低分子量透明质酸片段通过toll样受体4信号途径激活枯否细胞

高分子量透明质酸（high-molecular-weight hyaluronic acid,HMW-HA）是重要的肝脏基质,分子量高达2×10^6Da以上,可被活性氧分子（reactive oxygen species,ROS）等降解成低分子量透明质酸片段（hyaluronic acid fragments,HA fragments）,后者能被toll样受体4（toll-like receptor4,TLR4）识别并激活免疫细胞诱发炎症反应。基于枯否细胞表达TLR4,推测HA fragments通过激活枯否细胞TLR4信号系统而启动肝脏缺血再灌注损伤。从TLR4基因突变型（C3H／HeJ,TLR4^Mut/Mut）及野生型（C3H／HeN,TLR4^＋/＋）小鼠分离肝脏枯否细胞常规培养,用酶降解及色谱柱分离方法制备HA fragments,观察HMW-HA及HA fragments激活枯否细胞的差异,检测培养上清肿瘤坏死因子-α或白介素-1β水平变化;枯否细胞p38MAPK信号通路的活化;用特异性p38MAPK阻断剂—SB-203580,阻断p38MAPK活化后,观察培养上清中肿瘤坏死因子-α或白介素-1β水平变化。结果显示HA fragments可以促进TLR4^＋/＋枯否细胞分泌促炎因子,不能诱导TLR4^Mut/Mut枯否细胞分泌促炎因子。而HMW-HA既不能促进TLR4^＋/＋枯否细胞也不能促进TLR4^Mut/Mut枯否细胞分泌促炎因子。采用多黏菌素中和脂多糖后,HA fragments促进TLR4^＋/＋枯否细胞分泌促炎因子的能力不变,这一过程伴随p38MAPK信号通路的活化。当运用p38MAPK信号通路的特异性阻断剂SB-203580,抑制p38MAPK活性时,HA fragments促进TLR4^＋/＋枯否细胞分泌促炎因子的能力显著下降。因此与基质组成成分HMW-HA不同,HA fragments可以通过TLR4激活枯否细胞,促进其分泌促炎因子诱发炎症反应,这一过程依赖于p38MAPK的激活。     

Ⅱ型志贺样毒素B亚单位的重组表达及其受体结合活性

目的：在大肠杆菌中重组表达Ⅱ型志贺样毒素B亚单位（Stx2B）,并对其表达形式和受体结合活性进行分析。 方法：PCR方法从肠出血性大肠杆菌（EHEC）O157:H7中钓取Stx2B编码基因,利用基因克隆技术构建重组大肠杆菌pET-stx2B/BL21,IPTG诱导目的蛋白高效表达并对表达的包涵体进行变性和复性处理,离子交换层析纯化蛋白。通过SDS-PAGE变性和非变形蛋白电泳,分析重组Stx2B的表达形式,并利用Hela细胞结合模型,评价重组Stx2B与细胞受体的结合活性。结果：构建的重组大肠杆菌pET-stx2B/BL21能高效表达Stx2B,经变性、复性及离子交换层析操作,获得高纯度的目的蛋白。SDS-PAGE变性和非变形蛋白电泳分析显示,重组Stx2B以二聚体形式存在,单体之间通过二硫键相连。细胞结合试验显示,重组Stx2B与Hela细胞具有特异结合活性。结论：成功构建表达Stx2B的基因工程菌,Stx2B的受体结合活性不依赖于五聚体形式。     

生长激素在创面愈合中的应用

软组织损伤创面在合并糖尿病、放射治疗等情况下,常常延迟愈合、不愈、或反复发作,转变为慢性难愈性创面,成为长期困扰,临床治疗的一大难题。通常采用的皮肤移植疗法,无论自体还是异体皮都受到供体来源少的限制,异体皮和人工合成皮还存在免疫排斥等问题。生长激素在慢性创面愈合中的作用受到广泛关注,为慢性难愈创面的治疗提供了新的途径,有望带来突破性的治疗效果。     

