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一株氯氰菊酯降解菌16SrDNA,gyrB和GyrB的系统发育分析 总被引:2,自引:0,他引:2
从农药厂污水处理池中分离得到一株氯氰菊酯降解菌,在30℃,pH7.0的条件下,无机盐培养基中100mg/L的氯氰菊酯,经过7.5天,能够降解大约52.3%,外加碳源能够明显提高其降解性能。生理生化实验结合16SrDNA,册诏和GyrB的系统发育分析,将其归为Gordonia菌属。在16SrDNA水平上,其与G.amicalis DSM44461和G.hydrophobica DSM44015^T的相似值最高,为98.1%;而在gyrB和GyrB水平上,其与G.hydrophobica JCM10086的相似值最高,分别为86.8%和91,1%。通过对所构建的系统发育树进行评估,表明16SrDNA序列适用于将分离菌株鉴定到属的水平上,而gyrB和GyrB更适用于在属内种的水平上进行系统发育的分析。 相似文献
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【目的】确定厌氧盐碱细菌Alkalitalea saponilacus产木聚糖酶所需的碳源,优化木聚糖粗酶的提取条件并分析酶学性质。【方法】应用GC技术分析A.saponilacus发酵木聚糖的主要产物;利用二硝基水杨酸法(DNS)测定木聚糖酶活力以获得最优的碳源、提取粗酶的最佳条件及其酶学特性。【结果】A.saponilacus以不同来源木聚糖为底物时,发酵产生的主要产物丙酸含量都在80%以上。若以0.4%(W/V)蔗糖+0.1%(W/V)桦木木聚糖为复合碳源时,木聚糖酶活力是以桦木木聚糖或者蔗糖为单一碳源时的3.2倍。木聚糖酶的酶活力在盐度2%–6%、pH 7.0和55°C达到最佳且在该条件下的酶活力为590 IU/mg。此外,该酶活力在0.2%Tween 20存在时增加,而在5 mmol/L Mg~(2+)和0.2%Triton X-100存在时无显著影响,但在Cu~(2+)、Fe3+和Ni~(2+)等金属离子存在时则被显著抑制。【结论】A.saponilacus发酵主产物丙酸以及生物合成的木聚糖酶在工业生产中具有广泛的应用前景。 相似文献
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本文介绍了用单个棉铃虫测定杀虫药剂抗性基因频率的灵敏方法。该技术是基于比较三个相等量单个棉铃虫的乙酰胆碱酯酶的活性,每个棉铃虫要用微量滴定板同时做3个试验(也可用Enppen-dorf管)(No.1-3):1)不加抑制剂(No.1);2)不加酶源(No.2);3)加一定浓度的残杀威以抑制编码敏感AceS等位基因的乙酰胆碱酯酶,但不能抑制编码抗性AceR等位基因的乙酰胆碱酯酶。如果No.1和No.3的强度一样强,说明残杀威对乙酰胆碱酯酶的活性没有影响,那么基因型应是纯合抗性(AceRR,No3=No.1)。No.2和地.3的强度一样弱时,说明残杀威完全抑制了乙酰碱酯酶的活性,那么基因型应是纯合敏感(AceSS,No.3=No.2)。No.3的强度介于No.1(强)和No.2(弱)之间显示出残杀威部分地抑制了乙酰胆碱酯酶的活性;基因型是杂合型(AceSR,No.2<No.3<No.1)。作者用该方法测定了1995,1996两年从河北省邯郸和固安县棉田采集的棉铃虫,在邯郸棉铃虫抗药性高发地区,其抗性基因频率AceRR分别是68.3%和65.3%;但在棉铃虫抗药性低发区的固安县其抗性基因频率分别是23.9%和29.4%。 相似文献
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基因工程技术在降解农药中的应用 总被引:2,自引:2,他引:0
综述了基因重组、原生质体融合、外源基因、降解酶和固相反应器等基因工程技术在降解农药中的研究及应用进展,提出了几种高效降解农药的基因工程菌的构建策略和构建手段。 相似文献
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抗性库蚊酯酶基因在大肠杆菌中的克隆和表达 总被引:8,自引:0,他引:8
用抗性库蚊酯酶基因,引入原核表达载体pRL439,转化大肠杆菌HB101细胞,获得表达。通过酶切、Southern杂交鉴定重组质粒。研究了重组菌酯酶的活性,重组质粒pRLB1表达的酯酶具有高酶活并能高效降解酯酶的特异性底物α乙酸萘酯(αNA)和β乙酸萘酯(βNA);经对重组菌进行细胞固定化后降解农药三氯杀虫酯(7504),反应时间短,降解效率高 相似文献
