抑癌基因Fhit重组腺病毒的构建表达及其在结肠癌细胞中的生物学功能

目的：构建携带抑癌基因Fhit的重组腺病毒并通过其研究Fhit蛋白对结直肠癌细胞增殖能力的影响。方法：利用PCR方法从人胎肝文库中克隆Fhit基因片段,Fhit基因PCR产物连入T载体构建重组质粒pMD18T-Fhit。测序正确后,将基因片段导入ptrack-CMV穿梭质粒中,构建重组穿梭载体ptrack-CMV-Fhit。将经PmeⅠ 单酶切线性化的ptrack-CMV-Fhit和骨架腺病毒质粒pAdEasy-1共转BJ5183大肠杆菌,使ptrack-CMV-Fhit和pAdEasy-1发生同源重组。经PacI酶切鉴定正确后,将重组腺病毒质粒转染293A细胞获得表达Fhit蛋白的重组腺病毒rAd-Fhit,将获得的重组腺病毒感染结肠癌细胞,采用蛋白印迹法检测外源Fhit蛋白的表达,并进一步观察其对细胞增殖能力的影响。结果：我们成功构建了携带有Fhit基因的重组腺病毒,且能够在结肠癌细胞中成功表达Fhit蛋白。在结肠癌细胞中,Fhit蛋白明显减弱了结肠癌细胞的增殖能力。结论：在结肠癌细胞中,Fhit基因可能扮演抑癌基因的角色,而表达Fhit的重组腺病毒很可能成为一种结肠癌生物治疗的新策略。     

濒危植物连香树居群的遗传多样性和遗传分化研究

利用ISSR分子标记技术对濒危植物连香树10个居群的遗传多样性和遗传变异进行了分析,结果表明:连香树物种水平遗传多样性较高,多态位点百分率(PPB)达到69.59%,Nei’s基因多样性指数(H)和Shannon信息指数(I)分别为0.231 3和0.351 4;而在居群水平上,多态位点百分率(PPB)为30.61%,Nei’s基因多样性指数(H)和Shannon信息指数(I)分别为0.115 6和0.173 3。遗传变异分析表明,居群间遗传分化程度高,遗传分化系数(GST)为0.500 3,居群间基因流Nm为0.527 3。Mantel检测,居群间的遗传距离和地理距离之间不存在显著的相关性。生境的片断化使居群间的基因流受阻,可能是导致居群间高遗传分化和居群水平低遗传多样性的主要原因。     

Survivin在肺鳞癌、腺癌组织中的表达、临床意义及其与P53表达的相关性

目的:探讨survivin在肺鳞癌、腺癌组织中的表达、临床意义及其与P53表达的临床病理相关性.方法:采用免疫组织化学(Envision二步法)检测survivin和P53在65例肺鳞癌、腺癌组织及15例肺良性病变组织中的表达情况.结果:survivin、P53的阳性率分别为58.5%(38/65)、53.8%(35/65),显著高于肺良性病变组织的0(0/15)、0%(0/15);survivin表达与肺鳞癌、腺癌的低分化(P<0.05)、淋巴结转移呈正相关(P<0.05),与患者预后负相关(P<0.05);P53的表达与肺癌组织的分化程度、TNM分期及淋巴结转移均有关(P<0.05);并且Survivin表达与P53表达呈正相关(P<0.05).结论:Survivin的表达与肺鳞癌、腺癌的低分化、淋巴结转移正相关;过度表达提示预后不良;Survivin有望成为肺癌诊断和基因治疗的新靶点;survivin和p53的协同表达可能是促进肺癌的恶性进展的重要因素.     

产地农产品质量安全舆情及应急处置研究

产地舆情是农产品质量安全网络舆情的关键环节,深入研究产地舆情发生发展、关键要素、敏感分级,建立健全舆情应对监测体系和报告机制,对完善农产品质量安全突发事件的应急处置和减少网络舆情负面影响具有重要的意义。     

鼻咽癌中TSG101基因的突变研究

应用PCR-SSCP方法对鼻咽癌中TSG101基因的编码区进行突变检测,以探讨该基因在鼻咽癌变过程中的作用,16例鼻咽癌标本中未发现TSG101基因编码区存在突变,以上结果可以初步排除TSG101基因在鼻咽癌中突变的可能。     

抗菌肽JH-3治疗沙门氏菌感染的效果评价

【目的】沙门氏菌(Salmonella)是重要的人畜共患传染病原菌,其感染是引起世界性胃肠疾病的主要因素,全球每年大概有2 100万伤寒病例,给世界公共卫生带来严重威胁。目前抗生素滥用问题严峻,急需寻找一种抗生素的替代品。抗菌肽JH-3是本实验室分离并人工改造后具有广谱杀菌活性的小肽,以沙门氏菌标准菌株CVCC541为研究对象,在小鼠模型上评价抗菌肽JH-3治疗沙门氏菌感染的效果。【方法】在CVCC541感染BALB/c小鼠前3 d连续腹腔注射抗菌肽JH-3或环丙沙星(B3d,共计40 mg/kg)和感染后3 d连续注射JH-3或环丙沙星(P3d,共计40 mg/kg)进行治疗。【结果】发现环丙沙星预防组效果最佳,抗菌肽JH-3的预防组(B3d)效果较好,可显著保护小鼠免受致死剂量CVCC541的攻击,小鼠存活率高达100%,临床症状评分、血液和脏器荷菌数降低,小肠段病理变化减轻,效果与环丙沙星治疗组相当;而感染3 d后JH-3治疗效果较差,临床症状评分、脏器荷菌量以及小肠病理变化均显著高于3 d前预防组,但3 d后治疗组小鼠存活率为70%,仍明显高于单独感染组。【结论】系统评价了抗菌肽JH-3不同给药时间对沙门氏菌感染的治疗效果,预防性给药方式的抗菌作用最佳,与环丙沙星治疗效果相当,为新型抗菌药物的研究提供参考。     

