大熊猫和小熊猫粪便DNA提取的简易方法

采集了大熊猫和小熊猫的新鲜粪便样品 ,使用 1 0 0 %乙醇保存。通过重复离心富集研究动物的肠道脱落细胞 ,并使用乙醇和双蒸水洗涤以除去抑制物。用 1 %的SDS快速裂解细胞 ,离心除去残渣后 ,向裂解液中加入蛋白酶进行消化。消化结束后使用等体积的酚 /氯仿抽提 ,乙醇沉淀DNA。用双蒸水溶解粪便DNA后 ,使用PCR产物纯化试剂盒对粪便DNA进行纯化。电泳检测结果显示 ,从乙醇保存的大、小熊猫粪便样品中抽提到高质量的粪便DNA。对线粒体控制区、细胞色素b基因、 1 2SrRNA基因的PCR扩增反应以及测序结果也证实了样品保存方法和DNA抽提方法可靠而高效。此方法使用实验室内常用的分子生物学试剂 ,不仅克服了分子粪便学研究中常见的抑制物粪便DNA微量降解严重等障碍 ,与商业化的粪便抽提试剂盒 (QIAampDNAStoolMiniKit,Qiagen)相比还是一种经济的试验方法 (抽提反应成本为试剂盒的 1 / 5 )。文中还对粪便DNA内细菌基因组等背景DNA可能对分子粪便学试验结果的影响进行了探讨。在基于PCR技术的遗传学研究中 ,对于植食性动物而言 ,粪便内的背景DNA对目标动物DNA片断的扩增和序列测定未见影响 ;但对于肉食性动物 ,则必须考虑被捕食者基因组对试验可能产生的影响 ,应谨慎对待     

生后雌性小鼠下丘脑室旁核内ER—β表达的免疫组化研究

研究发现小鼠下丘脑室旁核(PVN)内雌激素β受体(ER-β)的表达与在大鼠等一些实验动物脑PVN的表达有差异,提示其在小鼠PVN内的表达可能有特定的生理意义。为了深入探讨ER—β在小鼠PVN内的功能,本文采用硫酸镍铵增强显色的免疫组化SP法研究了ER—β在生后雌性小鼠PVN内的表达。结果发现ER—β免疫阳性物质主要见于PVN的大细胞部,在小细胞部和背侧帽部免疫阳性细胞数目较少。免疫阳性物质主要位于细胞核内,未发现明显的胞浆或突起阳性,但在发育的某些时期可见免疫阳性细胞核局部呈现阴性反应。最高表达见于生后早期(第1—9天),随后表达降低,生后一个月即达到成年水平。PVN内ER-β的表达模式表现为生后早期表达高、随后降低,提示在该部位ER—β可能主要参与了对生后早期PVN的神经内分泌活动以及神经结构的发育与完善的调控,并可能与生后早期动物的应激、体重增加和脂肪代谢等有关。     

热休克蛋白70在妊娠早期小鼠子宫中的表达及雌激素的诱导作用

采用Western印迹、免疫组织化学、免疫电镜和图像分析技术研究了妊娠早期小鼠子宫热休克蛋白70(Heat shock protein,HSP70)的表达变化以及雌二醇对子宫HSP70表达的影响。结果表明：(1)与正常小鼠相比,孕鼠HSP70含量显著增多,且随妊娠日龄的增加而增加(P＜0．01);(2)小剂量(0．28μg／g体重)和大剂量(1．10μg／g体重)雌二醇均可诱导小鼠子宫HSP70免疫反应阳性细胞数显著增加(P＜0．01),但不表现剂量依赖关系;(3)Western印迹显示雌二醇使子宫HSP70蛋白谱带发生改变,正常小鼠仅有73kDl条蛋白带,小剂量组检出68kD、72kD、73kD3条蛋白带,大剂量组检出72kD、73kD2条蛋白带;(4)电镜下,HSP70免疫阳性反应定位于子宫内膜基质细胞胞浆与细胞核。这些结果提示,HSP70可能与蜕膜反应中基质细胞增殖密切相关,雌二醇对子宫HSP70的表达具有明显的诱导作用[动物学报49(3)：345—352,2003]。     

雌激素Beta受体在大鼠脑内表达的免疫组化定位研究

为了探讨雌激素作用于神经系统的机理,采用硫酸镍铵增强显色的免疫组化SP法研究了新的雌激素受体(ER-β)在成年雌雄大鼠脑内的分布。研究证实ER-β免疫阳性物质主要位于神经元的细胞核内,但在个别脑区也可在胞浆甚至突起内检测到。最强的ER-β免疫阳性信号见于前嗅核、大脑皮质、小脑浦肯野细胞、斜角带垂直部、蓝斑和三叉神经运动核等部位;中等强度的染色见于隔内侧核、杏仁外侧核、黑质、中央灰质等部位;较弱的阳性反应见于下丘脑与杏仁复合体的部分核团。在一些部位还存在表达水平甚至细胞内定位模式的性别差异,如前庭上核内的表达只见于雌性;雄性大鼠三叉神经运动核内ER-β蛋白主要表达于胞浆内,细胞核为阴性;而在雌性大鼠该部位ER-β蛋白主要位于细胞核等。以上结果表明ER-β蛋白在大鼠脑内分布广泛并具有一定的性别差异,在与学习记忆有关的脑区如大脑皮质和基底前脑内有很高的表达,提示在脑组织内雌激素可能通过ER-β这一新的信号途径发挥多种重要的调控作用,如学习记忆等。     