种新的蛋白酪氨酸磷酸酶基因的克隆、定位和组织表达谱研究

从人胎肝cDNA文库分离出一长度为5248bp的cDNA克隆,该基因包含26个外显子和25个内含子,染色体定位于在某些肿瘤细胞中易缺失的3p21.1-21.33.其可读框编码1636个氨基酸,该蛋白属于蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)家族,其C端有一个典型的PTP结构域,N端含有约800氨基酸残基的BRO1样结构域及随后2个可能的SH3结构域结合位点,在这两个结构域之间及C末端还各有一个脯氨酸富集区.Northern杂交和点杂交分析显示,该基因以大约5.4kb的单一转录物广泛表达于人体各种组织,而且在人部分肿瘤细胞中高表达.结果提示,人源PTP-TD14是一个新的蛋白酪氨酸磷酸酶。 Abstract:A human cDNA of 5248bp encoding a novel protein tyrosine phosphatase PTP-TD14(1636aa) has been isolated from fetal liver.The gene is located at chromosome 3p21.3,an area frequently deleted in many types of cancer,and composed of at least 26 exons and 25 introns.The phosphatase has unique features in its domain structure:a tyrosine phosphatase domain,a C-terminal PEST motif,two SH3-binding motifs,two proline-rich region and an N-terminal domain similar to yeast BRO1 (a yeast protein that is involved in the mitogen-activated protein kinase signaling pathway).Northern blot and dot blot hybridizations indicate that it is expressed ubiquitously in human 50 tissues and 7 cancer cell lines.Thus,it is a novel protein tyrosine phosphatase gene located on 3p21.3.     

草鱼IGF—Ⅰ cDNA的克隆和在原核生物中的表达

根据亲缘关系较近的鲤鱼胰素样生长因子－Ⅰ（IGF－Ⅰ）cDNA设计一对引物,通过RT－PCR从草鱼（Ctenopharyngodon idellus）肝组织首次克隆了草鱼IGF－ⅠcDNA开放阅读框（ORF）片段,经序列分析表明克隆的草鱼IGF－ⅠcDNA为Ea－2亚型,ORF与鲤鱼有95％的同源性,与人有63％的同源性;草鱼IGF－Ⅰ蛋白与鲤鱼IGF－Ⅰ仅2个氨基酸残基不同,与人IGF－Ⅰ也仅有13个残基不同,将表达成熟草鱼IGF－Ⅰ(gcIGF-Ⅰ）蛋白的cDNA片段亚克隆至谷胱甘肽S－转移酶（GST）融合表达载体pGEX－4T－3,再将构建的重组表达载体pGEX-T-gcIGF-Ⅰ转入大肠杆菌BL21。在IPTG的诱导下,GST－gcIGF-Ⅰ融合蛋白高效表达。兔抗鲑鱼IGF－Ⅰ抗血清进行了Western Blot检测显示重组草鱼IGF－Ⅰ蛋白具有免疫活性。     

草鱼IGF-I cDNA的克隆和在原核生物中的表达

根据亲缘关系较近的鲤鱼胰岛素样生长因子-I(IGF-I)cDNA设计一对引物,通过RT-PCR从草鱼(Ctenopharyngodon idellus)肝组织首次克隆了草鱼IGF-I cDNA开放阅读框(ORF)片段.经序列分析表明克隆的草鱼IGF-I cDNA为Ea-2亚型,ORF与鲤鱼有95%的同源性,与人有63%的同源性;草鱼IGF-I蛋白与鲤鱼IGF-I仅2个氨基酸残基不同,与人IGF-I也仅有13个残基不同.将表达成熟草鱼IGF-I(gcIGF-I)蛋白的cDNA片段亚克隆至谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合表达载体pGEX-4T-3,再将构建的重组表达载体pGEX-T-gcIGF-I转入大肠杆菌BL21.在IPTG的诱导下,GST-gcIGF-I融合蛋白高效表达.兔抗鲑鱼IGF-I抗血清进行的Western B1ot检测显示重组草鱼IGF-I蛋白具有免疫活性.     

在Yunnanese(Aγδβ)~0-地贫3′缺失端点下游鉴别到两个增强子样顺序

利用荧光酶报告基因系统搜索了Yunnanese (Aγδβ) 0 地中海贫血缺失 3′端点下游 11 5kb区域内的调控顺序 .确定缺失 3′端点立即下游区 1 7kb片段 ,在人红白血病细胞K5 6 2及鼠红白血病细胞MELGM979中 ,可使γ 珠蛋白基因启动子驱动的荧光酶基因表达增加 3 8～ 4 0倍 ,而在HeLa细胞中仅增加 1 5倍 .位于缺失 3′端点约 10kb的一个长 1 4kb片段在K5 6 2和MELGM979中 ,可使γ 基因启动子驱动的荧光酶基因表达增加 2 4～2 9倍 ,而在HeLa细胞中无增加 .结果说明这两段顺序均有增强子活性 ,并且这种活性具有一定的红细胞特异性 .进一步证明 1 7kb片段内包含多个转录调节蛋白结合模体的 430bp片段包含了 1 7kb片段的大部分增强子活性 .这些结果为缺失导致增强子样顺序并入到接近Gγ 基因 ,是Yunnanese (Aγδβ) 0 地贫缺失突变体中胎儿Gγ 珠蛋白基因 ,在成人期持续活跃表达原因的假设提供了实验证据 .     

