经犬心房外膜涂布实现外源基因在心房肌（细胞）的高效转染

肌基因治疗作为一种研究和治疗心脏疾病的有效方法而逐渐被学者重视.本研究探讨一种经心房外膜涂抹使携带有绿色荧光蛋白（EGFP）基因的腺病毒高效靶向转染心房肌细胞方法的可行性.经犬胸骨正中开胸术,将含有一定浓度携带EGFP基因的腺病毒、胰蛋白酶和poloxamer F407的混合溶液涂抹至右心房外膜.术后经荧光显微镜观察荧光强度和实时PCR检测EGFP mRNA表达水平.EGFP荧光强度和mRNA表达水平在第1~6周呈现先增高后减低的趋势,其高峰在第3周出现;第3周右心房前壁各层心肌细胞均有EGFP表达;右心耳EGFP mRNA表达水平高于右心房前壁,右心房前壁和后壁表达水平无明显差异;房间隔的表达水平低于右心房,但明显高于左心房;心室和其它脏器如肺脏、肝脏、脾脏、骨骼肌、胃壁及小肠壁等的表达水平远低于右心房;通过HE染色及Masson's染色,第3周心肌无明显炎症反应和纤维化改变. 因此,经心房外膜涂抹的方法使基因靶向转染心肌细胞具有较好的高效性、靶向性和安全性.     

在生理温度下降钙素基因相关肽对豚鼠心房肌复极过程的影响

实验应用常规微电极方法研究了在生理温度下 (36 5± 0 5℃ )降钙素基因相关肽 (calcitoningene relatedpeptide ,CGRP)对豚鼠心房肌细胞复极过程的影响及其与钾电流的关系。结果表明 :(1)CGRP(16nmol/L)可拮抗由钾通道阻断剂BaCl2 、4 AP引起的动作电位时间延长。 (2 )CGRP(16nmol/L)能够增加细胞外高钾 (18 5mmol/L)条件下心房肌慢反应动作电位的APA和Vmax,并缩短传导时间。 (3)CGRP(16nmol/L)能减弱甚至消除因并用CsCl (5mmol/L)和无钾灌流液诱发的触发活动。 (4)CGRP对动作电位复极过程的作用因温度条件而异。在生理温度下 ,CGRP(5、16和 5 0nmol/L)能够使动作电位平台抬高 ,缩短动作电位复极化 2 0 %、5 0 %和 90 %时程。其中 ,对动作电位复极化 2 0 %、5 0 %时程的作用呈剂量依赖性。而在室温下 (2 5 5± 2 1℃ ) ,CGRP使动作电位复极化 2 0 %、5 0 %和90 %时程延长。上述结果提示 ,CGRP对心房肌细胞具有多重电生理效应 ,其中生理温度下CGRP对钾电流的促进作用在动作电位的改变中占重要地位 ,今后有必要进一步研究CGRP对各种钾通道的作用     

血管钠肽对低氧大鼠心脏钠尿肽C受体表达的影响

目的 :探讨低氧对大鼠心脏钠尿肽C受体 (NPR C)表达的调节作用 ,以及血管钠肽 (VNP)对这一过程的影响。方法 :将大鼠随机分为 3组 :对照组、低氧组 (3～ 2 8d)和VNP(2 5～ 75 μg/kgbw) 低氧组 ,采用放射免疫的方法测定大鼠血浆心房钠尿肽 (ANP)的浓度 ,并采用定量PCR的方法分析NPR C的mRNA水平。结果 :低氧 2 8d大鼠血浆ANP浓度显著高于正常大鼠 (P <0 .0 5 ) ,而且每天注射 75 μg/kgbw的VNP使ANP浓度进一步升高 (P <0 .0 1)。低氧 3d对大鼠心脏NPR C的mRNA的量没有显著影响 ;低氧 7d使大鼠心脏NPR C的mRNA的拷贝数显著升高 (P <0 .0 5 ) ;低氧 14d、2 8d使大鼠心脏NPR C的mRNA的拷贝数进一步升高 (P <0 .0 1)。每日注射 2 5μg/kgbw的VNP对低氧诱导的大鼠心脏NPR C表达没有显著影响 ;5 0 μg/kgbw的VNP显著降低低氧大鼠心脏NPR C的表达 (P <0 .0 5 ) ;75 μg/kgbw的VNP进一步降低低氧大鼠心脏NPR C的表达 (P <0 .0 1)。 结论 :VNP可以升高低氧大鼠的血浆ANP水平 ;低氧可以使大鼠心脏NPR C表达增加 ,而且具有时间依赖性 ,而VNP对这一过程有抑制作用 ,并且呈剂量依赖性     

甲磺胺心定对家兔窦房结心房肌房室结与希氏束细胞动作电位的影响

在离体家兔右心房-房中隔与房室结-希氏束标本上,用微电极技术研究了β-受体阻断剂甲磺胺心定(Sot)对窦房结(SAN)、心房肌、房室结(AVN)、希氏束细胞的电生理效应。Sot(1.6×10~(-6)—1.6×10~(-4)M)对上述4种细胞的动作电位振幅和0相最大除极速度皆无影响。Sot 能显著减慢 SAN 与 AVN 的自搏频率,并延长自律恢复时间。标本被驱动时,心房SAN 逆传时间与房-室传导时间均被 Sot 延长。Sot 还能显著延长上述4种细胞的动作电位时程与有效不应期,并且是浓度依赖性的。β-受体阻断剂甲氧乙心安(Met,1.2×10~(-7)—1.2×10~(-4)(M)对这些指标无影响。说明 Sot 尚具有第三类抗心律失常药物的特性。此外在8只标本上用期前刺激诱发了动作电位的快速自动发放,这是折返性室上性心动过速的电生理基础。Met 仅对1例有效,Sot 能全部制止其余7例的 AP 自动发放。这显然是由于 Sot 延长了细胞复极化过程和不应期,阻断了折返兴奋的传播,从而显示其优于β-受体阻断剂的抗心律失常效果。     

