柑桔果实中柠檬苦素类化合物的研究现状与展望

柠檬苦素类似物（ｌｉｍｏｎｏｉｄ）是三萜类的植物次生代谢产物,主要存在于芸香科和楝科植物中。柠檬苦素（ｌｉｍｏｎｉｎ）及其类似物存在于柑桔属（Ｃｉｔｒｕｓ）的多种植物中。至今已从柑桔属植物中分离出３６种柠檬苦素类似物及１７种柠檬苦素类似物配糖体。柑桔中苦味原因之一为柠檬苦素类似物。作为其代表具有强烈苦味的柠檬苦素和诺米林如果在柑桔果汁中含量超过６ｍｇ／Ｌ,那么这种柑桔用于饮食业已不适合［１］。近年来,笔者对柑桔果实中的柠檬苦素类似物的生理变化及生物合成作过系统研究［１～９］,并提出将柠檬苦素类似…     

一种优化翻译起始效率的方法

本文以人分裂细胞核抗原(PCNA)基因作为目的基因,把包括PCNA基因5′端非翻译区(5′NTR)的24bp和编码38个氨基酸114 bp的顺序插入pTZ19R,构建与LacZ’5′端的融合基因。用寡核苷酸定点突变法在PCNA 5′NTR形成SD顺序,再用PCR法在SD顺序左右两侧分别随机突变6个和7个碱基,使它们与结构基因5′端顺序自发地形成各种可能的翻译起始区(TIR)二级结构。重组质粒转化JM109(DE3),以T7 RNA聚合酶-T7启动子调控转录。对288个重组子的β-gal活性测定表明,不同重组的表达量可相差55倍,其中9个表达量不同的重组子的RNA dot blot证实它们在转录水平无明显表达差异。由此提示,该研究策略和方法能有效地改变目的基因的TIR二级结构和捕获具有高翻译起始效率的表达克隆。     

中药玄参的化学成分

从中药玄参（ＳｃｒｏｐｈｕｌａｒｉａｎｉｎｇｐｏｅｎｓｉｓＨｅｍｓｌ．）中分离得到１个新化合物：４－Ｏ－（对甲氧基肉桂酰基）－α－Ｌ－鼠李糖［４－Ｏ－（ｐ－ｍｅｔｈｏｘｙｃｉｎｎａｍｏｙｌ）－α－Ｌ－ｒｈａｍｎｏｐｙｒａｎｏｓｅ］;同时还分离到４个已知的环烯醚萜甙：爪钧草甙（ｈａｒｐａｇｉｄｅ）,爪钩草酯甙（ｈａｒｐａｇｏｓｉｄｅ）,Ｏ－甲基梓醇（Ｏ－ｍｅｔｈｙｌｃａｔａｌｐｏｌ）,士可玄参甙Ａ（ｓｃｒｏｐｏｌｉｏｓｉｄｅＡ）和１个已知的苯丙素甙：安格洛甙Ｃ（ａｎｇｏｒｏｓｉｄｅＣ）。新化合物的结构通过化学降解和光谱分析得到证明。     

大肠杆菌β-D-半乳糖苷酶的定位突变及突变酶的动力学性质

利用人工合成的寡核苷酸探针,将编码大肠杆菌β-D-半乳糖苷酶(EC3.2.1.23)的Lac Z基因中537位Glu密码子GAA分别用GAC(Asp)、CAA(Gln)、GTC(Val)来替代,替代后的突变酶的催化活性显著降低.同天然β-D-半乳糖苷酶相比,作用于ONPG底物时,突变酶的k_(cat)值分别为0.13%(Asp-537)、0.0006%(Gln-537)、0.0035%(Val-537),但它们的K_m值并无明显改变.无论是天然酶还是突变酶,底物类似物IPTG是一个强有力的抑制剂,而过渡态类似物2-脱氧-2-氨基-半乳糖和L-核糖只对突变酶有微弱的抑制作用.活化剂叠氮钠的激活作用小于β-D-半乳糖苷酶的Glu-461突变酶.催化甲醇成酯反应的能力小于天然酶.突变酶对热更不稳定.以上结果表明Glu-537残基是该酶催化反应的必需基团.     