金樱根化学成分的研究

金樱根为三金片的主要成分,但目前对于金樱根的化学成分和药理作用研究甚少。为了阐明金樱根的物质基础和生物活性,该研究采用硅胶、Sephadex LH-20、MCI gel CHP 20P等柱色谱以及HPLC半制备等方法,对金樱根(Rosa laevigata)的化学成分进行研究。结果表明:从中共分离得到9个化合物,经过波谱数据分析结合文献对照分别鉴定为儿茶素(1),表儿茶素(2),rosamultin(3),sericoside(4),2α,3α,19α,23-tetrahydroxy-urs-12-en-28-oic acid-3-O-β-D-glucopyranosyl ester(5),kaji-ichigoside F1(6),β-D-Glucopyranosyl 3β,19α-dihydroxy-2-oxo-urs-12-en-28-oate(7),胡萝卜苷(8),β-谷甾醇(9),其中化合物2、4、5、7为首次从该植物中分离得到。该研究结果为金樱根在功能医药领域的开发利用提供了理论依据。     

HIF-1α在大鼠造影剂肾病中的表达及对肾小管损伤的影响

目的:探讨HIF-1α在造影剂肾病大鼠血清中的表达水平及对肾小管损伤的影响。方法:将45只SD大鼠随机分为三组,每组15只。其中空白对照组(A组)大鼠禁食水12 h后,于尾静脉注射氯化钠注射液0.5 m L,共三次,每次间隔15 min。造影剂肾病组(B组)大鼠禁食水12 h后,于尾静脉以10 mg/kg注射吲哚美辛,15 min后以10 mg/kg注射左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME),15 min后再注射碘比醇(3 g I/kg)。阿托伐他汀钙组(C组)大鼠于实验前3 d开始喂食阿托伐他汀钙片,连续喂食3天,剂量为80mg/kg/d,再禁食水12 h后,制作造影剂肾病模型,步骤同造影剂肾病组。观察并比较三组大鼠肾功能指标(BUN、Cr)变化、HIF-1α表达水平及肾小管损伤情况。结果:造影剂肾病组大鼠BUN水平低于阿托伐他汀钙组和空白对照组,而Scr水平高于阿托伐他汀钙组和空白对照组,差异均具有统计学意义(P0.05)。阿托伐他汀钙组大鼠BUN水平低于空白对照组,而Scr水平高于空白对照组,差异具有统计学意义(P0.05)。造影剂肾病组大鼠肾小管损伤高于阿托伐他汀钙组和空白对照组,阿托伐他汀钙组大鼠肾小管损伤高于空白对照组,差异均具有统计学意义(P0.05)。造影剂肾病组大鼠HIF-1α表达高于阿托伐他汀钙组和空白对照组,阿托伐他汀钙组大鼠HIF-1α表达高于空白对照组,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论:造影剂肾病发生时存在缺氧情况,阿托伐他汀钙在造影剂肾病中具有保护作用。     

地中海富盐菌中非编码RNA的鉴定与分析

【目的】通过转录组高通量测序技术(即RNA-seq),结合生物信息学分析和分子生物学方法,在组学水平鉴定极端嗜盐菌中可能的非编码RNA(nc RNA)。【方法】将培养至对数中期的地中海富盐菌在不同盐浓度下处理30分钟,提取RNA,进行链特异的转录组测序和5′端区分的转录组测序,通过生物信息学分析在全基因组范围内鉴定nc RNA,预测其转录边界;然后通过Northern blot和环化RNA反转录聚合酶链式反应(CR-RT-PCR)对部分预测的nc RNA进行实验验证。【结果】比较两种RNA-seq技术在不同培养条件下的RNA测序结果和对转录单元的精细分析,共鉴定到105个高可信度的nc RNA,并发现4个在不同盐度下表达差异较大的nc RNA,通过Northern blot和CR-RT-PCR验证了inc RNA1436和inc RNA1903的表达情况、转录本、转录起始位点及终止位点等。【结论】首次在组学水平鉴定了地中海富盐菌中的nc RNA,不同盐浓度刺激下部分nc RNA的转录差异暗示其有可能参与地中海富盐菌对盐胁迫的适应,高可信度nc RNA的组学发现为今后全面开展嗜盐古菌nc RNA的功能机制研究提供了基础数据及重要的切入点。     

黄土旱塬区苹果园土壤水分动态

选取黄土旱塬区盛果期果园,于2009-2013年对0～500 cm土层土壤含水量进行连续监测,了解其土壤水分动态变化规律.结果表明： 平水年,苹果园耗水主要发生在0～300 cm土层;年降水量小于400 mm时,果树主要消耗300 cm以下土层土壤水分;受年降水量和苹果耗水的共同影响,200～300 cm土层是土壤水分的最大波动层;苹果园4-6月底季节性干旱明显,土壤水分的蓄积主要发生在7-10月中旬,该期的土壤蓄水能有效缓解下一年的春季干旱.