长白山白眉蝮蛇乌苏里亚种类凝血酶（TLE）基因克隆及分析

目的为了获得长白山白眉蝮蛇乌苏里亚种类凝血酶基因。方法根据GeneBank自眉类凝血酶eDNA5．和3保守序列设计了引物,通过RT-PCR从白眉蝮蛇乌苏里亚种毒腺TotalRNA中扩增得到1条长714bp的特异cDNA片段,将该cDNA片段重组到SimpleTvector,转化进E．coliJM109competentcell,阳性克隆委托生物公司测序,利用生物信息学方法对测序结果进行分析。结果该特异性片段与蛇毒类凝血酶同源性为95％,它为一个开发阅读框架,其编码的蛋白质序列与其他蛇毒类凝血酶序列同源性为94％,与其他蛇毒类凝血亲缘关系非常近。结论本实验获得了一种新型白眉蝮蛇乌苏里亚种类凝血酶基因。     

45味中药乙醇提取物中对酪氨酸酶的激活作用

从中医治疗白癜风方剂中筛选出中药45味,观察这些中药50%乙醇提取物对蘑菇酪氨酸酶和无细胞系统多巴色素自动氧化生成黑素量的影响.结果显示有21味中药乙醇提取物在3个不同浓度对蘑菇酪氨酸酶活性、黑素生成具有激活作用,其中女贞子、梅花和八角茴香对酪氨酸酶的激活作用较明显;同时分析了其中有激活作用的中药的功用等分类情况,以探...     

雷帕霉素联合ZD55-TRAIL病毒对肿瘤抑制及其机制探讨

溶瘤腺病毒的肿瘤靶向性研究一直是一个热点。目前已有商业化的ONYX-015、H101溶瘤腺病毒。在此基础上,科学家又进一步发展形成基因-病毒治疗方案,如文中应用的ZD55-TRAIL病毒。本研究利用刘新垣实验室提供的携带TRAIL(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TNF相关的凋亡诱导配体)的溶瘤腺病毒ZD55-TRAIL联合雷帕霉素杀伤肿瘤     

输尿管导管逆行灌注凝血酶对大鼠肾脏穿刺术后出血的影响

目的应用逆行输尿管导管灌注凝血酶溶液观察大鼠肾脏出血肉眼血尿局部止血的疗效。方法通过单侧肾穿刺配合全身肝素化制备大鼠肾脏出血肉眼血尿模型。32只SD大鼠模型随机分作4组,分别以低、中、高三种不同浓度的凝血酶及生理盐水经输尿管导管行该侧肾盂逆行灌注。检测灌注前及灌注后各组大鼠尿红细胞计数值、外周血血色素水平、出血时间、凝血时间及血肌酐水平等指标。结果三种不同剂量的凝血酶溶液组灌注后尿红细胞计数水平与生理盐水对照组相比均有显著差异（P〈0.05）;其中凝血酶溶液中、高剂量组给药后5min及40 min尿红细胞计数水平均显著低于低剂量组（P〈0.05）;不同剂量的凝血酶溶液组与生理盐水对照组在灌注后40 min检测的大鼠外周血血色素水平比较均有明显差异（P〈0.05）;其中凝血酶中、高剂量组灌注后40min大鼠外周血血色素水平显著高于低剂量组（P〈0.05）。灌注凝血酶溶液前、后的出血时间、凝血时间及血肌酐水平均无明显变化（P〉0.05）。结论逆行灌注凝血酶溶液对大鼠肾穿刺术后严重的肾出血有明显迅速的止血效果,且有一定的量效依存关系;同时对大鼠凝血功能及肾功能未发现明显影响。     

Prelamin A相互作用蛋白Narf的鉴定和表达分析

目的:探讨A型核纤层蛋白前体( prelamin A)在细胞内堆积造成细胞早老的机理,筛选了prelamin A相互作用蛋白并研究其在早老细胞中的表达情况.方法:以prelamin A的C末端区域为诱饵蛋白,采用酵母双杂交方法从人骨骼肌cDNA文库中筛选prelamin A相互作用蛋白.构建了prelaminA识别因子(Narf)与绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP - Narf,与红色荧光蛋白- prelamin A融合表达质粒pDsRed - PLA共转染HEK293细胞,激光共聚焦显微观察共定位情况.Western blotting检测Narf在衰老表型HEK293PLA细胞的表达情况.结果:筛选得到包括Narf在内的7个候选相互作用蛋白.Narf与prelamin A能相互作用并共定位于核纤层,在prelamin A过表达的HEK293PLA细胞中Narf表达没有升高.结论:Narf在细胞内与prelamin A相互作用,且表达量不受后者影响.     

