GDNF的生物学效应对脂筏中胞膜蛋白定位的重要性研究*

摘要目的：探讨GDNF的生物学效应对胞膜蛋白在脂筏的定位的影响。方法：首先以PBS 或GDNF 预处理体外培养的真核细 胞,提取脂筏,以免疫印迹方法检测三种胞膜蛋白（RET,NCAM140 及integrinβ1）在脂筏的含量变化。结果：GDNF预处理组RET 和NCAM140蛋白在脂筏的含量增加,而integrinβ1 蛋白的含量无显著性变化。在脂筏中也可检测到integrinβ1 蛋白。结论： GDNF 可影响某些胞膜蛋白在细胞膜上的定位,使其招募到脂筏,这可能是GDNF的一种重要生物学效应。     

负调节基因nsdA在链霉菌中同源性及激活沉默抗生素合成基因簇的研究

nsdA基因是在天蓝色链霉菌中发现的抗生素合成负调控基因。以nsdA基因片段为探针,通过Southern杂交发现nsdA存在于多种链霉菌中。根据天蓝色链霉菌和阿维链霉菌的nsdA序列设计PCR引物,扩增多种链霉菌中nsdA基因并测序。发现在不同链霉菌中nsdA基因的相似性高达77%～100%。其中变铅青链霉菌与天蓝色链霉菌A3(2)的nsdA序列100%一致。变铅青链霉菌通常不合成放线紫红素,中断nsdA获得的突变菌株WQ2能够合成放线紫红素;在WQ2中重新引入野生型nsdA,又失去产抗生素能力。表明nsdA的中断可以激活变铅青链霉菌中沉默的放线紫红素生物合成基因簇的表达;nsdA的广泛存在及其序列高度保守则提示可以尝试用于这些菌种的抗生素高产育种。     

乙型肝炎病毒PreS2S基因在毕赤酵母中表达的研究

构建重组质粒PHIL-D2/PreS2S以研究乙肝病毒PreS2(120-146)S基因编码蛋白在毕赤酵母中的表达。通过PCR扩增获得PreS2S片段,插入含AOX1启动子的Pichia Pastoris表达载体PHIL-D2中,构建重组表达质粒PHIL-D2/PreS2S,转化酵母宿主菌GS115。挑取阳性克隆摇床培养,甲醇诱导表达。通过ELISA、RPHA鉴定表达产物。成功构建了PHIL-D2/PreS2S真核表达载体,经过序列分析,插入的基因为在中国流行的adr亚型。在毕赤酵母中重组载体表达了S蛋白,S蛋白的表达量为34.9 mg/L,PreS2抗原检测为强阳性。利用毕赤酵母表达系统能够有效地表达乙型肝炎病毒的PreS2S蛋白,PreS2S蛋白具有良好的生物学活性。     

花事对联轶事一则

梁启超十岁那年,一天随父亲到朋友家做客。一进家门,他便被院子里一株蓓蕾初绽的杏树迷住了,并偷偷地折下一枝,遮掩在宽大的袖筒里。谁知,他的这一微妙之举,恰恰被父亲和朋友家人看在眼里。他的父亲教子甚严,但又不好当面开口,便匆匆走进客厅安然落座。     

西藏黑斑原鮡消化道寄生蠕虫的群落结构和感染情况

为了解西藏特有鱼类黑斑原鮡(Glyptosternum maculatum)消化道寄生蠕虫的群落结构和感染情况, 于2019年5—8月对383尾黑斑原鮡进行了调查。在黑斑原鮡消化道中共发现7种寄生蠕虫, 分别为深槽绦虫未定种(Bothriocephalus sp.)、原头绦虫未定种(Proteocephalus sp.)、异肉吸虫未定种(Allocreadium sp.)、新棘吻虫未定种(Neoechinorhynchus sp.)、裸鲤棘头虫(Echinorhynchus gymnocyprii)、Contracaecum eudyptulae和杆咽线虫未定种(Rhabdochona sp.), 并对各个物种的形态特征进行了描述。将黑斑原鮡按整个群体、不同性别和不同全长群体进行划分, 分别对其消化道寄生蠕虫的群落多样性和优势虫种进行分析, 并对各寄生蠕虫物种的感染情况进行统计。结果表明: 在黑斑原鮡群体中, 消化道寄生蠕虫群落的Shannon-Wiener指数为1.53, Berger-Parker指数为0.37, 优势物种为C. eudyptulae, 其感染数量、感染率、感染强度和平均丰度均为最高; 在黑斑原鮡不同性别群体中, Shannon-Wiener指数为0.26—1.57, Berger-Parker指数为0.34—0.93, 优势物种为C. eudyptulae, 雄性群体中新棘吻虫未定种也为优势虫种, 两者的感染率和平均丰度均较高; 在黑斑原鮡不同全长群体中, Shannon-Wiener指数为0.22—1.59, Berger-Parker指数为0.34—0.94, 优势物种为C. eudyptulae或新棘吻虫未定种, 感染率和平均丰度基本以二者为最高。研究进一步明确了西藏鱼类寄生虫的种类组成和寄生特点, 为研究体内寄生蠕虫的环境适应性及与宿主的协同进化提供基础资料。     

