MiR-210在黑素瘤细胞铁死亡中的作用和机制研究

摘要 目的：探讨miR-210在黑素瘤细胞铁死亡中的作用及其可能调控机制。方法：通过qRT-PCR实验检测0.5 μM铁死亡诱导剂RSL3刺激前后黑素瘤细胞系A2058和451Lu中miR-210的表达水平变化情况;在0.5 μM铁死亡诱导剂RSL3刺激的同时,给予antagomiR-210处理抑制黑素瘤细胞系A2058和451Lu中miR-210的表达后,通过CCK8法检测细胞存活水平,通过流式细胞术检测细胞内lipid ROS水平;在此基础上,通过生物信息学分析、qRT-PCR实验、免疫印迹实验和萤光素酶报告实验明确miR-210对靶分子TFRC的调控作用;在0.5 μM铁死亡诱导剂RSL3刺激的条件下,给予antagomiR-210处理抑制miR-210的表达,同时使用siRNA沉默TFRC的表达水平,通过CCK8法检测细胞存活水平。结果：1）在0.5 μM RSL3刺激后,黑素瘤细胞系A2058和451Lu中miR-210的表达水平显著升高;2） 在0.5 μM RSL3刺激后,抑制miR-210的表达可加剧黑素瘤细胞系A2058和451Lu的死亡,同时显著增加细胞内lipid ROS水平;3）miR-210可直接结合TFRC mRNA的3''UTR区域,过表达miR-210可以显著抑制TFRC的转录和蛋白表达;4）在0.5 μM RSL3刺激的条件下,沉默TFRC的表达可以显著逆转抑制miR-210对黑素瘤细胞系A2058和451Lu铁死亡的促进作用。结论：miR-210是黑素瘤细胞铁死亡的重要抑制因子,且是通过靶向调控TFRC实现的。     

ATP-柠檬酸裂解酶在黑素瘤维罗非尼治疗抵抗中的作用机制研究

目的:探讨ATP-柠檬酸裂解酶(ATP-citrate lyase,ACLY)在黑素瘤维罗非尼治疗抵抗中的作用及其可能机制。方法:通过Western blot实验检测5μM维罗非尼处理前后黑素瘤细胞中ACLY的表达水平,采用shRNA干涉黑素瘤细胞中ACLY的表达后再给予5μM维罗非尼处理,通过流式细胞术检测细胞凋亡水平;通过Western blot实验检测黑素瘤特异性转录因子MITF的表达水平,以及抗凋亡蛋白BCL-2和促凋亡蛋白BAX的表达水平。结果:1)维罗非尼处理后黑素瘤细胞ACLY的表达水平较处理前明显升高;2)沉默ACLY可以显著增加维罗非尼处理后黑素瘤细胞的凋亡水平;3)在维罗非尼处理下,沉默ACLY可以导致MITF和BCL-2表达水平较对照组显著降低,BAX表达水平升高。结论:ACLY表达水平升高参与了黑素瘤维罗非尼治疗抵抗,可能与其调控MITF表达的作用有关。