肝癌组织中GD3合成酶的纯化

ＧＤ３合成酶是膜嵌合蛋白,定位于高尔基体,经过制作微粒体,Ｔｒｉｔｏｎ增溶、ＡＨ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ及ＧＭ３－Ｇｌａｓｓｂｅａｄｓｅ及ＧＭ３－Ｇｌａｓｓｂｅａｄｓ亲和层析等步骤,二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌组织中的ＳＴ２被纯化了３１５９７倍,得率为０．３５％。ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染色呈１条蛋白着色带,分子量为５５ｋｄ。     

重组家蚕病毒表达系统转移载体的构建和β—半乳糖苷酶的表达

本文从中国农科院蚕业研究所提供的我国家蚕核多角体病毒镇江株中获得了多角体蛋白的强启动子,用此启动子构建了家蚕病毒表达系统的转移载体。外源基因能在此启动了控制下在家蚕细胞和虫体中进行高效表达。用此载体我们首先成功地在家蚕虫体中高效表达了β－半乳糖苷酶,表达量达到５８０μｇ／条蚕,从而证实我们构建的载体是可靠的,有效的,可用于家蚕重组病毒表达外源基因的研究。     

核蛋白基本单元的合成－O－乙基－UMP－丙氨酸甲酯

在合成磷酰蛋白的模型化合物体Ｎ－（Ｏ,Ｏ－二烷基）磷酰化氨基酸（１）的基础上,首次合成了有机磷生命化学的模型化合物──核蛋白基本单元Ｎ－（Ｏ－烷基,Ｏ－核苷）磷酰化氨基酸（２）,并对上述物质进行了分离、鉴定、比较了两种模型的合成方法。这对在小分子水平上,深入研究磷酰基的参与作用和蛋白质与核酸之间的互相作用机理提供了较好的模型化合物。     

海枣曲霉β-木糖苷酶的提纯和性质

从海枣曲霉(Aspergillus phoenicis)麦麸培养物抽提液中。通过聚乙二醇6000-磷酸钾缓冲液双水相分离．相继用SephadexG-100凝胶过滤、DEAE—Sephadex A-50离子交换柱层析、羟基磷灰石吸附层析、DEAE-Sephadex A-50离子交换层析、SE—Sephadex C-50离子交换层析以及Sephadex G-50柱层析等提纯步骤,提纯到凝胶电泳均一的β-木糖苷酶。该酶的最适pH为3．5,最适温度为65 C．在pH3．5—6．5之间稳定,酶保温30分钟时的半失活温度(t1-2)为68C。酶的分子量勾95 000,等电点为4．4。Hg2-和Ag+对该酶有强烈的抑制作用。在所测定的底物中．Β-术糖苷酶仅对β-木精苷(pNP-β-Xyl)有强水解作用。其Km值为0．63mmol／L．Vmax为410 umol·min 1．Mg-1。D-木糖为β-木糖苷酶的竞争性抑制剂,其K．值为7．5mmol／L。     

甘草苷的提取纯化和药理作用研究进展

甘草是我国传统的中药材,含有多种生物活性成分,其中甘草苷是重要的黄酮类化合物,提取分离技术难度较大,总结发现甘草苷常用有机溶剂、加热回流、闪式提取、超声波辅助提取、微波辅助提取、高压脉冲电场法等方法提取,有机溶剂、大孔树脂、无机陶瓷超滤、超滤-络合萃取及反萃取技术进行分离纯化。与此同时,已有研究表明甘草苷具有抗抑郁、抗氧化、抗炎、抗病毒、解毒等药理作用,为进一步研究开发甘草苷提供了参考依据。