工程菌酯酶B1的纯化及性质研究

工程菌酯酶B1降解酶经硫酸铵分级沉淀、DEAE SepharoseCL 6B离子交换柱层析、SephadexG 1 5 0凝胶过滤 ,得到了分离纯化 ,SDS PAGE鉴定为单一组分。经 1 2 .5 %SDS PAGE法测得分子量约为 5 6KD ,提纯倍数为33.3,收率为 1 7.9%,比活力为 74 .7U/mg。该酶的最佳作用条件是 37℃ ,pH =7.0 ,该酶作用于α 乙酸萘酯的Km为1 .35× 1 0 -3 mM ,Vmax为 2 .7× 1 0 4μ/ml。酶在pH6～ 9范围内较稳定 ,重金属Cu2 对该酶具有明显的促进作用 ,而SDS对酶具有抑制作用 ,对有机磷农药对硫磷 (1 6 0 5 )的降解率在 90min内达 91 .5 %。     

苏云金杆菌WG-001工程菌发酵培养基的筛选

探讨了BtWG001工程菌以农副产品为主要碳、氮源的利用情况,为该菌株发酵培养基的筛选提供了广谱的原料资源。利用高速上升浓度加倍法进行了发酵培养基的优选,获得一个优良配方。发酵水平达到4024IU/μL,0.39%,与对照配方(2800IU/μL,0.26%)相比,分别提高44%,50%。证明该方法为一种筛选Bt发酵培养基配方的新模型。     

苏云金芽胞杆菌Bt0601发酵条件的优化研究

应用正交实验和单因子实验,结合杀虫毒力测定,对携带杀虫基因cry1Ac和虎纹捕鸟蛛毒素基因Hwtx-I的苏云金芽胞杆菌工程菌Bt 0601的发酵工艺条件进行研究。实验获得的苏云金芽胞杆菌Bt 0601工程菌的最佳发酵条件为:发酵初始酸碱度控制在pH 7.5、发酵温度(30±0.5)℃、转速200 r/min、通气量为30 mL/300 mL,接种量为4%,培养44 h。此外,本文还对Bt 0601菌株在30 L发酵罐中的发酵特性进行了研究,摸索了通气量对其大罐发酵的影响,确定大罐发酵的最佳通气量为1.75 L/min。     

白喉毒素DAB389-（Gly4Ser）2-α-促黑激素工程菌发酵条件的初步研究

目的：为了提高融合蛋白白喉毒素DAB389-（Gly4Ser）2-α-促黑激素的表达量,研究工程菌发酵条件的最优化。方法：利用三角瓶模拟小剂量发酵,在不同的受体菌、培养基、培养温度、时间、pH值、诱导剂浓度、诱导时间和温度等因素变化下研究目的蛋白的表达量。结果：工程菌优化的发酵条件为：最佳表达菌种为大肠杆菌BL21（λDE3）,最适宜的培养基为M982,适合的pH值为7．0-7．4,最佳诱导温度为30℃,诱导时间为6h,诱导剂IPTG的最佳用量为1．4mmol/L。结论：获得了DAB389-（Gly4Ser）2-α-促黑素细胞激素工程菌的最优化发酵条件,为中试放大提供了理论依据。     

生长速度对β干扰素工程菌稳定性和产物表达的影响研究

为了研究发酵培养阶段生长速度对重组人干扰素β(hIFN-β)工程菌稳定性、菌体密度和干扰素表达的影响,采用日本LE．Marubishi MSJ-50L发酵罐,在发酵过程中于诱导后通过控制不同的补料速度,检测低和高生长速度及发酵结束后菌体密度、稳定性和重组人干扰素β的表达量。诱导后维持低生长速度,发酵结束后平均密度A600值为7．52,表达量达20．7％,质粒稳定率好,达到91％,粗制干扰素收获2．37克;维持高生长速度,发酵结束后平均密度A600值达20．57,而表达量降为4．13％,质粒稳定率降为27％,粗制干扰素收获仅为0．59克。诱导后生长速度对工程菌稳定性和产物表达有明显影响。     

肽抗生素hPAB-β3拷贝工程菌的发酵与重组蛋白纯化

肽抗生素 (peptideantibiotics)是近年来发现的生物体基因编码的具有抗微生物活性的小肽 ,在临床病原菌对常用抗生素耐药性日益严重的今天 ,人们希望将肽抗生素开发为一种新型的抗感染制剂。为大量制备人源肽抗生素hPAB β ,本研究在前期对筛选出的 3拷贝优势工程菌的摇瓶发酵条件进行摸索的基础上 ,采用 3.7L发酵罐对发酵pH值、溶氧条件 (PO2 )和补料时机、方式等参数进行优化。同时 ,对表达产物进行了如下纯化 :利用Ni NTA亲和层析捕获 3拷贝融合蛋白 ,继而用 2mol/L羟胺裂解 ,产物用SOURCE 30RPC填料进行反相层析 ,目标肽经GSH…     

苏云金芽胞杆菌重组工程菌研究进展

苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)可以产生对多种农业害虫有毒性的晶体蛋白(Insecticidal crystal protein,ICP),是目前世界上使用范围最广、应用最成功的杀虫微生物.已经发现苏云金芽胞杆菌可以对包括鳞翅目、鞘翅目、直翅目等在内的9个目500多种昆虫具有杀虫活性①,同时对某些螨类、吸虫、鞭毛虫及动植物线虫也有一定的活性.     

产过敏素harpin的固氮工程菌的某些特性研究

研究了产过敏素harpin的固氮工程菌（Enterobacter cloacaeE4)在番茄,烟草叶片上的致过敏能力及该菌所携的双质粒的稳定性。试验结果表明：E4与DH5（pCPP430)致过敏能力的速度和强度基本相同,E4与308R（pCPP430)相比,烟草上它们致过敏能力的速度基本一致。但308R（pCPP430)致过敏能力的强度更强,在番茄叶片上,E4和308R（pCPP430)致过敏能力的速度和强度基本一样,E4所携的双质粒pCPP430和pMC73A在宿主细菌中是不稳定的,在宿主细菌连续繁殖过程中,质粒pCPP430和pMC73A随宿主细菌的繁殖而发生缺失,当连续传代48代时,双质粒的丢失率达100%,而且各含一种质粒的细胞产生的机率基本相同。     

分子生物学技术在啤酒酿造业中的应用

分子生物学技术的运用为传统啤酒酿造业注入了新的活力,中简要介绍分子生物学技术在啤酒酵母工程菌构建,啤酒发酵中污染杂菌的鉴定以及在啤酒原料分析等方面的应用概况。     

溶氧反馈分批补料高密度培养人骨形成蛋白-2工程菌

对表达人骨形成蛋白－2成熟肽的基因工程大肠杆菌E.coli DH5α/pDH-B2m在500mL摇瓶中进行了培养条件的摸索实验,并在此基础上扩大至NBS Bioflo IV20L发酵罐,利用溶氧反馈－分批补料培养技术：在培养过程中保持适当的溶解氧（40％）,以溶氧值在线反馈控制搅拌速度及流加补料培养基,使细菌保持适当的比生长率,成功地进行了工程菌的高密度培养,最终菌体密度达OD600＝57,每升干菌量22.8g,目的蛋白的表达量占细菌总蛋白的30％,人骨形成蛋白－2成熟肽的理论产率达到3.59g/L。