CO1在侧耳属物种快速鉴定中的应用

以侧耳属Pleurotus15个种的15个菌株为材料,根据GenBank上侧耳属细胞色素c氧化酶亚基Ⅰ基因（cytochrome c oxidase subunit 1 gene,CO1）序列信息,设计引物CO332F、CO332R,进行第一轮PCR扩增,结果显示所有菌株都能得到单一条带,根据条带大小,15个菌株可分为4组。随后针对每个种设计特异性引物,进行第二轮PCR扩增,结果显示每个菌株只有在自己特异的引物中出现目的条带。通过两轮扩增,根据扩增条带的大小和有无,即可对15个种进行快速鉴定。     

新疆野生阿魏蘑的IGS2-RFLP及培养特征多样性分析

对28个新疆野生阿魏蘑样本进行IGS2-RFLP分析和双核体培养特征多样性分析。IGS2-RFLP分析结果表明,3种限制性内切酶共产生的多态性条带比率（PPB）为96.4%,总样本的Shannon信息指数（I）和Nei’s基因多样性指数（H）分别为0.364和0.230,平均相似系数0.665,表明其具有丰富的遗传多样性。在相似系数0.36水平上,UPGMA聚类分析将供试样本分为白灵侧耳和刺芹侧耳阿魏变种两个种群,且白灵侧耳的遗传多样性更为丰富。双核体培养特征多样性分析结果表明,供试样本间在最适生长温度、温度敏感性以及菌落形态等培养特征上具明显差异,基于UPGMA聚类分析大致将供试的野生阿魏蘑样本分为菌丝生长快、菌落形态舒展和菌丝生长慢、菌落局限两大组。双核体培养特征聚类与IGS2-RFLP分析聚类存在一定相关关系,培养特征有可能作为野生阿魏蘑种质鉴定的白灵侧耳的检出标志。     

基于nLSU rDNA序列分析探讨侧耳属系统发育关系

以PCR产物直接测序分析了侧耳属（Pleurotus）27个种41个茵株的nLSU rDNA序列,以Hohenbuehelia serotina和Lentinula edodes为外群,运用MEGA3．1软件中的邻接法（neighbor—joining）和最大简约法（maximums parsimony）分别构建侧耳属的系统发育树。分子系统发育树表明：Coremiopleurotus组和Pleurotus属内单、二系茵丝系统均为多系起源;P．rattenburyi,刺芹侧耳种族群（P．eryngii species—complex）与被划分在Lepiotarii组的栎侧耳P．dryinus能与侧耳属其他成员明显分开;红侧耳P．djamor、桃红侧耳P．salmoneostramineus、扇形侧耳P．flabellatus与贝盖侧耳P．calyptratus关系密切;金顶侧耳P．citrinopileatus与P．euosmus聚在一起,而与黄白侧耳P．conucopiae为不同的分类单元;肺形侧耳P．pulmonarius与P．abieticale亲缘关系较近。     

香菇菌株分子鉴别技术的分辨率比较

本研究运用酯酶同工酶、RAPD、IGS1和IGS24种方法鉴别2个野生香菇菌株和19个栽培香菇菌株,并比较这4种鉴别方法的分辨率,结果表明:16条酯酶同工酶带中有15条具有多态性,将21个供试菌株分成11个类型,分辨率为0.92;10个随机扩增引物共扩增出86个DNA片段,其中95.3%具有多态性,将21个供试菌株分成16个类型,分辨率为0.97;IGS1将21个供试菌株分成7个类型,分辨率为0.81;IGS2将21个供试菌株分成7个类型,分辨率为0.73。这4种鉴别方法中RAPD的分辨率最高,与这4种鉴别方法的综合分析结果相同,因此RAPD可以作为香菇菌株鉴别的可靠依据。     

IGS2-RFLP、SCoT和ISSR在白灵侧耳遗传多样性分析中的比较研究

应用IGS2-RFLP、SCoT和ISSR标记分析新疆5个采集地点的28个白灵侧耳野生样本的遗传多样性,比较这3种分子标记在白灵侧耳种质资源遗传多样性研究中的效用。结果显示,IGS2-RFLP的3个内切酶、5个SCoT引物、5个ISSR引物分别检测到42、59和77条多态性条带,多态性比率分别为91.3%、92.4%和92.8%。3种标记检测出的有效等位基因数(ne)和位点平均的预期杂合度(Hep)没有显著性差异。表明3种标记都适宜作为遗传学标记对白灵侧耳野生种质进行多样性分析。多态性检测效率最高的标记为ISSR,E=15.4,Ai=23.4,其次为IGS2-RFLP,E=14.0,Ai=22.4,SCoT则为最低,E=11.8,Ai=18.2。3种标记中,SCoT和ISSR标记的聚类结果极其相似,且均能较为准确地反映样本的地理来源,虽然二者的聚类图不完全相同。IGS2-RFLP的标记效率较高,准确性和可重复性最好,可用于菌株标准图谱的制作,更适用于品种权保护中的菌株鉴定鉴别;SCoT和ISSR标记的多态性高,信息量大,评价范围广,则更适用于白灵侧耳种质资源的遗传多样性研究。     

