全文获取类型
收费全文 | 5451篇 |
免费 | 828篇 |
国内免费 | 3519篇 |
出版年
2024年 | 26篇 |
2023年 | 193篇 |
2022年 | 305篇 |
2021年 | 360篇 |
2020年 | 365篇 |
2019年 | 372篇 |
2018年 | 233篇 |
2017年 | 240篇 |
2016年 | 275篇 |
2015年 | 353篇 |
2014年 | 492篇 |
2013年 | 439篇 |
2012年 | 672篇 |
2011年 | 630篇 |
2010年 | 545篇 |
2009年 | 572篇 |
2008年 | 580篇 |
2007年 | 566篇 |
2006年 | 481篇 |
2005年 | 429篇 |
2004年 | 322篇 |
2003年 | 276篇 |
2002年 | 258篇 |
2001年 | 179篇 |
2000年 | 184篇 |
1999年 | 113篇 |
1998年 | 49篇 |
1997年 | 39篇 |
1996年 | 40篇 |
1995年 | 32篇 |
1994年 | 25篇 |
1993年 | 15篇 |
1992年 | 17篇 |
1991年 | 10篇 |
1990年 | 14篇 |
1989年 | 16篇 |
1988年 | 11篇 |
1987年 | 9篇 |
1986年 | 9篇 |
1985年 | 18篇 |
1984年 | 10篇 |
1983年 | 6篇 |
1982年 | 10篇 |
1981年 | 2篇 |
1978年 | 1篇 |
1976年 | 1篇 |
1950年 | 4篇 |
排序方式: 共有9798条查询结果,搜索用时 37 毫秒
991.
以人精囊腺cDNA为模板,用嵌套式PCR技术扩增出编码成熟人精液凝固蛋白I(semenogelin I,SgI)第85–136位氨基酸(SgI-52)的核苷酸序列并将其插入载体pMAL-p2X中,成功构建的表达载体pMAL-p2X/SgI-52转化大肠杆菌DH5α后,重组融合蛋白诱导表达于大肠杆菌周质中。经第X因子剪切及超滤处理,得到表达的重组SgI-52。质谱分析结果证明重组SgI-52为目的肽。重组人SgI-52对大肠杆菌ATCC25922标准株以及耐氨苄标准株ML-35P的最低抑制浓度MIC分别为32.45以及46.30?μg/mL。我们的结果及相关研究提示在人精液液化过程中人精液凝固蛋白I的不同降解产物可能行使不同的生物学功能,值得进行深入研究。 相似文献
992.
Flazin isolated from the fruiting bodies of Suillus granulatus was found to possess weak anti-HIV activity (EC(50)=2.36 microM, TI=12.1). To establish a SAR study, 46 flazin analogues were synthesized, and their anti-HIV activities were evaluated in vitro. Among them, flazinamide (9a) showed the most potent activity with an EC(50) value of 0.38 microM and a TI value of 312.0. The results suggested that appropriate substituents at positions 3, 1', and 5' of flazin might play a crucial role in determining their anti-HIV activities, and that flazinamide can be considered as a promising, readily available anti-HIV agent. 相似文献
993.
甘蓝型油菜中一类AP2/ERF转录因子的克隆和生物信息学分析 总被引:2,自引:0,他引:2
AP2/ERF转录因子家族是植物中广泛存在的一类转录因子,AP2/ERF这类转录因子主要参与植物的细胞周期、生长发育以及生物和非生物胁迫相关基因的表达调控。由于拟南芥和油菜同属于芸薹属,具有相似的基因信息,利用油菜UniGene数据库,以拟南芥ERF转录因子保守序列为探针,通过电子克隆从一个UniGene Cluster中分离得到三个同类的AP2/ERF转录因子,从cDNA序列、氨基酸序列的相似性、组成成分、理化性质、疏水性/亲水性分析、序列比对、进化树、功能域、二级结构、三级结构、无序化特性进行了预测和较为全面的分析。结果显示油菜来源的BnaERF1、BnaERF2和BnaERF3属于AP2/ERF转录因子的B-2亚族,是亲水性蛋白,在蛋白质的三级结构上与AtERF1相似。蛋白质无序化分析发现,油菜BnaERF1、BnaERF2和BnaERF3无序化程度小于拟南芥AtERF1。设计引物通过PCR和RT-PCR方法分别从甘蓝型双低油菜沪油15幼苗的DNA和cDNA中扩增了上述基因,初步分析BnaERF2没有内含子,BnaERF1和BnaERF3有内含子。另外,通过EST丰度分析显示,该类转录因子的表达最高峰在种子中,其次为花,在芽、茎和分生组织中没有检测出表达的存在。 相似文献
994.
