一种可用于SiRNA转染的可降解的新型脂质聚合物

合成一种兼具阳离子脂质体和阳离子聚合物优点的可用于SiRNA的新型脂质聚合物载体.以低分子量的支链聚乙烯亚胺(BPEI,分子量600D)为基础,通过交联剂将油酸与之交联,形成PEI-交联剂-油酸为单元的高分子脂质聚合物.以稳定表达EGFP基因的HeLa-EGFP细胞为模型,比较脂质聚合物、高分子聚合物BPEI(MW 25KD)及阳离子脂质体Lipofectamine 2000介导的SiRNA转染效率,以MTT法检测转染后细胞毒性.将聚合物放置于中性环境37℃保温,检测在温育不同时间后结合FITC标记的寡核苷酸能力.脂质聚合物介导转染EGFP-SiRNA的细胞中,绿色荧光蛋白的信号下降了72.3%,下降幅度高于Lipofectamine 2000介导转粢的细胞,而BPEI介导的转染细胞中的荧光强度仅比空白对照下降20%左右.MTT结果显示在最适条件下,脂质聚合物的介导的SiRNA转染48h后,细胞存活率为94.87%,高于BPEI 25K和Lipofectamine 2000对照组(80.68%和64.87%).降解实验证实,脂质聚合物和BPEI25K相似,在与FITC标记的寡核苷酸结合后,使其荧光水平下降65%左右;在保温后,脂质聚合物对荧光的抑制能力逐步下降,在8h后其荧光强度与BPEI600对照组相似;BPEI 25K实验组在保温前后荧光强度无显著的变化.脂质聚合物是一种可降解的化合物,具有与Lipofectamine 2000相似的SiRNA转染效率,细胞毒性明显低于BPEI和Lipofectamine 2000.提示脂质聚合物兼具阳离子脂质体和阳离子聚合物的优点.     

精氨酸脱亚氨酶的表达、纯化和活性研究

目的：建立精氨酸脱亚氨酶的高效表达菌种和纯化工艺路线。方法：人工合成编码支原体精氨酸脱亚氨酶（arginine deiminase, ADI）的基因,构建pBV220-ADI原核表达载体,转染大肠杆菌DH5α中并诱导表达目的蛋白,离子交换层析和分子筛层析法纯化目标蛋白。采用体外精氨酸降解试验测定纯化产物活性。结果：成功构建了原核表达载体pBV220-ADI,基因侧序正确。转化大肠杆菌DH5α后筛选到高水平表达目的蛋白的菌株,目标蛋白以包含体形式存在于胞浆内,表达水平超过全菌体蛋白的35%。采用盐酸胍溶解包含体、低温条件下稀释和透析的方法进行复性。顺次采用阳离子交换和凝胶过滤层析对复性液进行纯化,最终获得纯度达到95%的活性产物。活性测定表明,纯化的ADI比活性为80IU/mg。结论：成功构建了ADI的高效表达菌种,建立了目标物质的分离纯化方法。     

美洲斑潜蝇对四季豆的危害损失及防治指标研究

采取自然感虫与药剂控制虫量相结合的方法 ,人为造成 6个不同虫情梯度 ,分析虫情指数与产量损失率之间的关系。结果表明 ,虫情指数与产量损失率之间成正相关 ,回归方程为Y =1 0 0 8+0 7661X ,再根据经济允许水平求出不同产量水平下的防治指标     

孕酮分泌遗传规律的频域分析

选用３～７产成年民母猪２８头,代表９个家系,分别在配种后第６天上午９：００～１１：００间,进行尾部连续采血,间隔１０ｍｉｎ收集血样１次,共采１２点。对外周血中孕酮进行放免测定,并进行傅里叶转换,分辨出幅值。实验中,不同采样点间激素含量变动范围较大,很难得出较为合理的结论。经傅氏转换后,对各频率内幅值进行遗传参数估计：５级谐波为高遗传力（０．９３２）,基波、２级、３级谐波为中等遗传力,其他各级谐波为低遗传力。肯定了民猪黄体细胞分泌孕酮能力的特有优势。高遗传力与低遗传力成分的共同存在,说明了孕酮的分泌受着遗传及环境的共同影响。基波、１级及５级谐波与产仔数和产活仔数的相关为负遗传相关,而其他谐波却为正遗传相关,这意味着民猪目前的产仔性能尚未达到最佳状态,还有巨大潜力。各谐波与发情持续期均为负遗传相关,肯定了孕酮对发情症状的抑制作用。但以３级和５级谐波相关强度最大,选择反应最强。由于３级谐波与产仔数及产活仔数为正遗传相关,故应加大对５级谐波的选择强度。民猪血液中孕酮的分泌,在各谐波间尚存在着一定的不平衡,其繁殖潜力有待于进一步挖掘。如采取适当的方法,必然会产生较大的选择反应,进而提高民母猪的繁殖性能。     

柔毛淫羊藿生物量与生殖配置研究

探索了柔毛淫羊藿在有性繁殖时期不同生境和不同发育阶段的生殖配置,以探讨柔毛淫羊藿的生物量及生殖配置的内在规律.结果如下:随着生长季节的变化,柔毛淫羊藿总生物量呈现出低-高-低的趋势,柔毛淫羊藿生物量积累最快的时间为柔毛淫羊藿花期和果期.其中地上部分生物量在不断增加,地下部分生物量变化较小,从而根冠比在有性繁殖时期逐渐下...     

