全文获取类型
收费全文 | 5298篇 |
免费 | 209篇 |
国内免费 | 1982篇 |
出版年
2024年 | 16篇 |
2023年 | 109篇 |
2022年 | 98篇 |
2021年 | 112篇 |
2020年 | 103篇 |
2019年 | 125篇 |
2018年 | 86篇 |
2017年 | 118篇 |
2016年 | 130篇 |
2015年 | 162篇 |
2014年 | 301篇 |
2013年 | 258篇 |
2012年 | 362篇 |
2011年 | 375篇 |
2010年 | 320篇 |
2009年 | 347篇 |
2008年 | 806篇 |
2007年 | 300篇 |
2006年 | 316篇 |
2005年 | 406篇 |
2004年 | 308篇 |
2003年 | 296篇 |
2002年 | 320篇 |
2001年 | 248篇 |
2000年 | 201篇 |
1999年 | 155篇 |
1998年 | 147篇 |
1997年 | 165篇 |
1996年 | 115篇 |
1995年 | 72篇 |
1994年 | 75篇 |
1993年 | 59篇 |
1992年 | 91篇 |
1991年 | 81篇 |
1990年 | 90篇 |
1989年 | 77篇 |
1988年 | 18篇 |
1987年 | 14篇 |
1986年 | 13篇 |
1985年 | 28篇 |
1984年 | 18篇 |
1983年 | 13篇 |
1982年 | 7篇 |
1981年 | 12篇 |
1980年 | 1篇 |
1959年 | 3篇 |
1957年 | 1篇 |
1956年 | 3篇 |
1955年 | 1篇 |
1953年 | 7篇 |
排序方式: 共有7489条查询结果,搜索用时 15 毫秒
71.
白及块茎铜,锌超氧物歧化酶的纯化及其性质 总被引:1,自引:0,他引:1
白及(Bleillastriata(Thunb.)Reichb.f.)的SOD同工酶只有一条较宽的谱带,确认为Cu·Zn-SOD。其块茎SOD总活性和比活性都高,且含有丰富的白及胶;经丙酮分级沉淀,SephadexG100凝胶过滤和DEAE-纤维素柱层析分离纯化,获得对CN ̄-敏感的淡兰色Cu·ZnSoD粉末。在凝胶电泳染色图谱上,纯化后的酶与粗酶液的SOD区带相对应,且其酶活性染色带与蛋白染色带位置对应,表明已纯化到均一程度。该酶分子量约33KD,亚基分子量约为16.4KD;紫外光区的吸收峰在264.6nm,等电聚焦电泳呈现一条蛋白区带,pH值在4.35左右;该酶在pH6.0~10.0,温度在50℃范围内具稳定性。纯化后的酶为4563.2u/mg·蛋白,纯化了51倍,活力回收为22.3%。上述酶没有过氧化氢酶活性。提取过程中还得到高质量的副产品白及胶。 相似文献
72.
高效价甘薯羽状斑驳病毒抗血清的制备 总被引:6,自引:0,他引:6
用嫁接方法将甘薯羽状斑驳病毒(SPFMV)接种到I.setosa上扩繁,以0.2mol/LpH7.2PBK缓冲液、垫层差速离心、蔗糖密度梯度离心提取纯化SPFMV。纯化的SPFMVOD260/280的比值为1.25。将纯化的SPFMV免疫家兔制备抗血清,在环状沉淀和微量沉淀试验中,用提纯病毒测定抗血清的效价均为1:4096;以SPFMV-IgG为第一抗体,应用Dot-ELISA对甘薯和I.selosa叶片中的SPFMV分别作了测定。 相似文献
73.
本实验用免疫印迹法纯化的抗EBNA亚型抗体,结合显微荧光分光光度检测技术,检测在不同感染状态下,三种亚型EBNA抗原在细胞中的表达程度。结果表明,处于潜伏感染状态下的Raji细胞EBNA-1表达量较大,经巴豆油和正丁酸诱导进入钝挫感染状态后EBNA-1表达减少,而EBNA-2的表达增强。B_(95-8)细胞也有相似的趋势。表明EB病毒的激活可能与不同EBNA亚型表达量的改变有关。 相似文献
74.
国产硅藻土经氢氧化铵处理后可用于从发酰液中直接取青霉素G酰化酶,平均吸附量为90U/g。吸附的酶可用22%硫酸铵-0.3mol/LPBS(pH8.0)溶液洗脱。平均比18U/18Umg蛋白(NIPAB法)。硅藻土可反复使用。苯乙酰胺-Sepharose4B树脂可对酶作进一步的纯化。 相似文献
75.
