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Prelamin A相互作用蛋白Narf的鉴定和表达分析
引用本文:陈维春,刘振杰,蒋智文,彭琪,袁源,郑慧玲,刘新光.Prelamin A相互作用蛋白Narf的鉴定和表达分析[J].生物技术,2011,21(5).
作者姓名:陈维春  刘振杰  蒋智文  彭琪  袁源  郑慧玲  刘新光
作者单位:1. 广东医学院衰老研究所,广东东莞523808;广东医学院生物化学与分子生物学研究所,广东湛江524023
2. 广东医学院生物化学与分子生物学研究所,广东湛江524023;广东省中医院检验科,广东广州510120
3. 广东医学院衰老研究所,广东东莞,523808
基金项目:国家自然科学基金,广东省自然科学基金,广东省高校自然科学研究重点项目,广东省医学科研基金,东莞市科技计划项目
摘    要:目的:探讨A型核纤层蛋白前体( prelamin A)在细胞内堆积造成细胞早老的机理,筛选了prelamin A相互作用蛋白并研究其在早老细胞中的表达情况.方法:以prelamin A的C末端区域为诱饵蛋白,采用酵母双杂交方法从人骨骼肌cDNA文库中筛选prelamin A相互作用蛋白.构建了prelaminA识别因子(Narf)与绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP - Narf,与红色荧光蛋白- prelamin A融合表达质粒pDsRed - PLA共转染HEK293细胞,激光共聚焦显微观察共定位情况.Western blotting检测Narf在衰老表型HEK293PLA细胞的表达情况.结果:筛选得到包括Narf在内的7个候选相互作用蛋白.Narf与prelamin A能相互作用并共定位于核纤层,在prelamin A过表达的HEK293PLA细胞中Narf表达没有升高.结论:Narf在细胞内与prelamin A相互作用,且表达量不受后者影响.

关 键 词:酵母双杂交  A型核纤层蛋白前体  衰老  共定位

Identification and Expression Analysis of Narf,an Interacting Protein of Prelamin A
CHEN Wei-chun,LIU Zhen-jie,JIANG Zhi-wen,PENG Qi,YUAN Yuan,ZHENG Hui-ling,LIU Xin-guang.Identification and Expression Analysis of Narf,an Interacting Protein of Prelamin A[J].Biotechnology,2011,21(5).
Authors:CHEN Wei-chun  LIU Zhen-jie  JIANG Zhi-wen  PENG Qi  YUAN Yuan  ZHENG Hui-ling  LIU Xin-guang
Institution:CHEN Wei-chun1,2,LIU Zhen-jie2,3,JIANG Zhi-wen1,PENG Qi1,YUAN Yuan1,ZHENG Hui-ling1,LIU Xin-guang1,2*(1.Insititute of Aging,Guangdong Medical College,Dongguan 523808,China,2.Institiute of Molecular Biology,Zhanjiang 524023,3.Guangdong Provincial Hospital of Chinese Medicine,Guangzhou 510120,China)
Abstract:Objective:In order to reveal the mechanism of cell aging resulted from accumulation of prelamin A,proteins interacted with prelamin A were screened from human skeletal muscle library and the expression of nuclear prelamin A recognition factor(Narf) was analysized.Method:A bait plasmid pGBKT7-PLA-C was constructed containing C-teminal amino acids 389-664 of prelamin A and cotransformed into AH109 yeast competent cells with human skeletal muscle library.Narf gene was inserted into eukaryotic vector pEGFP gene...
Keywords:yeast two-hybrid  prelamin A  Narf  colocalization  
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