姜黄素与5-FU联用对结肠癌SW480细胞的生长抑制与凋亡诱导作用的研究北大核心CSCD

本文应用MTT检测法、基于EB/AO双染的荧光显微观察法和FITC/PI双染的流式细胞检测技术,从细胞生长、细胞凋亡和细胞周期等方面研究了姜黄素与5-FU联用对结肠癌SW480细胞的效应。结果显示,姜黄素(25μM)分别与低剂量(2.4μM)、中剂量(4.8μM)5-FU联合作用能有效地抑制SW480细胞的生长,诱导细胞凋亡并将细胞周期阻滞在S期。姜黄素与低剂量5-FU联用组的效果好于中剂量(4.8μM)5-FU单用组(P<0.05),而姜黄素与中剂量5-FU联用组的效果好于高剂量(9.6μM)5-FU单用组(P<0.05),提示姜黄素能增强5-FU抗结肠癌SW480细胞的作用或对5-FU有协同效应。本研究为临床上应用姜黄素作为5-FU治疗结肠癌的辅助用药,以减少5-FU的使用剂量,从而降低其毒副作用提供了初步的实验依据。     

20世纪遗传学的发展轨迹及其启示

20世纪是遗传学诞生并飞速发展的世纪。在这 10 0年里 ,遗传学所取得的每一巨大成就 ,如 DNA双螺旋结构的发现、DNA重组技术的创立、人类基因组计划的实施以及动物克隆技术的应用等 ,对人类社会的发展都产生了深刻的影响。在当今的生命科学领域 ,遗传学占有举足轻重的地位 ,已成为影响整个自然科学乃至人类社会的带头学科。可以说 ,遗传学是自然科学所有门类中发展最快、影响最深、应用价值最大的学科之一。众所周知 ,遗传学 (genetics)是研究生物体遗传与变异规律及其物质基础的科学。经过百年的发展 ,现代遗传学的研究十分广泛 ,已成为…     

辽东山区天然次生林能量平衡和蒸散

基于辽宁冰砬山森林生态系统定位研究站2012年森林内、外微气象观测数据,采用波文比-能量平衡法(BERB)研究了辽东山区天然次生林能量平衡组分及蒸散特征。结果表明,天然次生林全年获得净辐射能量(Rn)为1.63×109J/m2,其中生长季Rn占全年的71%。Rn月均值呈单峰状季节变化;5月份Rn最大,达101.73 W/m2;12月份最小,仅为-2.38 W/m2。Rn在晴朗天气的日变化呈单峰型,峰值出现在12:00前后,Rn在日出后0.5 h至日落前1.5 h为正值,其它时间为负值。潜热通量(LE)、感热通量(H)在晴朗天气呈单峰型日变化规律。LE呈单峰型季节变化,7月份最大。H呈双峰型季节变化,峰值在4月份,次峰值在9月份。波文比(β)近似呈"U"字型季节变化,非生长季β均值为1.50,即H占有效能量的60%,生长季β均值为0.43,即LE占有效能量的70%。生长季土壤热通量(G)为能量支出项,约占有效能量的2.5%,晴朗天气呈单峰型日变化。非生长季G为能量收入项,约占有效能量的6.8%,1月份几乎没有日变化。辽东山区天然次生林全年蒸散(E)总量为541.8 mm,占全年降水总量的70.3%,蒸散耗水是该森林生态系统最主要的水分支出项。     

姜黄素与5-FU联用对结肠癌SW480细胞的生长抑制与凋亡诱导作用的研究

本文应用MTT检测法、基于EB/AO双染的荧光显微观察法和FITC/PI双染的流式细胞检测技术,从细胞生长、细胞凋亡和细胞周期等方面研究了姜黄素与5-FU联用对结肠癌SW480细胞的效应。结果显示,姜黄素(25μM)分别与低剂量(2.4μM)、中剂量(4.8μM)5-FU联合作用能有效地抑制SW480细胞的生长,诱导细胞凋亡并将细胞周期阻滞在S期。姜黄素与低剂量5-FU联用组的效果好于中剂量(4.8μM)5-FU单用组(P0.05),而姜黄素与中剂量5-FU联用组的效果好于高剂量(9.6μM)5-FU单用组(P0.05),提示姜黄素能增强5-FU抗结肠癌SW480细胞的作用或对5-FU有协同效应。本研究为临床上应用姜黄素作为5-FU治疗结肠癌的辅助用药,以减少5-FU的使用剂量,从而降低其毒副作用提供了初步的实验依据。     

纹状体中等多棘神经元侧抑制效应与基底神经节运动功能调控

中等多棘神经元(medium spiny neurons,MSNs)是纹状体的主要投射神经元,其细胞膜上表达的不同类型多巴胺(dopamine,DA)受体,分别参与基底神经节直接与间接两条运动神经通路功能的调节。近年来发现,纹状体相邻MSNs之间还存在突触连接,这种突触结构对直接或间接通路的电活动产生侧抑制效应(lateral inhibition),并通过其前馈作用进一步调节基底神经节信息输出核团的兴奋性。因此,纹状体MSNs的侧抑制效应对运动的精确调节具有重要意义。本文拟从纹状体神经元构筑与侧抑制突触效应、纹状体MSNs侧抑制突触效应参与基底神经节调控的生理学机制、MSNs侧抑制效应异常与帕金森病(Parkinson's disease,PD)等方面对纹状体MSNs侧抑制效应与基底神经节功能调控的机制进行综述。