流感病毒疫苗佐剂研究现状

流行性感冒是一类由流感病毒引起的急性呼吸道传染病。其发病率高、传染性强,因此作为最佳预防手段的流感疫苗关注度日益提升。而佐剂的使用可提升流感疫苗的效果并减少相应抗原的使用量,因此成为研究热点。就应用于流感疫苗中佐剂的研究现状做一综述。     

A33启动子结肠癌特异性探究及SV40增强子对其转录活性影响

为了探究A33核心启动子结肠癌特异性及SV40增强子对其转录水平的影响,该研究通过构建A33核心启动子和带SV40增强子的A33核心启动子(eA33)的荧光素酶报告基因载体pGL3-A33和pGL3-eA33,与内参照pRL-SV40质粒共转染至不同的细胞系中,利用双荧光素酶检测系统检测分析了A33和eA33启动子在不同细胞系中的转录活性。结果显示,A33核心启动子在结肠癌细胞系中具有转录活性低,但结肠癌特异性好的特点,而在其他类型癌细胞中基本没有活性。同时发现,eA33在各类癌细胞中的转录水平与A33相比,均呈大幅度提高,有显著性差异(P<0.01),但SV40增强子能显著增强A33启动子转录活性的同时减低了其结肠癌特异性。这为靶向癌症基因—病毒治疗策略在结肠癌的生物治疗应用中寻找结肠癌特异性的启动子奠定了研究基础。     

MiR-210在黑素瘤细胞铁死亡中的作用和机制研究

摘要 目的：探讨miR-210在黑素瘤细胞铁死亡中的作用及其可能调控机制。方法：通过qRT-PCR实验检测0.5 μM铁死亡诱导剂RSL3刺激前后黑素瘤细胞系A2058和451Lu中miR-210的表达水平变化情况;在0.5 μM铁死亡诱导剂RSL3刺激的同时,给予antagomiR-210处理抑制黑素瘤细胞系A2058和451Lu中miR-210的表达后,通过CCK8法检测细胞存活水平,通过流式细胞术检测细胞内lipid ROS水平;在此基础上,通过生物信息学分析、qRT-PCR实验、免疫印迹实验和萤光素酶报告实验明确miR-210对靶分子TFRC的调控作用;在0.5 μM铁死亡诱导剂RSL3刺激的条件下,给予antagomiR-210处理抑制miR-210的表达,同时使用siRNA沉默TFRC的表达水平,通过CCK8法检测细胞存活水平。结果：1）在0.5 μM RSL3刺激后,黑素瘤细胞系A2058和451Lu中miR-210的表达水平显著升高;2） 在0.5 μM RSL3刺激后,抑制miR-210的表达可加剧黑素瘤细胞系A2058和451Lu的死亡,同时显著增加细胞内lipid ROS水平;3）miR-210可直接结合TFRC mRNA的3''UTR区域,过表达miR-210可以显著抑制TFRC的转录和蛋白表达;4）在0.5 μM RSL3刺激的条件下,沉默TFRC的表达可以显著逆转抑制miR-210对黑素瘤细胞系A2058和451Lu铁死亡的促进作用。结论：miR-210是黑素瘤细胞铁死亡的重要抑制因子,且是通过靶向调控TFRC实现的。     

产木聚糖酶枯草芽孢杆菌构建及表达条件优化

枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)具有很强的分泌能力,产酶能力强,属于食品级安全微生物.以枯草芽孢杆菌为宿主菌异源表达木聚糖酶,采用同源重组的方法将木聚糖酶基因连接到载体pWB980上,构建表达载体pWB980-xynZF-2,电击转化枯草芽孢杆菌WB600,获得重组工程菌WB600-pWB980-xynZF-2.对重组工程菌进行单因素发酵条件优化和正交试验.结果表明:重组枯草芽孢杆菌摇瓶发酵的最适接种量1％、种龄14 h、装液量50 mL、温度34℃,转速160 r/min、发酵时间192 h.在摇瓶发酵条件下,木聚糖酶产量可达到0.168 U/mL.