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工程菌酯酶B1降解酶经硫酸铵分级沉淀、DEAE SepharoseCL 6B离子交换柱层析、SephadexG 1 5 0凝胶过滤 ,得到了分离纯化 ,SDS PAGE鉴定为单一组分。经 1 2 .5 %SDS PAGE法测得分子量约为 5 6KD ,提纯倍数为33.3,收率为 1 7.9%,比活力为 74 .7U/mg。该酶的最佳作用条件是 37℃ ,pH =7.0 ,该酶作用于α 乙酸萘酯的Km为1 .35× 1 0 -3 mM ,Vmax为 2 .7× 1 0 4μ/ml。酶在pH6~ 9范围内较稳定 ,重金属Cu2 对该酶具有明显的促进作用 ,而SDS对酶具有抑制作用 ,对有机磷农药对硫磷 (1 6 0 5 )的降解率在 90min内达 91 .5 %。 相似文献
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作为阻燃剂,有机磷酸酯广泛应用于工业制品和人类生活用品中,是一种全球性的环境污染物,因其具有特殊的理化性质,自然条件下很难水解。因此,对有机磷酸酯的微生物降解成了当下的研究热点。通过持续逐级富集,从北京某垃圾处理厂渗透液中富集到一个混合菌群(编号为YC-BJ1),并在降解特性、底物谱以及物种组成多样性3个方面对其进行定性鉴定。该菌群能够高效降解磷酸三苯酯(Triphenyl phosphate, TPhP)和磷酸三甲苯酯(Tricresyl phosphate, TCrP),培养4 d能够实现对100 mg/L TPhP和TCrP的基本降解,降解率分别为99.8%和91.9%。降解特性研究发现,该混合菌群具有出色的环境适应能力,能够在较宽的环境条件下(温度15–40℃,pH 5.0–12.0, 0%–4%盐)保持对TPhP的降解能力。底物谱分析发现,混合菌群YC-BJ1能够降解部分含氯有机磷阻燃剂,培养4d,对磷酸三(1,3-二氯异丙基)酯(Tris(1,3-dichloroisopropyl)phosphate,TDCPP)和磷酸三(2-氯乙基)酯(Tris(2-chloroethyl) phosphate, TCEP)的降解率分别为16.5%和22.0%。16S rRNA基因物种多样性分析发现,混合菌群YC-BJ1中物种丰度最高的3个菌属分别是生丝微菌属Hyphomicrobium (38.80%)、金黄杆菌属Chryseobacterium (17.57%)和鞘氨醇盒菌属Sphingopyxis (17.46%)。与目前已报道的有机磷阻燃剂降解菌和菌群相比,混合菌群在降解效率和环境适应能力方面都具有极大的优势,有较广泛的应用空间。高效降解菌群的富集能够为有机磷阻燃剂的降解及其环境污染生物修复提供微生物资源,并为其降解机理的探索提供支持。 相似文献
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【目的】本研究旨在系统探究环境因素对邻苯二甲酸单乙基己基酯水解酶(monoethylhexyl phthalate hydrolase,MehpH)活性的影响,模拟该酶的3D结构并分析活性中心氨基酸残基与底物之间的相互作用。【方法】根据标准的酶学实验验证了环境因素对酶活性的影响。该酶的基本结构分析由DNAMAN(2.1)分析所得,同时利用SWISS-MODEL对其3D模型进行预测,并通过PyMOL软件对相关结果作了可视化处理。Autodock工具,Swiss-Pdb以及Py MOL均用以酶与邻苯二甲酸单乙基己基酯(monoethylhexyl phthalate,MEHP)的相互作用分析。【结果】该酶的初级结构与已报道Gordonia sp.P8219菌株中的酯类水解酶相似,该酶的最适温度与p H(分别为40°C和8.0)和菌株P8219有所不同;该酶在有机溶剂、洗涤剂和金属离子环境中表现出良好的稳定性;然而,其酶活受2 mol/L的Ni~(2+)、Fe~(3+)、Cu~(2+)和Zn~(2+)离子,1 mol/L苯甲基磺酰氟(PMSF),0.5 mol/L的对氧磷,1 mol/L苯基醚(PGO),2 mol/L焦碳酸二乙酯(DEPC)和5 mol/L的毒扁豆碱所抑制。丝氨酸水解酶中高度保守五肽基序GXSXG与催化三联体HSD结构均存在于该酶的编码序列中。根据分子对接结果,Thr152与Ser230在水解酶与其模板之间也显得更为保守,且与MEHP联系较为紧密(分别为5.8?和3.6?),可能起着重要的催化作用。而MEHP与催化氨基酸残基Ser125、His291、Asp259并不十分靠近。【结论】YC-RL2中MehpH在有机溶剂、洗涤剂以及金属离子环境中具有稳定的生物活性,表明其具有良好的应用潜力。酶的结构及活性中心得到了初步的分析,对于催化机理及酶改造研究具有重要意义。 相似文献