富含蛋氨酸玉米醇溶蛋白在大肠杆菌中的表达

目的:克隆玉米中富含蛋氨酸的10kD玉米醇溶蛋白,证明植物源目的基因在大肠杆菌中能够表达.方法:从玉米胚乳中克隆高蛋氨酸基因zein,通过PCR扩增zein片段,连接pGEX - 4T -1原核表达载体,转入大肠杆菌中,IPTG诱导后,HPLC测定蛋氨酸含量.结果:经PCR扩增出467bp条带,Blast分析同源性99%,经IPTG诱导进行SDS - PAGE检测,发现在36kD处出现一条明显的条带.诱导后菌体总蛋氨酸含量比正常菌体提高了9.6%.结论:证实了植物源10kD玉米醇溶蛋白在大肠杆菌中能够表达.     

十字花科植物ABI4序列演化与转录激活活性分析

转录因子ABI4参与植物激素ABA的绝大多数生物学功能, 它不仅是ABA和GA在植物体内含量平衡的核心调控因子, 同时还连接ABA与植物细胞内多个信号通路。利用拟南芥(Arabidopsis thaliana) ABI4序列在十字花科其它19种植物(除拟南芥外)中检索得到27个同源基因, 通过序列多态性分析、系统发生重建、染色体共线性分析和转录激活活性比较, 探讨了该基因在十字花科植物中的演化历史。结果表明, ABI4蛋白质序列和结构在十字花科植物中具有较高的保守性, 暗示了其功能的重要性; 单独的ABI4蛋白并不具备显著的转录激活活性, 说明其生物学功能的具体分子机制可能相对复杂, 需要进一步探讨。     

激活学生探究潜能,让实验课鲜活起来

实验课程是为启蒙课程目的的科学素养的培养,和科学素养的形成是一个长期的过程,激活学生的探究潜能,学会用科学的思维方式,来解决自身日常生活和学习中遇到的问题。相对与科学课而言更富有时代的气息。精心呵护学生与生俱来的好奇心,培养他们对科学的兴趣和求知欲;积极引导学生学习与周围世界有关的科学知识;帮助他们体验科学活动的探究过程和方法;使他们了解科学、技术与社会的关系,乐于与人合作,与环境和谐相处;既能丰富他们的童年生活,发展他们的个性,又能使他们的思维性、创造性得到了充分的发挥,有利于学生形成科学的认知方式和科学的自然观。     

重组海蚯蚓纤溶酶的克隆、表达及活性鉴定北大核心CSCD

纤溶酶在溶栓治疗中起重要作用,能够溶解血凝块的主要成分纤维蛋白。采用RACE方法从海蚯蚓消化道组织中扩增出海蚯蚓纤溶酶编码序列,构建该基因原核表达载体,并进一步构建工程菌表达融合蛋白,经Ni2+树脂柱纯化后通过平板法检测该融合蛋白纤维蛋白酶原激活活性。结果获得海蚯蚓纤溶酶的c DNA序列和氨基酸序列,并成功构建重组表达载体p ET-21a-AFE,表达纯化出融合蛋白,该融合蛋白能够激活纤维蛋白酶原而溶解纤维蛋白。总之,本研究获得了海蚯蚓纤溶酶的c DNA序列和氨基酸序列,并初步证明其具有纤维蛋白酶原激活活性,为临床新型溶栓药物的开发提供实验基础。     

非诺贝特固体自乳化制剂（S-SEDDS）体外评价及生物利用度研究

目的：以S-SEDDS替代液态自乳化制剂中的表面活性剂制备非诺贝特固体自乳化制剂。方法：比较了固体自乳化制剂与市售产品、液体自乳化制剂的体外溶出情况及体内生物利用度。结果：表明本研究的固体自乳化制剂用水分散后平均粒径为820.2±26.5（nm）;溶出度试验结果显示,30min累积溶出度达到80%以上,本研究制备的非诺贝特固体自乳化制剂AUC（0-24）为22.7±8.2 mgoL-1oh与SEDDS的AUC（0-24）（24.9±7.6mgoL-1oh）没有显著性差异（P〉0.05）,与市售微粉化胶囊（13.8±10.5mgoL-1oh）相比能够显著提高药物的生物利用度（P〈0.05）。结论：S-SEDDS有液体自乳化给药系统的效果。