血管内皮细胞生长因子及临床应用策略

血管内皮细胞生长因子（VEGF）是一种特异作用于血管内皮细胞的多功能细胞因子,它能引起血管通透性增加,引起细胞外基质成分改变,诱导血管形成,在炎症,创伤愈合,心脏缺血,动脉粥亲硬化,糖尿病性视网膜病变及肿瘤形成等与血管生成和病变有关的诸多病理过程中起重要作用。     

TGF-β诱导CTGF表达的信号转导途径及与纤维化形成

转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)是一种具有多重生物学效应的细胞因子,参与了多种组织器官纤维化的形成。结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)是一种富含半胱氨酸的多肽,是介导TGF-β致纤维化作用的重要下游因子之一。TGF-β可通过多种信号途径诱导CTGF表达,本文就这一领域的研究进展及与纤维化形成的关系做一简要综述。     

血管内皮细胞生长因子及其受体在IgA肾病患者肾组织中表达的研究

目的　检测 2 4例不同病理改变的IgA肾病患者肾组织中血管内皮细胞生长因子 (Vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)及其受体VEGF R2 (flk 1)和Ⅳ型胶原的表达 ,并将其表达水平与临床病理改变进行相关分析。方法　应用免疫组织化学SP法。结果　VEGF主要表达于肾小球脏层上皮细胞 ,flk 1主要表达于肾小球和间质血管内皮细胞。肾小球内VEGF和flk 1表达呈正相关 (P <0 0 5 ) ,两者在中度病变组肾小球内表达最多 ,重度病变组表达最少 (P <0 0 5 )。随病理改变程度加重 ,患者 2 4h尿蛋白定量、血压、血肌酐水平均明显增高 (P <0 0 5 )。肾小球内VEGF表达在轻、中度病变组与尿蛋白水平呈正相关 (P <0 0 5 ) ;在重度病变组则无相关性 ,与患者血压、血肌酐水平也无明显相关性 (P >0 0 5 )。肾小球内Ⅳ型胶原随病变加重表达增多 ,在重度病变组表达最多 (P <0 0 1) ;在轻、中度病变组肾小球内VEGF表达与Ⅳ型胶原的表达呈正相关 (P <0 0 5 )。各组肾小球内VEGF表达与肾小球微血管密度呈正相关 (P <0 0 1) ,重度病变组肾小球微血管密度减少 (P <0 0 5 )。结论　这些结果说明VEGF在IgA肾病的病理进展过程中发挥重要作用 ,可能涉及内皮细胞通透性增强、细胞外基质合成增多、血管生成障碍等多种机制     

冷冻对视网膜色素上皮细胞分泌肝细胞生长因子的影响

本研究观察冷冻处理后的人视网膜色素上皮细胞(human retinal pigment epithelium cells,hRPE)在体外培养和体内玻璃体环境中分泌肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)水平的变化,调查变化后的玻璃体对正常RPE细胞的促增生作用。体外培养的RPE细胞在-80℃下进行冷冻,冷冻时间分为0s、15s和60s,随后继续体外培养和注入正常兔眼玻璃体,冷冻后的第3d和6d收集细胞培养液和玻璃体样本,ELISA法测定hHGF含量;进一步,用MTT法测定正常RPE细胞加入玻璃体样本后的生长状态。结果显示冷冻刺激RPE细胞hHGF的分泌增多,并可促进RPE细胞增生。     

虹鳟胰岛素样生长因子Ⅰ和Ⅱ在大肠杆菌中的融合表达及促有丝分裂活性

The preparation of recombinant rainbow trout insulin like growth factorsⅠ(IGF Ⅰ) andⅡ(IGF Ⅱ) using the His6 fusion polypeptide technique and the mitogen ic activities of these compounds were investigated. Rainbow trout IGF Ⅰand IGF ⅡB C A D domain cDNA were subcloned into expression vector pET 15b (Nova gen, USA) and expressed in host E. coli BL21 (DE3) as fusion polypeptides co ntai ning a stretch of 6 histidines at the N terminus (referred as His6 fusion polyp e ptide). The addition of IPTG (0 4 mmol/L) induced the expression of polypeptide s with a molecular weight of about 10 0 kDa. The expressed proteins were ammoniu m sulfate fractionally precipitated and further purified using a Ni 2+ His ·Bind R esin (Novagen, USA) affinity column. The reduced SDS PAGE showed that IGF Ⅰ w as of 80% purity and IGF Ⅱ was of 90% purity. The rainbow trout IGF Ⅰ His6 fusi on polypeptide showed dose dependent mitogenic effects on BALB/NIH3T3 cells in th e serum free medium culture, and rainbow trout IGF Ⅱ His6 fusion polypeptide al s o showed this kind of activity, but with lower potency. Taken together,these re sults indicated that the rainbow trout IGF Ⅰ and ⅡHis6 fusion polypeptides pr o duced in E. coli were biologically active, with IGF Ⅰ His6 fusion polypept ide of higher potency.     

