精氨酸脱亚氨酶的表达、纯化和活性研究

目的：建立精氨酸脱亚氨酶的高效表达菌种和纯化工艺路线。方法：人工合成编码支原体精氨酸脱亚氨酶（arginine deiminase, ADI）的基因,构建pBV220-ADI原核表达载体,转染大肠杆菌DH5α中并诱导表达目的蛋白,离子交换层析和分子筛层析法纯化目标蛋白。采用体外精氨酸降解试验测定纯化产物活性。结果：成功构建了原核表达载体pBV220-ADI,基因侧序正确。转化大肠杆菌DH5α后筛选到高水平表达目的蛋白的菌株,目标蛋白以包含体形式存在于胞浆内,表达水平超过全菌体蛋白的35%。采用盐酸胍溶解包含体、低温条件下稀释和透析的方法进行复性。顺次采用阳离子交换和凝胶过滤层析对复性液进行纯化,最终获得纯度达到95%的活性产物。活性测定表明,纯化的ADI比活性为80IU/mg。结论：成功构建了ADI的高效表达菌种,建立了目标物质的分离纯化方法。     

免疫营养素对恶性梗阻性黄疸胆道支架植入术后感染发生率的影响

目的:探讨免疫营养素对恶性梗阻性黄疸患者胆道支架植入术后感染的发生情况及临床预后的影响。方法:选择2013年2月到2016年1月选择在我院诊治的恶性梗阻性黄疸患者156例,据入院顺序分为观察组与对照组各78例,两组均行PTCD~+胆道金属支架植入术,观察组入院当日开始给予免疫营养制剂(在普通低脂饮食基础上添加鱼油脂肪酸和复方谷氨酰胺肠溶胶囊)口服,对照组入院当日开始给予普通低脂饮食,两组均治疗5 d,观察两组预后情况。结果:两组术后15 d的CD4~+值都明显高于术后1 d(P0.05),观察组术后15 d的CD4~+值也明显高于对照组(P0.05),两组不同时间点的CD8~+值对比差异无统计学意义(P0.05)。观察组与对照组术后15 d的血清IL-6和TNF-α值都明显低于术后1 d(P0.05),观察组术后15 d的血清IL-6和TNF-α值也明显低于对照组(P0.05)。观察组术后感染发生率为5.1%,明显低于对照组的20.5%(P0.05)。结论:胆道支架植入术术前应用免疫营养素可改善恶性梗阻性黄疸患者的免疫功能,抑制炎症反应,从而减少感染的发生率,促进患者的康复。