人血红细胞胞浆部分经(NH_4)_2SO_4沉淀,DEAE-纤维素(DE52)柱层析,磷酸纤维素柱层析(P11)得到部分纯化的PTPP,产率:5.7%,提纯1075倍。以(32) ̄P-Tyr-Poly(G_4:T)作底物,测得其表征Km约为0.5-0.8μmol/L,该酶的最适pH和最适温度分别为7.0-7.8及37-40℃。Zn ̄(2+)等二价金属离子及Na_3VO_4等酸根基团对其活性有明显的抑制作用;EDTA、甘油及DTT、巯基乙醇等则对其有强烈激活作用;而氟化物、酒石酸等对PTPP活性基本无影响。此外,某些蛋白质、氨基酸、核苷酸及抗肿瘤药物等对PTPP活性也都有不同程度的影响。特别是一些PKs及PPs在体外对PTPP活性也具有不同的作用。 相似文献
76.
经硫酸铵分部沉淀、SephacrylS-300和DEAE-纤维素柱层析纯化了小球藻RubisCO,得率为15%,比活力达1.232μmolCO2ms-1min-1,分子量是500kD,它和菠菜叶片RubisCO在分子量、亚基组成和免疫特性等方面相似,反映RubisCO在高等和低等植物中有较高的同源性。自养小球藻RubisCO占细胞可溶性蛋白质的24%。而异养转变后的小球藻细胞内不含RubisCO。异养小球藻向自养生长转变过程中,20h后细胞内叶绿素含量逐渐增加,24h时细胞内出现RubisCO,24h后大量增加,至41h时含量达最高峰;标志着小球藻细胞光合作用能力的恢复和加强。 相似文献
77.
地衣芽孢杆菌胞外耐高温α-淀粉酶的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
地衣芽孢杆菌(Bacillus Licheniformis)突变株7902培养液离心后的上清液,于75℃至100℃作用.Α-淀粉酶活力基本上随温度提高呈直线上升。酶液在不加Ca2+和无任何保护剂条件下于90℃处理60分钟,95℃处理20分钟,酶活力均能保留90%以上。培养液经硫酸铵分段沉淀、Sephadex G-50疑胶过滤和制备垂直平板电泳纯化,经PAGE鉴定为一条带,纯酶比活提高49.3倍,淀粉酶法区带定位鉴定证明提纯样品是α-淀粉酶。SDS凝胶电泳测定分子量为68000。金属离子Ca242+、Li+、Mg2+等对酶有激活作用,而AI3+、Ag+、Cu2+、Mn2+和Fe2+等有一定的抑制作用。 相似文献
78.
79.
目的 建立测定水痘减毒活疫苗原液中二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide, DMSO)残留量的气相色谱法,并进行方法学的验证和初步应用。方法 采用气相色谱法检测,对色谱柱、柱温、分流比以及供试品预处理方法进行了优化,并对优化后的方法进行系统适用性和专属性、线性和范围、准确度和精密度、定量限和检测限、耐用性的方法学验证。结果 色谱柱使用DB-624(30 m×0.53 mm, 3.00μm)毛细管柱,以氮气为载气,进样口温度设定为250℃,FID检测器温度设定为270℃,柱温为120℃,分流比为5∶1。供试品在检测前采用乙腈沉淀蛋白的预处理方式(体积比1∶9~1∶19)以去除其中的干扰杂质。方法学验证结果显示,系统适用性和专属性良好,DMSO色谱峰与杂质分离良好,在50~1 000μg/mL范围内线性关系良好(R2=0.999 9)。检测限为20μg/mL,定量限为50μg/mL;准确度结果均在90%~110%之间,精密度的RSD均<10%。水痘减毒活疫苗原液中的DMSO残留量均未检出。结论 建立的气相色谱法能稳定、准确、快速地检测水痘减毒活疫苗原液... 相似文献
80.
甘草是我国传统的中药材,含有多种生物活性成分,其中甘草苷是重要的黄酮类化合物,提取分离技术难度较大,总结发现甘草苷常用有机溶剂、加热回流、闪式提取、超声波辅助提取、微波辅助提取、高压脉冲电场法等方法提取,有机溶剂、大孔树脂、无机陶瓷超滤、超滤-络合萃取及反萃取技术进行分离纯化。与此同时,已有研究表明甘草苷具有抗抑郁、抗氧化、抗炎、抗病毒、解毒等药理作用,为进一步研究开发甘草苷提供了参考依据。 相似文献