经犬心房外膜涂布实现外源基因在心房肌（细胞）的高效转染

肌基因治疗作为一种研究和治疗心脏疾病的有效方法而逐渐被学者重视.本研究探讨一种经心房外膜涂抹使携带有绿色荧光蛋白（EGFP）基因的腺病毒高效靶向转染心房肌细胞方法的可行性.经犬胸骨正中开胸术,将含有一定浓度携带EGFP基因的腺病毒、胰蛋白酶和poloxamer F407的混合溶液涂抹至右心房外膜.术后经荧光显微镜观察荧光强度和实时PCR检测EGFP mRNA表达水平.EGFP荧光强度和mRNA表达水平在第1~6周呈现先增高后减低的趋势,其高峰在第3周出现;第3周右心房前壁各层心肌细胞均有EGFP表达;右心耳EGFP mRNA表达水平高于右心房前壁,右心房前壁和后壁表达水平无明显差异;房间隔的表达水平低于右心房,但明显高于左心房;心室和其它脏器如肺脏、肝脏、脾脏、骨骼肌、胃壁及小肠壁等的表达水平远低于右心房;通过HE染色及Masson's染色,第3周心肌无明显炎症反应和纤维化改变. 因此,经心房外膜涂抹的方法使基因靶向转染心肌细胞具有较好的高效性、靶向性和安全性.     

饲料脂肪水平对大菱鲆幼鱼TOR信号通路的影响

研究旨在探究饲料脂肪水平对大菱鲆(Scophthalmus maximus)幼鱼雷帕霉素受体(TOR)信号通路的影响。以大菱鲆幼鱼[初始体重(8.6±0.01) g]为实验对象, 配制脂肪水平分别为11.69% (适宜脂肪组)和16.58% (高脂组)的2种等氮饲料在室内循环水系统中进行投喂实验, 养殖周期为97d。结果显示: (1)饲料脂肪水平升高对大菱鲆幼鱼存活和特定生长率(SGR)无显著影响(P>0.05)。(2)与适宜脂肪组相比, 肝脏中TOR和4EBP1 mRNA水平在高脂组上调(P<0.05)而4EBP2 mRNA水平在高脂组下调(P<0.05)。此外, 与适宜脂肪组相比, 肌肉中TOR和4EBP1 mRNA水平在高脂组下调(P<0.05)而4EBP2 mRNA水平在高脂组无显著变化。(3)饲料脂肪水平显著影响AKT、TOR和4EBPs磷酸化水平。肝脏中p-AKT (T308和S473)/AKT、p-mTOR(S2448)/mTOR和p-4EBP1 (T37/46)/4EBP1在高脂组显著高于适宜脂肪组,而p-p70S6K (T389)/p70S6K在高脂组显著低于适宜脂肪组。肌肉中p-AKT (S473)/AKT、p-mTOR (S2448)/mTOR和p-4EBP1 (T37/46)/4EBP1在高脂组显著低于适宜脂肪组,而p-p70S6K (T389)/p70S6K在高脂组显著高于适宜脂肪组。结果表明: 大菱鲆幼鱼肝脏和肌肉TOR、4EBP1和4EBP2的mRNA表达量与AKT、TOR、4EBP1和p70 S6K磷酸化受到饲料脂肪水平调控, 饲料脂肪水平升高, 激活了肝脏TOR信号通路, 同时肌肉TOR信号通路受到部分抑制。