重组腺病毒介导人肝细胞生长因子在病理性瘢痕基因治疗研究中的应用

采用细胞内质粒DNA同源重组方法, 将人肝细胞生长因子基因构建于E1, E3区缺失的复制缺陷型5型腺病毒载体上, 获得携带人肝细胞生长因子基因(HGF)的重组腺病毒Ad-HGF. 在293细胞中扩增后用氯化铯密度梯度离心法扩增制备Ad-HGF和Ad-GFP(携带绿色荧光蛋白报告基因的重组腺病毒), 然后, 用Ad-GFP和Ad-HGF体外分别转染原代培养的兔耳瘢痕成纤维细胞, 观察体外转染效率及表达, 并以新西兰兔耳瘢痕为体内模型, 观察局部瘢痕组织中一次性注射Ad-HGF后对已形成瘢痕的治疗作用. 结果显示: (ⅰ) Ad-GFP感染原代培养兔瘢痕成纤维细胞后, 3 d时转染效率为(36.8 ± 14.1)%, 并持续表达20 d以上. (ⅱ) 用ELISA方法检测Ad-HGF感染原代培养兔瘢痕成纤维细胞后HGF的表达, 结果感染后3 d表达量约为76 ng/4.0 ´ 105细胞. (ⅲ)用兔耳瘢痕模型观察在瘢痕内注射不同剂量(8.6 ´ 10⁹, 8.6 ´ 10⁸, 8.6 ´ 10⁷, 8.6 ´ 10⁶ pfu)的Ad-HGF, 于注射后第32天肉眼可见Ad-HGF治疗组瘢痕较治疗前明显缩小、变薄, 甚至与周围皮肤在同一水平. 这一效应呈剂量依赖性: 大、中剂量组(8.6 ´ 10⁹, 8.6 ´ 10⁸ pfu)治疗前后瘢痕肥大指数的减少有统计学意义(P<0.05), 尚可见不同程度再生的丛状新生毛, 低剂量组(8.6 ´ 10⁷, 8.6 ´ 10⁶ pfu)治疗后瘢痕肥大指数有减小但无统计学意义, 对照组多数瘢痕大小无明显变化. 光学显微镜观察组织切片显示, 治疗组真皮中纤维组织明显少于对照组, 并可见毛囊及皮脂腺的存在; 天狼猩红染色显示大剂量组创口中胶原纤维薄且稀少, 而低剂量组和对照组创口中仍有丰富的大而粗的Ⅰ型胶原. (ⅳ)治疗兔体内未检测到抗HGF抗体的存在. (ⅴ) 局部应用Ad-HGF所介导的基因只在局部表达, 不累及远隔的器官和组织, 也未见任何毒副作用. 结果提示, 以腺病毒介导人肝细胞生长因子基因治疗病理性瘢痕在整形外科中具有一定的应用前景.     

心肌-内皮信号途径在心脏发育中的作用

内皮细胞对于调节和维持心脏发育起着十分重要的作用.随着基因功能研究技术的发展,已有越来越多的资料表明内皮 心肌细胞相互作用对于心脏生长和发育是必须的.目前已经发现包括神经调节蛋白、血管紧张素、NO、TGF β、内皮素等在内的很多细胞信号途径均参与了此过程.就在心脏发育过程中心肌 内皮细胞相互作用的重要信号途径作一综述.     

胰岛素样生长因子1(IGF-1)mRNA同源模板竞争性PCR定量方法的建立

胰岛素样生长因子 1(IGF 1)是一种多功能的细胞增殖调控因子 ,其表达水平受多种因素的影响 ,为了研究IGF 1基因在转录水平上的调控机制 ,建立了定量测定IGF 1mRNA的竞争性PCR方法 .同时 ,也建立了一种简便的制备同源性竞争模板的方法 .以构建好的重组pUC IGF 1质粒为基础 ,利用IGF 1mRNA序列上唯一存在 ,但是在pUC18质粒上多拷贝的MspⅠ酶切位点 ,以该限制性内切酶处理重组pUC IGF 1质粒 .在T4DNA连接酶作用下对酶切产物进行随机连接 ,以连接产物作为模板 ,用可扩增IGF 1cDNA的引物进行PCR ,由此得到因含有随机插入序列而与原IGF 1cDNA产生明显长度差别的重组IGF 1.以不同浓度的该DNA片段作为同源竞争模板与大鼠肝组织cDNA在同一反应体系中进行PCR ,对PCR产物进行分析 ,计算出样本中IGF 1cDNA的初始浓度 .成功地建立了IGF 1mRNA的竞争性PCR定量检测方法 ,为研究IGF 1基因的表达调控奠定了基础 ,同时也为对已克隆的基因进行mRNA定量测定提供了一种简便和灵敏的手段     

碱性成纤维细胞生长因子制剂稳定性的研究

本研究通过MTT法检测bFGF的活性,研究了不同温度下四种制剂中bFGF的稳定性。结果得到,bFGF在2．0mol／L NaCl,0．05mol／L PB溶液(pH7.2)中,-20℃下贮藏6个月活性没有明显的下降;bFGF水剂贮藏在4℃下,bFGF活性随贮藏时间延长逐步下降,单位活性bFGF用量由0.4ng／mL下降为0．9ng／mL,室温下bFGF的活性丧失快于4℃下贮藏,3个月后bFGF单位活性用量由0．4ng／mL下降为1．0ng／mL。而乳霜剂和胶束剂中的bFGF在两种温度下贮藏一个月后,均检测不到对细胞生长的刺激作用。说明低温有利于制剂中bFGF的稳定,乳霜剂和胶束剂中的bFGF稳定性不好。     

内皮抑素抗肿瘤血管生成的分子机制

内皮抑素(endostatin)是目前广泛关注的血管生成抑制剂,能特异性地抑制内皮细胞的增殖和迁移,在体内具有良好的抗肿瘤效果。该分子的抗肿瘤作用可能与金属蛋白酶活性、信号通路分子、整合素、原肌球蛋白及黏附受体有关。