity in nude mice in stable transfectants,in comparison with their control MKN-45 cells.Among different RII transfectants,their difference in the changes of these parameters,as a result of the regain of autocrine negative growth control by TGF-β,is roughly proportional to their level of expression of transfected RII mRNA.From these data,it is concluded that the inactivation of TGF-β RII gene is related to the escape of growth control by TGF-β in MKN-45 cells.The importance of the study of the interplay of TGF-β and its receptor system in the negative growth control of gastric cancer,and possibly also of other cancers,is discussed.     

阳离子脂质体介导基因转染的最优化条件

阳离子脂质体介导基因转染的最优化条件王瓞林其谁（中国科学院上海生物化学研究所分子生物学国家重点实验室,上海２０００３１）关键词阳离子脂质体基因转染表达真核细胞阳离子脂质体转染的重要参数有：脂质体浓度和ＤＮＡ的浓度、细胞密度以及脂质体－ＤＮＡ复合物与细...     

牛磺酸上调基因1(TUG1)对肝纤维化的作用及其机制*

目的:探讨牛磺酸上调基因1(TUG1)在肝纤维化中的作用机制。方法:按照文献建立TGF-β1(5 ng/ml)刺激的活化肝星状细胞模型和经典的1%DMN(1 ml/kg/d)致大鼠肝纤维化模型,将肝纤维化大鼠和活化肝星状细胞(HSC)均分为模型对照组、阴性对照组(沉默TUG1阴性对照)、siRNA干扰组(TUG1基因沉默组)。实验结束后利用苏木精-伊红(HE)染色检测大鼠肝脏组织病理变化;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法、蛋白免疫印记(Western blot)分别测定大鼠肝组织及活化肝星状细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、TUG1、I型胶原蛋白(collagenI)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP-1)、Smad2、Smad3表达水平。结果:肝组织病理学检查显示,沉默TUG1能够明显缓解肝脏纤维化病理改变,Western blot结果显示,沉默TUG1能够显著降低大鼠肝组织和活化肝星状细胞中TUG1、α-SMA、collagenI、MMP-2、TIMP-1、Smad2、Smad3基因与蛋白表达水平(P＜0.05)。与模型对照组相比,阴性对照组的TUG1、α-SMA的蛋白与基因水平明显升高(P＜0.05)。与模型对照组和阴性对照组相比,siRNA干扰组中TUG1, α-SMA, collagenI, MMP-2, TIMP-1, Smad2 and Smad3的蛋白和基因水平显著降低(P＜0.05),而在模型对照组和阴性对照组中TUG1, α-SMA, collagenI, MMP-2, TIMP-1, Smad2 and Smad3的蛋白和基因表达水平之间差异无显著性。结论:TUG1在肝纤维化组织和活化的肝星状细胞中显著上调,沉默TUG1可能通过抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad信号通路改善1%DMN致大鼠肝纤维化病理损伤,降低活化肝星状细胞中纤维化相关蛋白水平,发挥抗肝纤维化的作用。     

EL转染试剂转染食管鳞癌细胞的条件优化

该文探讨了关于EL转染试剂转染Hsa-miR-6743质粒至食管鳞癌细胞转染效果的影响因素。以食管鳞癌细胞株Eca-109、TE-1和Eca-9706为研究对象,GFP标记的Hsa-miR-6743为报告基因,通过倒置荧光显微镜检测荧光信号优化转染试剂和质粒比值。结果表明,食管鳞癌细胞的种类影响EL转染试剂的转染效果,EL转染试剂在Eca-109细胞株中的转染效果最好,在另外两种细胞中转染效果不佳。在Eca-109细胞株中,转染效果最佳检测时间为转染36 h时,细胞存活情况不受转染试剂影响。EL转染试剂与Hsa-miR-6743质粒最佳转染比例范围为1:4~1:2。EL转染试剂的转染效果受细胞种类、转染试剂与质粒比值以及转染时间的影响。     

HIV-1假病毒包装的重要影响因素分析

[目的]分析影响HIV-1假病毒包装的主要因素,建立该假病毒包装的优化条件.[方法]用单因素分析对比的方法,比较了对病毒包装效果有重要影响的转染试剂、转染试剂与质粒的数量、培养基血清类型、细胞周期阶段对于病毒包装效果的影响.[结果]对45批150盘病毒包装结果分析显示,使用PEI转染试剂成本低,转染效果好,其N/P在8-40均可以产生高活性的包装病毒;用进口血清包装时,相对于国产血清结果重复性高;细胞周期处于S及G2/M期时转染质粒相对于S以及G0/G1期有较高的病毒活性.[结论]用PEI为转染试剂可以包装出高活性的病毒,包装获取高活性病毒可以通过质粒与PEI梯度比例以及血清类型构成多个组合策略来实现.     

NK细胞中过表达Livin的实验研究

目的:将携带Livin的质粒pIRES2-EGFP-Livin进行扩增,转染自然杀伤细胞(NK)及胃癌细胞株SGC-7901,并检测其在NK及胃癌细胞株SGC-7901中的表达。方法:将携带Livin基因的质粒p IRES2-EGFP-Livin进行扩增,鉴定质粒纯度与浓度;从健康人外周血中获得NK细胞,应用HP转染试剂将质粒pIRES2-EGFP-Livin转染体外培养的NK及胃癌细胞,对比分析NK及胃癌细胞株SGC-7901中基因转染效率及目的基因的表达情况。结果:用无血清培养基在体外成功的扩增大量的NK细胞;质粒提取试剂盒抽提得到大量无内毒素的质粒,质粒DNA基因序列并未发生突变,浓度和纯度较高。胃癌细胞株SGC-7901中观察到明显的质粒pIRES2-EGFP-Livin绿色荧光表达;而NK中未观察到绿色荧光表达。结论:质粒pIRES2-EGFP-Livin能使Lvin蛋白表达于胃癌细胞株SGC-7901中,而在NK中未表达。     

新型PEI衍生物的体外表征及对巨噬细胞的转染效果研究

目的:以PEI1.8kDa为基础连接戊二醛合成新型可降解PEI衍生物GPEI后,研究GPEI包裹质粒转染巨噬细胞后对巨噬细胞合成蛋白及表型的影响。方法:合成GPEI后,检测了GPEI质粒聚合物的粒径及电位,并通过透射电镜观察聚合物形态,通过免疫荧光、WB、RT-PCR、Elisa及Transwell实验检测巨噬细胞RNA、蛋白、终产物水平变化及表型改变。结果:GPEI能够包裹质粒,形成100 nm左右带有正电荷的聚合物,WB、RT-PCR结果表明GPEI转染较PEI25kDa有优势(P0.05),巨噬细胞转染后6天持续分泌PGI2(P0.05)。结论:以PEI1.8kDa为基础合成的GPEI能够包裹PTGIS质粒并将其转染进巨噬细胞后对巨噬细胞的表型有明显影响。