食用菌栽培种类野生种质的评价

我国是食用菌野生种质资源丰富的国家,目前已查明自然分布可栽培野生种类93种,分布于担子菌的33个属。我国人工栽培种类近70种（变种）,不同规模栽培有50种,商业规模栽培33种,分布于5目,12科,18属。与绿色植物的自养型光合作用合成有机物质相反,食用菌将植物光合作用合成的有机物分解,以体壁吸收方式摄取营养建造自身。这种生理特点的不同,导致其种质资源评价要求的不同。由于子实体形态相对于绿色植物简单,且易受环境条件的影响,常常导致以形态特征为主要依据进行分类鉴定陷入困境。另一方面,形态相似的多个可栽培近缘种在侧耳（Pleurotus）、木耳（Auricularia）、蜜环菌（Armillaria）等中广泛存在,完全靠形态特征进行分类鉴定就更加困难。因此,在食用菌可栽培种类野生种质评价中,ITS测序等成为获得菌种生物学种的常用鉴定技术。菌种的分离培养中常受到菌落形态相似真菌的污染,RAPD、ISSR或ITS测序等常用来进行菌种符合性鉴定。食用菌孢子传播的特点,使其分布地理区域广泛,地理区域的隔离产生种内的个体或群体间的差异,形成种群的多样性,常用拮抗反应进行营养亲和群（个体、菌株）的鉴定。不同区域气候和生态条件下的个体,长期的进化和对环境条件适应性的形成,导致可栽培利用的特点不同。栽培性状要通过栽培试验进行评价。栽培性状主要包括菌丝长速、温度反应、结实性、丰产性、抗性、商品形态和耐贮运性等。为了充分利用远缘优势,对于具可利用栽培性状的种质还需要与栽培菌株间的遗传距离分析,通常用生物化学和分子生物学方法进行。     

基于DNA拓扑异构酶II基因部分序列的侧耳属系统发育分析

对侧耳属（Pleurotus）14个种的14个菌株,亚侧耳属（Hohenbuehelia）1个种和离褶伞属（Lyophyllum）1个种的DNA拓扑异构酶II（EC 5.99.1.3）部分序列进行扩增分析。以灰盖鬼伞（Coprinus cinereus）、新型隐球酵母（Cryptococcus neoformans）和玉米黑粉菌（Puccinia polysora）等担子菌为外群,采用最大距离法、最大简约法和最大似然法构建侧耳属的系统发育树。结果表明：作为外群的三个物种独立于所有供试材料;侧耳属菌株作为一大类与供试的离褶伞属和亚侧耳属分开。侧耳属14个种又可细分成六支：可能为侧耳属起源最早的P. flabellatus、P. salmoneostramineus和P. djamor组成一组;P. tuberregium和P. pulmonarius均自成一组;P. abalonus和P. cystidiosus均产生束梗孢,聚为同组;P. eryngii var. eryngii、P. eryngii var. ferulae和P. nebrodensis为一组;另一组由P. ostreatus、P. columbinus、P. cornucopiae和P. citrinopileatus组成。按照侧耳属物种菌丝类型的不同,构建的系统发育树将该属14个种进行系群划分,单、二系菌丝分属于各个不同的分支中,说明单、二系菌丝均为多系起源,与用28S rDNA序列进行系统分析的结果一致。     

食用菌产业发展历史、现状与趋势

本文回顾了人类对食用菌认识和利用的历史,介绍了我国对食用菌栽培利用的早期贡献和近代对食用菌产业发展的贡献,以及全球食用菌产业的基本情况、欧美双孢蘑菇和亚洲食用菌产业的发展历史与现状,分析了世界食用菌产业格局的变化、生产方式和技术的转型,简述了食用菌科学研究的进展,同时对中国食用菌产业发展历程和现状进行了梳理,提出了全球食用菌产业将继续从发达地区向欠发达地区转移以及我国的生产方式将加快向组织化、规模化、标准化和专业化方向转变的进展。     

侧耳属食用菌高温胁迫条件优化研究

侧耳属真菌是我国最大规模栽培的食用菌,主要是糙皮侧耳Pleurotus ostreatus和白黄侧耳P. cornucopiae。高温是影响侧耳产量和质量的重要因子之一,确定高温胁迫条件是开展高温胁迫机制研究的方法学基础。以糙皮侧耳和白黄侧耳的11个菌株为材料,以硫代巴比妥酸反应产物（thiobarbituric acid reactive substances,TBARS）含量为主要生理指标,结合菌丝形态和生长等微生物学参数,开展了双核体菌丝高温胁迫条件的研究,包括胁迫的适宜温度、时间和菌龄等。结果表明,所有供试材料,高温胁迫后菌丝体内TBARS含量在28-40℃、0-48h范围内与温度和时间呈正相关,与之后的恢复生长率呈负相关,高温胁迫后菌丝体内TBARS含量和之后的恢复生长能力均与自身菌丝体生长和子实体形成的适宜温度无关。TBARS含量可作为菌丝高温胁迫生理研究条件确定的指标。与植物的最适温度加10℃不同,基于TBARS含量的糙皮侧耳和白黄侧耳高温胁迫研究条件应为Difco^TM Potato Dextrose Agar培养基,菌丝培养3d,最适温度加12℃,高温胁迫处理48h。     

一种快速辨别糙皮侧耳和肺形侧耳的方法

目的：建立一种快速、经济的方法辨别糙皮侧耳（P.ostreatus）和肺形侧耳（P.pulmonarius）。方法：在GenBank下载糙皮侧耳和肺形侧耳的ITS序列,经ClustalX序列比对,利用Primer 3设计特异引物组合1F（5′-GATAGATCTGTGAAGTCGTC-3′）、1R（5′-TCACAATTGGAAAGAAACC-3′）和2R（5′-TGCGTGCTATTGATGAGTGA-3′）,最后经PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳检测。结果：5个糙皮侧耳菌株均能得到2条带,分别为342bp和459bp。4个肺形侧耳菌株均能扩增到一条446bp的片段。结论：该组引物适合辨别糙皮侧耳和肺形侧耳。