PaP3噬菌体57kD蛋白编码基因的确定

分离鉴定了PaP3噬菌体57 kD蛋白的编码基因并对其功能进行了初步探讨。用PEG沉淀结合CsCl梯度密度离心分离、纯化噬菌体颗粒,通过SDSPAGE分析该噬菌体的衣壳蛋白,转印PVDF膜后,对57 kD蛋白用Edman降解法进行N端氨基酸测序,进而从PaP3全基因组的256个ORFs中确认该蛋白质的编码基因及其对应的氨基酸序列。结果显示噬菌体PaP3有9种结构蛋白分子,其中57 kD蛋白是由ORF34793编码的。57kD蛋白编码基因全长1542bp,G+C百分含量为49.16%,编码514个氨基酸。该蛋白分子量为57.4kD,等电点为5.879。实验表明该蛋白是一种结构性蛋白,很可能是噬菌体衣壳蛋白中的一种壳微粒。     

大鼠发育过程中肝、肺r-GT酶活性和定位

用生物化学和组织化学方法研究正常发育中大鼠肝、肺r-GT活性和定位。结果表明:肝r-GT活性自胚龄17天开始升高,21天达高峰,出生第一天明显降低,第六天降至接近成年低水平。在胚胎期肝r-GT主要位于肝细胞内,出生后则主要位于胆小管。该结果提示胚胎期肝r-GT主要参与肝细胞膜上氨基酸的转运。出生后可能主要参与解毒功能,大鼠肺r-GT活性随发育逐步升高,主要分布于肺支气管上皮细胞。提示肺r-GT可能参与解毒功能。     

肽抗生素hPAB-β3拷贝工程菌的发酵与重组蛋白纯化

肽抗生素 (peptideantibiotics)是近年来发现的生物体基因编码的具有抗微生物活性的小肽 ,在临床病原菌对常用抗生素耐药性日益严重的今天 ,人们希望将肽抗生素开发为一种新型的抗感染制剂。为大量制备人源肽抗生素hPAB β ,本研究在前期对筛选出的 3拷贝优势工程菌的摇瓶发酵条件进行摸索的基础上 ,采用 3.7L发酵罐对发酵pH值、溶氧条件 (PO2 )和补料时机、方式等参数进行优化。同时 ,对表达产物进行了如下纯化 :利用Ni NTA亲和层析捕获 3拷贝融合蛋白 ,继而用 2mol/L羟胺裂解 ,产物用SOURCE 30RPC填料进行反相层析 ,目标肽经GSH…     

利用废水液体发酵生产单细胞蛋白的实验研究

利用工厂废水或动物血制作培养基,以液体发酵方式培养产朊假丝酵母NCTC3576菌及甘饲8501菌.离心分离菌体,测定菌体生物生长量,并观察蔗糖、温度、酸碱度、发酵时间、种子液接种量对生物生长量的影响.生化方法分析NCTC3576菌单细胞蛋白的品质,氨基酸分析仪分析单细胞蛋白的氨基酸组成.结果表明,玉米淀粉厂废水,不必调pH,不用添加其它任何组分,即可直接用于液体发酵产朊假丝酵母NCTC3576菌;pH4.0～7.0均对生长量无明显影响;24h培养已达到最好生长量,再延长时间已不能提高产量;28℃及37℃培养无明显差别,在3%～17%种子液接种量范围内,接种量与生长量有正相关关系.研究表明,玉米淀粉厂废水单一成分即可用于液体发酵产朊假丝酵母NCTC3576菌,原料成本低,且易于产品分离纯化和工业化生产中的连续培养,是单细胞蛋白生产的良好途径.     

益生菌联合膳食纤维的肠内营养对重型颅脑损伤患者术后营养状况、免疫功能和肠黏膜屏障功能的影响

摘要 目的：观察重型颅脑损伤患者术后经膳食纤维的肠内营养联合益生菌干预后,患者免疫功能、肠黏膜屏障功能以及营养状况的变化。方法：选取2016年6月~2020年5月期间我院收治的重型颅脑损伤患者136例。根据入院顺序奇偶法分为对照组68例和研究组68例,对照组给予膳食纤维的肠内营养干预,研究组在对照组的基础上联合益生菌干预,对比两组格拉斯哥昏迷量表（GCS）评分、营养状况、免疫功能、肠黏膜屏障功能及并发症发生情况。结果：两组干预14 d后白蛋白（ALB）、血红蛋白（Hb）、转铁蛋白（TR）均较干预前升高,且研究组较对照组高（P<0.05）。两组干预14 d后免疫球蛋白G（IgG） 、免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白M（IgM）均较干预前升高,且研究组较对照组高（P<0.05）。两组干预14 d后总超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）均较干预前升高,且研究组较对照组高（P<0.05）,丙二醛（MDA）较干预前降低,且研究组较对照组低（P<0.05）。两组干预14 d后GCS评分升高,且研究组较对照组高（P<0.05）。研究组的并发症发生率低于对照组（P<0.05）。结论：益生菌联合膳食纤维的肠内营养干预可有效改善重型颅脑损伤术后患者营养状况、免疫功能和肠黏膜屏障功能,同时还可减少并发症发生率,改善患者预后。     