胰岛素样生长因子与哺乳动物的胚胎发育

综述了胰岛素样生长因子(IGFs)在胚胎发育过程中的表达特点和对胚胎发育的作用。许多研究表明,IGFs、IGF受体、IGF结合蛋白(IGFBPs)在不同发育阶段的胚胎中具有不同的表达特点,并具有组织特异性。不论是母体来源的、胎儿自身产生的、还是外源性的IGFs都能促进细胞分化和增殖,对胚胎发育有重要作用。     

IGFBP3基因多态性与秦川牛部分屠宰性状的相关性 Polymorphisms of Insulin-like Growth Factor Binding Protein 3 Gene and Its Associations with Several Carcass Traits in Qinchuan Cattle

以IGFBP3基因作为秦川牛（Bos taurus）部分屠宰指标的侯选基因,在对60头秦川牛的IGFBP3基因进行PCR-RFLP和序列分析的基础上,对秦川牛群体中IGFBP3基因座等位基因和基因型频率的分布及其与秦川牛部分屠宰性状的关系进行了分析。结果发现,在秦川牛群体中,651 bp的PCR 产物经过限制性内切酶HaeIII消化后,表现出3种基因型,其中等位基因A、B及3种基因型AA、AB、BB的频率分别为0.84、0.16和070、0.28、0.02。经序列分析发现,第299位的C→A颠换（GGCC变成了GGAC）导致了1个HaeIII限制性酶切位点的丢失而产生了该基因座多态性。在所研究的群体中,该多态基因座处于Hardy-Weinberg平衡状态（P＞005）。对13头24月龄秦川牛进行屠宰分析,发现不同基因型对秦川牛部分屠宰指标有一定影响,AA、AB及BB型个体的屠宰率、净肉率及西冷、牛柳、眼肉和嫩肩肉的产率逐渐降低,但差异不显著（P＞0.05）;AA型个体的眼肌面积大于BB型个体（P＜0.05）,AB型和BB型个体胴体脂肪含量高于AA型个体（P＜0.01）。 Abstract:DNA samples from 60 Qinchuan cattle (Bos taurus) were analyzed with PCR-RFLPs and sequencing for insulin-like growth factor binding protein 3 (IGFBP3) gene.Fragments of 651 bp were amplified with two primers and the products of PCR were digested with restriction endonuclease HaeIII.The produced fragments showed three genotypes,namely AA,AB and BB after electrophoresis.Frequencies of the genotype AA,AB,BB and allele A,B were 0.7,0.28,0.02,and 0.84,0.16,respectively.Sequence analysis showed that a transversion of C→A at 299 nt resulted in loss of the cleaved site of restriction endonuclease HaeIII and produced this polymorphism.This polymorphic locus of IGFBP3 gene was at Hardy-Weinberg equilibrium (P＞0.05).The genotypes of AA,AB,BB slightly affected several slaughter and carcass traits of Qinchuan cattle.Dressing percentage,net meat percentage,striplion percentage,tenderloin percentage,ribeye percentage and tender shoulder percentage were decreased with the genotypes of AA,AB and BB in Qinchuan cattle,but it was not significant (P＞0.05).Average ribeye area in individuals of AA genotype was significantly higher than that in individuals of BB genotype (P＜0.05),and beef fat content in individuals of genotype AB and BB was significantly higher than that in individuals of AA genotype (P＜0.01).     

血管钙化发病的新假说--血管破骨细胞样细胞

血管钙化是动脉粥样硬化的一个显著特征 ,是心血管疾病致残、致死的主要原因。目前研究认为 ,血管钙化不是钙盐在血管组织的被动沉积 ,而是类似骨形成和骨质疏松发生的主动的调节过程。血管平滑肌细胞由肌细胞表型转变为成骨细胞表型 ,是血管钙化的细胞学基础。但最近ＤｏｈｅｒｔｙＴＭ等提出了一个新假说 ,他们认为在血管中存在与骨组织相似的调节钙盐代谢的机制 ,成骨样细胞调节血管钙沉积 ,而调节血管钙吸收功能则由单核巨噬细胞系的前体衍生而来的破骨细胞样细胞 (ＯＬＣｓ)执行。动脉粥样硬化中钙沉积是由于成骨样细胞所致的钙沉积与…