目的:制备以Ⅰ型促性腺激素释放激素(GnRH Ⅰ)为导向部分,以绿脓杆菌外毒素的结构域Ⅱ(PEⅡ)为转膜区,以丝瓜毒素luffinS2为毒性部分的重组嵌合毒素GnRH-PEⅡ-luffinS,体外实验检测其对肿瘤细胞的杀伤作用。方法:重叠PCR法扩增GnRH-PEⅡ-luffinS的基因,克隆至表达载体pET32a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),挑取阳性克隆诱导表达,产物用Ni-NTA亲和层析柱纯化。纯化蛋白经重组肠激酶(rEK)切割去除Trx融合蛋白,XTT法检测重组毒素对HeLa、A549、HepG-2、SP2/0和鸡胚成纤维细胞(CEF)的体外细胞毒作用。结果:成功构建了GnRH-PEⅡ-luffinS的表达质粒,并在大肠杆菌中获得表达,纯化后的纯度为94%。GnRH-PEⅡ-luffinS对HeLa、A549、HepG-2和SP2/0的IC50分别为13.50μg/ml、13.74μg/ml、16.79μg/ml和26.07μg/ml,而对CEF无作用。结论:重组嵌合毒素GnRH-PEⅡ-luffinS对肿瘤细胞有较强的杀伤作用。 相似文献
995.
基于Desirability函数法对米根霉发酵制备富马酸的多目标优化 总被引:1,自引:0,他引:1
以富马酸产量和生产速率为目标,通过正交实验考察了种龄,接种量,葡萄糖和尿素浓度对两者的影响,进一步利用基于响应曲面方法的Desirability函数确定了葡萄糖和尿素的最佳浓度。结果表明,最佳的种龄和接种量分别为36h和15%,葡萄糖和尿素的优化浓度为132.73和0.0586g/l,此时模型预测的富马酸产量和生产速率达到71.42g/l和0.804g/(l.h),Desirability的函数值高达0.966。该条件下在5L发酵罐水平上进行验证试验,经过88h的发酵最终生成富马酸66.5g/l,生产速率达到0.755 g/(l.h),与未优化前相比,产量和生产速率分别提高了13.9%和15.8%,取得了理想的效果,实现了产量和生产速率的同时优化,为发酵法制备富马酸的工业化放大奠定了基础。 相似文献
996.
添加厨余垃圾对剩余污泥厌氧消化产沼气过程的影响 总被引:4,自引:0,他引:4
为提高剩余污泥厌氧消化的沼气产量和甲烷含量,研究了厨余垃圾的不同添加量对剩余污泥厌氧消化性能的影响。结果表明,在35℃下,随着剩余污泥中厨余垃圾添加量的增加,厌氧消化系统中碳氮质量比(C/N)、胞外多聚物(EPS)等生理生化指标均有不同程度的改善。其中当剩余污泥与厨余垃圾质量比为2:1时,混合有机废弃物中沼气产量和甲烷含量均达到最大值,每克挥发性固体(VS)产生了156.56mL沼气,甲烷体积分数为67.52%,分别比剩余污泥单独厌氧消化时的产气量提高了5倍和1.5倍。 相似文献
997.
998.
999.
基于nLSU rDNA序列分析探讨侧耳属系统发育关系 总被引:2,自引:0,他引:2
以PCR产物直接测序分析了侧耳属(Pleurotus)27个种41个茵株的nLSU rDNA序列,以Hohenbuehelia serotina和Lentinula edodes为外群,运用MEGA3.1软件中的邻接法(neighbor—joining)和最大简约法(maximums parsimony)分别构建侧耳属的系统发育树。分子系统发育树表明:Coremiopleurotus组和Pleurotus属内单、二系茵丝系统均为多系起源;P.rattenburyi,刺芹侧耳种族群(P.eryngii species—complex)与被划分在Lepiotarii组的栎侧耳P.dryinus能与侧耳属其他成员明显分开;红侧耳P.djamor、桃红侧耳P.salmoneostramineus、扇形侧耳P.flabellatus与贝盖侧耳P.calyptratus关系密切;金顶侧耳P.citrinopileatus与P.euosmus聚在一起,而与黄白侧耳P.conucopiae为不同的分类单元;肺形侧耳P.pulmonarius与P.abieticale亲缘关系较近。 相似文献
1000.
利用电离辐照创造小麦-冰草异源多粒新种质的初步研究 总被引:1,自引:0,他引:1
为了将冰草的多粒基因转入小麦,以具有多粒特性的小麦-冰草二体附加系4844.12为材料与小麦品种藁城8901杂交,对其杂种F1进行^60Co-1辐照处理。采用冰草P基因组特异SSR和SCAR标记对M2 236个单株进行鉴定,进而对部分含P染色质阳性植株进行基因组原位杂交(GISH)检测,初步分析发现有3株为小麦一冰草异源易位(渐渗)系;进一步的穗粒数分析表明,该3株材料具有多粒特性,可能成为小麦丰产育种的创新种质。 相似文献