在大鼠牵拉心房和急性扩张血容量所致的肾效应

在28只麻醉大鼠,观察了牵拉心房和急性扩容时的肾效应。用5—7g的砝码牵拉大鼠右心房30min(n=6)时,尿量、尿钠和尿钾分别增加98％、127％和59％;牵拉左心房(n=4)所致的肾效应与牵拉右心房的基本相同。切断双侧迷走神经后,牵拉右心房的肾效应无明显改变。在切断迷走神经的大鼠,观察了双线结扎右心耳对急性扩容后肾效应的影响。急性扩容在假手术大鼠引起明显的利尿、钠尿和钾尿效应(P<0.01);而结扎右心耳的大鼠,钠尿效应约为假手术大鼠的一半,但尿量和尿钾排泄量与假手术组无明显异差。上述肾效应不受切断迷走神经的影响,因此不是通过容量感受性反射引起的。根据以上结果,我们推测,牵拉心房或急性扩容引起的尿量、尿铜和尿钾的增多,可能是心房钠尿因子释放增多所致,而结扎右心耳则导致释放入血流的心房钠尿因子减少。     

窦房结优势起搏点兴奋向心房传导方式的探讨

本文采用同步双标测法,研究了窦房结(SN)优势起搏点兴奋向心房传导的规律。在14只麻醉狗心脏界沟部缝上一装有32个电极的电极板,标测优势起搏点(P点),最早起始负电位点(N点),心房激动过程图及最早激动点(O点)。在用异丙肾上腺索、心得安或刺激迷走神经使P点移位后,我们研究了P点位置与P—O、P—N的关系。在计60次实验中:(1)P—O、P—N多数并不重叠(分别为46次和40次);(2)随着P点从SN头部向尾部移位,O(N)点在P点头侧的出现率下降,在P点尾侧的出现率上升;(3)出现两个O点者23次,出现两个N点者11次,但P点始终只有一个。 本文提出了SN兴奋在SN内优先向头、尾两端扩布,再传向心房肌的窦房传导模式。并对心房激动多中心起源、界沟部兴奋超速传导等现象及Boiaeau的“心房综合起搏”假说进行了讨论。     

C型利钠利尿肽对犬冠脉循环的作用

Ｃ型利钠利尿肽（ＣＮＰ）是新近发现的一种由内皮细胞分泌的利钠利尿肽,本研究采用冠脉内给药方法对比观察了ＣＮＰ、心房利钠尿肽（ＡＮＰ）对犬正常及心肌缺血后冠脉循环的作用,并应用常规离体血管灌流的方法测定了离体冠脉对ＣＮＰ、ＡＮＰ的舒张反应。结果显示：（１）对正常犬,ＣＮＰ、ＡＮＰ均可降低平均动脉压（ＭＡＰ）、远端小冠脉压和大、小冠脉阻力,增加冠脉流量,而不影响心率;（２）心肌缺血后,ＣＮＰ的上述作用依然存在,但ＡＮＰ降低ＭＡＰ的作用基本消失。（３）离体心外膜冠状动脉对ＣＮＰ、ＡＮＰ均呈剂量依赖性舒张反应。结果提示ＣＮＰ、ＡＮＰ均可舒张冠状动脉而改善冠脉循环,并可能对急性心肌缺血的治疗有益     

自发性高血压大鼠右心耳肌细胞特殊颗粒的形态分析和ANP免疫反应强度的观察

本研究运用透射电镜及形态计量学方法结合免疫组织化学技术对成年自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）的右心耳肌细胞心房特殊颗粒（ＡＳＧ）和心房利钠肽（ＡＮＰ）的免疫反应强度进行了观察和定量研究。成年自发性高血压大鼠的心肌细胞内,ＡＳＧ数目增加,直径增大,高尔基复合体发达;线粒体轻度肿胀,部分嵴溶解断裂,部分内质网扩张,糖原颗粒增多。ＡＮＰ免疫反应增强与ＡＳＧ数目的增加一致。提示自发性高血压大鼠ＡＮＰ的合成和释放均增加,以维持机体在高血压状态下血压的平衡和内环境的稳定。     

诱导方式对P_L启动子控制下人工合成心钠素28肽基因转录动态变化的影响

本文用含有人工合成28肽心钠素基因质粒的大肠杆菌(TAP106-pYX40),分别进行温度诱导和丝裂霉素C诱导,提取菌体中的总RNA,与γ-~(32)P标记的心钠素基因片段进行RNA打点杂交,并通过测定杂交阳性信号的总灰度值(Totalgray value),建立了人心钠素基因特异mRNA相对定量方法,从而观察到温度诱导对P_L启动子控制下的心钠素基团转录发生得慢,特异的mRAN产量较低,但转录所持续的时间长,而丝裂霉素C诱导对P_L启动子控制下的心钠素基因转录发生得快,特异mRNA产量高,但持续的时间短。