重组人肽抗生素hPAB—β及其突变体的活性测定与筛选

从人体基因组中克隆了一个编码肽抗生素样的基因。按基因编码产物的氨基酸序列 ,化学合成目的产物 ,药物敏感测定法证实产物具有杀菌活性后 ,又用基因工程法人工表达了目的产物。测定表达的重组人肽抗生素hPAB β及其突变体的抗菌活性 ,筛选理想的活性分子。方法是应用平板法和最小抑菌浓度 (MinimumInhibitionConceng tration ,MIC)测定法检测重组表达的hPAB β及突变体hPAB β38,hPAB β34对 8株实验室保存菌株及 10株临床分离菌株的杀菌能力 ,并以化学合成的肽抗生素hPAB β作对照 ;根据各目的分子抗菌能力的强弱 ,筛选理想的目…     

人源肽抗生素hBD—2表达质粒的构建及其在大肠杆菌中的表达

为了构建人源肽抗生素hBD－2的表达质粒燕在大肠杆中表达,将化学合成的hBD-2全基因原核融合蛋白靛质粒pinpointXa-3的多克隆位 构建成表达质粒,按常规方法转化大肠杆菌JM109,筛选阳性重组子并诱导融合蛋白的表达,结果经酶切鉴定获得7个阳性克隆,序列分析表明其中4个克隆的插入序列与hBD-2基因完全一致,另3个克隆插入序列的39位由C突变为5T,89 多了一个Go,正确的阳性克隆子在大肠杆菌中产生了约18kD的特异性诱导蛋白,hBD-2的成功表达为进一步研究hBD-2的抗菌活性,抗菌机理打下了一定的基础。     

伤寒沙门菌对宿主细胞磷酸肌醇的调节与利用

宿主细胞的磷酸肌醇是细胞信号通路中的重要成分,参与许多细胞内过程(如细胞生长与分化、肌动蛋白的组装、细胞运动、细胞死亡、膜运动、葡萄糖转运等)的调节,是细胞生物学中极为重要的一组分子.近来的研究表明,病原菌(尤其是胞内寄生菌)可以利用磷酸肌醇信号通路,颠覆宿主细胞的功能.本文综述伤寒沙门菌对宿主细胞磷酸肌醇信号通路的调节与利用,有利于了解胞内寄生菌的寄生和致病机制.同时,细菌与宿主细胞相互作用的模型给人们提供了重要的手段来破解真核细胞内的复杂信号传导之谜.     

脑胶质瘤患者血清VTN、IGFBP、UBE2C水平与临床病理特征和预后的关系研究

摘要 目的：研究脑胶质瘤患者血清玻连蛋白（VTN）、类胰岛素样生长因子结合蛋白（IGFBP）、泛素耦联酶2C（UBE2C）水平与临床病理特征和预后的关系。方法：将新疆医科大学第一附属医院从2019年1月～2020年1月收治的97例脑胶质瘤患者纳入研究,记作研究组,另取同期于本院进行体检的健康志愿者90例作为对照组。此外,对所有研究组人员均进行为期1年的随访,将其按照随访结局的差异分作死亡组40例和存活组57例。检测并比较各组血清VTN、IGFBP、UBE2C水平,分析血清VTN、IGFBP、UBE2C水平与脑胶质瘤患者临床病理特征和预后的关系,并以受试者工作特征（ROC）曲线分析血清VTN、IGFBP、UBE2C水平预测脑胶质瘤患者死亡的效能。结果：研究组血清VTN、IGFBP及UBE2C水平均高于对照组（均P＜0.05）。肿瘤大小≥5 cm、世界卫生组织（WHO）分级为Ⅲ～Ⅳ级、Karnofsky功能状态（KPS）＜70分脑胶质瘤患者的血清VTN、IGFBP水平均高于肿瘤大小＜5 cm、WHO分级为Ⅰ～Ⅱ级、KPS评分≥70分的脑胶质瘤患者（均P＜0.05）;WHO分级为Ⅲ～Ⅳ级、KPS评分＜70分脑胶质瘤患者的血清UBE2C水平高于WHO分级为Ⅰ～Ⅱ级、KPS评分≥70分的脑胶质瘤患者（均P＜0.05）。死亡组血清VTN、IGFBP、UBE2C水平均高于存活组（均P＜0.05）。经ROC曲线分析发现：血清VTN、IGFBP、UBE2C水平联合检测预测脑胶质瘤患者死亡的曲线下面积、灵敏度、特异度及约登指数均高于上述三项指标单独检测。结论：脑胶质瘤患者血清VTN、IGFBP、UBE2C水平均存在异常高表达,且与肿瘤恶性进展相关,联合检测可能有利于预测患者的预后。     

利用5′-RACE法扩增到钙通道基因的5′-端片段

钙除了是人体牙和骨中的重要组成成份之外,吠”还是细胞内的第二信使。电压激活的钙离子通道在调节细胞内钙离子水平中有至关重要的作用。作者曾报道过用丁一RAC法克隆到钙通道基因3’一端3000多hp的大片段［1］,最近利用已知序列提供的信息,设计基因特异性引物,利用RT－PCR及5’－RACE法,我们又克隆到了此钙通道基因的丁一端约4．skb的大片段。1材料与方法1．亚总RNAN取用含10％／J‘牛血清的MEM培养基培养INS一1细胞。该细胞为鼠源胰腺9一细胞建株细胞（美国UniverstyofSouhAlabama的MingLi博士惠赠）,LVA钙通道基因高…