肿瘤细胞靶向性白细胞介素4(IL-4)融合蛋白的研究

白细胞介素 4受体 (IL-4R)特异地存在于多种肿瘤细胞表面 ,这为某些肿瘤的治疗提供了一个靶向标记。在以前的研究中 ,人白细胞介素-4(Hil-4)与白喉毒素 (DT)的融合蛋白 (DT4H)被构建 ,且它对某些肿瘤细胞系的高毒性得到了证明。但是 ,由于毒素部分的强免疫原性 ,它可以诱导人体的免疫反应。该研究中我们构建了白细胞介素 4与绿脓杆菌外毒素 (PE) 253～608aa的融合蛋白 ,并在其N端添加了 6×His标记方便纯化 ,在其C端添加了KDEL提高毒性。为了改善与IL-4R的亲和力我们将IL-4进行了环式重组 ,构建的融合毒素 ,H404K ,经DEAE$CSepharoseFastFlow及Ni-NTA纯化后 ,纯度达 90 %。纯化后的H404K与DT4H相似 ,对U251高度敏感 ,对MCF7及HepG2中度敏感 ,且我们首次证实该毒性不会被兔抗白喉毒素的多克隆抗体所抑制。这些研究表明 ,H404K与DT4H可以以一种互为替代的方式用于某些恶性肿瘤的治疗     

N端融合不同长度转位肽的重组粒酶B抑制细胞生长作用的比较

采用重组PCR法将粒酶B基因的N端信号肽和酸性二肽编码序列去除,与两种不同长度的绿脓杆菌外毒素（PE）转位肽序列分别连接,将它们插入pIND诱导表达载体,通过脂质体法与pVgRXR辅助质粒共转染HeLa细胞,建立了重组PE II-GrBa基因的诱导表达细胞系。松甾酮A诱导后Western印迹检测到目的基因的表达,间接免疫荧光观察到表达细胞出现多核巨细胞的异常形态。两种表达的PE II-GrBa融合蛋白均能够切割粒酶B的细胞内源性和外源性底物,并且使细胞生长速度减慢。其中,PE II-(aa 280358)-GrBa的底物切割能力和生长抑制作用较强。流式细胞仪分析这种抑制作用可能与细胞周期的G2期受到阻遏有关。上述结果证实了PE II-GrBa融合蛋白仍然具有抑制细胞生长的作用,并且较短的转位肽对GrBa活性的影响较小,有助于进一步优化转位肽/细胞毒性效应蛋白重组分子的结构用于肿瘤细胞杀伤。     

以SecA为靶点的新型抗绿脓杆菌药物细胞水平筛选模型的建立和应用

Sec途径(即分泌途径secretion pathway)是蛋白质转运的主要途径.其中,最为关键的组分之一是SecAATP酶,是蛋白质转运途径中的"动力泵",通过ATP的水解循环驱使蛋白质前体穿过细菌内膜,在细菌中是不可缺少的.我们推测抑制SecAATP酶活性的化合物.必然会在一定程度上抑制蛋白质的转运和分泌.通过绿脓杆菌与大肠杆菌SecA蛋白的互补作用,利用本实验室构建的高效表达SecA蛋白的基因工程菌,建立了SecA蛋白ATP酶活性抑制剂的细胞水平筛选模型.利用所纯化的绿脓杆菌SecA蛋白的ATP酶活测定体系,验证了所建立的细胞水平筛选模型具有一定的特异性.研究结果表明其中两个酯相组分在细胞水平和蛋白水平均具有活性,值得进行深入的研究.     

用生物发光法对绿脓杆菌粘附因子的研究

用生物发光法(BL)研究了绿脓杆菌(PA)表面介导及与聚苯乙烯管粘附的成分。结果说明,粘多糖(slimc Polysaccharicd,SPS)是某些粘质(slime)型菌株的一个起粘附作用的重要因子。用来自PA3的SPS预先包被聚苯乙烯管可以增加经洗涤 PA3、PA4和PA8的粘附量;PA3SPS抗血清可以抑制PA与聚苯乙烯管的粘附;N-乙酰葡萄糖胺(Gl-cNAc)具有抑制PA3SPS增加粘附的作用。     

绿脓杆菌OMP图谱分析

绿脓杆菌ＯＭＰ图谱分析哈尔滨医科大学哈尔滨１５００８６郭晓奎,马佳毓,张丽娟佳木斯医学院佳木斯１５４００２杨景云绿脓杆菌是引起院内感染的主要条件致病菌之一,对多种抗生素不敏感,有“天然耐药菌”之称。其感染症的防治十分困难。因此,绿脓杆菌流行病学研究十...     

PAK株与PA103株绿脓杆菌外毒素结构基因间的差异及其对功能的影响

对ＰＡＫ株的绿脓杆菌外毒素结构基因进行全长核苷酸顺序测定时发现：来源于ＰＡ１０３株和ＰＡＫ株的ＰＥ基因一级结构间存在差异,其中Ｔｈｒ~（１７９）（ＡＣＣ）→Ａｌａ~（１７９）（ＧＣＣ）、Ｓｅｒ~（５１５）（ＡＧＣ）→Ｇｌｙ~（５１５）（ＧＧＣ）,并有１１个同义突变,但变异并不影响白细胞介素２－绿脓杆菌外毒素融合蛋白的ＡＤＰ－核糖基化活性及其细胞毒活性。     

哈尔滨市112株绿脓杆菌的血清学分型和耐药性测定

对从临床分离的112株绿脓杆菌进行系统鉴定后,血清学分型表明:6、2和3型分别占32.14％、15.18％、15.18％,为主要流行型,共占总分离株的62.50％。耐药性测定结果为:对10种抗生素5耐以上者占69.6％。其中对多粘菌素、妥布霉素、丁胺卡那霉素三种抗生素最为敏感,敏感率分别为100％、70.6％、86.5％。     

健康人群和住院患者绿脓杆菌分离调查分析

本文调查了成都市第三人民医院住院病人,不同年龄组和不同标本PA绿脓杆菌的分离情况,经调查指出,住院病人PA分离率明显高于健康人群,而住院病人又以外科为最高。无论健康人群和住院病人,婴儿组和老年组均明显高于中青年组,尤以住院病人更为突出,故应对此类人群采取预防保护措施。不同标本分离率、健康人群和住院病人均以肛门分离率最高,分别为11.7％和21％,说明PA肠源性感染问题应引起重视。在所分离的菌株中,经血清学分型,住院病人的菌型十分集中,主要为1和6型二者合占56.7％,应当考虑到该医院存在医院感染问题。     

健康人和感染患者抗绿脓杆菌内毒素蛋白(EP)抗体水平的测定分析

用微量间接血凝法检测了健康人和绿脓杆菌感染患者血清抗EP抗体.健康人共检测154人.基础抗体水平绝大部分在1:8以下(占85.05%)EP—HA GMT为1:7.3.无性别差异(x~2=3.04、P>0.05).绿脓杆菌感染患者检测38例,免疫前GMT高于健康人1.43倍,免疫后较免疫前GMT提高4倍.绿脓杆菌EP是绿脓杆菌共同抗原,检查人抗EP抗体水平对诊断、防治绿脓杆菌感染具有重要临床意义.