笼养雌性果子狸同性数量对发情状态的影响及繁殖季节尿液雌激素浓度的变化

本研究试图揭示 (1)社会环境影响雌性果子狸 (Pagumalarvata)的交配日期 ,(2 )哺乳期母兽有雌二醇浓度升高的现象。通过检查是否排出交配栓并结合交配行为的发生与否确定开始交配的日期 ,使用放射免疫方法测定尿中雌二醇浓度。结果表明 (1)一雄两雌组中优势雌兽开始交配的日期显著早于劣势雌兽和单雌组雌兽 ,劣势雌兽和单雌组雌兽之间无差异 ;交配期优势雌兽尿液中雌二醇浓度明显高于劣势雌兽 ,而与单雌组中的雌兽无差异 ,但单雌组中雌兽尿液中雌二醇的浓度明显高于劣势雌兽雌二醇的浓度 ;(2 ) 5头母兽产后第二天雌二醇浓度开始上升 ,在第 5天时达到高峰 ,其中 4头母兽的雌二醇浓度共出现了两个峰值 ,其间隔为 16 75± 4 4 6 (4)天。上述结果说明 :(1)社会影响仅对优势雌性个体的繁殖有促进作用 ;(2 )哺乳期雌二醇水平的升高是季节性多次发情的基础。     

环境雌激素生态影响的研究进展

环境雌激素(ｅｃｏｅｓｔｒｏｇｅｎ) ,是指能够扰乱动物内分泌活动 ,生理活性与雌激素较为相似的动物体外化学物质 ,包括人工合成化合物以及植物天然雌激素 ,由于目前所发现的干扰动物及人体内分泌系统的有机化合物绝大多数都具有激素特征 ,因此通常又将环境激素称做“干扰内分泌化合物”(ｅｎｄｏｃｒｉｎｅｄｉｓｒｕｐｔｉｎｇｃｈｅｍｉ ｃａｌｓ或ｅｎｄｏｃｒｉｎｅｄｉｓｒｕｐｔｅｒｓ)。环境激素问题只是在最近几年才引起世界关注 ,但由于环境激素污染范围广、影响大 ,对人类生存的威胁更直接 ,目前 ,西方国家将环境激素问题与臭…     

利用电浮法净化家畜粪便

ChemicalEngineering 2 0 0 3年 110卷 2期 18页报道 :西班牙圣塞巴斯天市的ADEBiotec生物技术公司(adebiotec .com )和Inasmet基金会 ,最近推出一种可将猪牛养殖场产生的粪便和污水的处理成本降低 5 0 %的净化工艺。科学家们在西班牙托莱多都附近进行的中间试验中 ,在不利用化     

科研快讯

《自然》:科学家解析乳腺癌耐药之谜来自英国癌症研究所的研究人员领导的一个研究小组在1月4日出版的《自然》(Nature)杂志上宣称,他们在新研究中证实乳腺癌对标准激素治疗产生耐受的原因是因为雌激素受体发生了重编程结合到了基因组的不同位点。该研究发现为开发出克服耐药的新治疗策略,以及可用于预测患者耐药可能性的诊断方法提供了重要的线索。     

雌激素受体2（ESR2）mRNA 5′非翻译区内部核糖体进入位点活性的鉴定与分析

真核生物除了传统的帽依赖型翻译机制外,还存在内部核糖体进入位点（internal ribosome entry site, IRES）介导的翻译机制。雌激素受体2（estrogen receptor 2, ESR2）是雌激素受体家族成员之一,其编码的蛋白质在许多肿瘤中发挥重要的作用。ESR2蛋白的异常表达会导致众多肿瘤的发生,但其蛋白质翻译水平的调控机制至今仍不清楚。研究发现,在药物刺激的条件下,乳腺癌细胞MCF7/WT中ESR2蛋白的表达提高,但是其转录水平基本未见发生改变。猜测ESR2 mRNA 5′非翻译区（5′ untranslated region, 5′ UTR）具有IRES活性。为了验证ESR2 mRNA 5′ UTR是否具有IRES元件,将ESR2 mRNA 5′ UTR插入到双顺反子报告基因载体（pRF）中,构建pRL-ESR2-FL重组质粒载体,将其瞬时转染到HEK293细胞。结果发现,ESR2 mRNA 5′ UTR有假定的IRES活性。并且通过3个排除实验验证了ESR2 IRES活性与其5′ UTR中的内部潜在启动子（P<0.0001）、内部剪切位点以及核糖体通读无关。进一步对其序列进行截短研究发现,ESR2 IRES活性发挥的关键区域是3′端的439～468 nt,且ESR2 IRES最大活性的发挥依赖于5′ UTR序列的完整性。并且发现,ESR2 IRES活性的发挥不但需要特定的一级核酸序列,还要有稳定的二级茎环结构。此研究有望为ESR2蛋白调控的相关疾病提供新的药物治疗靶点。     

子宫托对阴道微生态的影响以及应用雌激素的作用

通常将阴道前后壁、膀胱或直肠等盆腔脏器突入阴道内,称为盆腔脏器脱垂,常发生于老年女性。盆腔脏器脱垂及其引起的排尿相关症状严重影响患者的生活质量。目前临床上治疗盆腔脏器脱垂最常用的方法为佩戴子宫托。子宫托治疗盆腔脏器脱垂已有久远的历史。使用子宫托可明显改善盆腔脏器脱垂患者的临床症状,提高患者的生活质量。然而研究显示,对于机体而言,阴道内放置子宫托可在一定程度上影响阴道微生态环境平衡,从而使佩戴子宫托患者的细菌性阴道病患病率增加4.37倍。同时使用雌激素可明显减少由使用子宫托引起的阴道微环境改变、出血、溃疡等症状的发生。现就子宫托对阴道微生态的影响以及应用雌激素的作用做一简要综述。