球孢白僵菌代谢产物的研究概况

球孢白僵菌（Ｂｅａｕｖｅｒｉａｂａｓｉａｎａ（Ｂａｌｓ．）ｕｎｉｌ）作为一种广谱性微生物杀虫剂,在生物防治中受到人们的极大重视,对其杀虫机理国外已进行了较多研究［１］,并提出多种假说,其中“胞外水解酶”假说是公认一种看法,即真菌菌丝合成并分泌胞外水解...     

外源钙调素对粟酒裂殖酵母细胞增殖的影响

外源钙调素（ＣａＭ）对粟酒裂殖酵母（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｐｏｍｂｅ）细胞增殖的影响。实验结果表明外源ＣａＭ能明显抑制粟酒裂殖酵母细胞的增殖,其作用方式是延长了粟酒裂殖酵母细胞生长的延滞期,抗粟酒裂殖酵母ＣａＭ抗体,ＴＦＰ及Ｐｈｅｎｙｌ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－４Ｂ能降低ＣａＭ对细胞生长的抑制作用,而Ｃａ＾２＋及Ｃａ＾２＋螯合剂ＥＧＴＡ对ＣａＭ的抑制作用均无影响。以上结果提示,外     

产二十二碳六烯酸等多不饱和脂肪酸真菌的筛选

从土壤中筛选出一株产二十二碳六烯酸（ＤＨＡ）的丝状真菌,菌丝含油２１．２３％,ＤＨＡ占总脂肪酸２．５１％;同时含二十碳五烯酸（ＥＰＡ０,占总脂肪酸的０．４１％;不饱和脂肪占总脂肪酸的８０％。经鉴定为头孢霉属（Ｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｉｕｍ ｓｐ．）真菌。同时发现两株菌含ＥＰＡ,经鉴定为小克银汉霉（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌａ ｓｐ．）和毛霉（Ｍｕｃｏｒ ｓｐ．）。在这几个属中发现ＤＨＡ和ＥＰＡ尚属首     

产二十二碳六烯酸等多不饱和脂肪酸真菌的筛选*

从土壤中筛选出一株产二十二碳六烯酸（DHA）的丝状真菌,菌丝含油21.23％,DHA占总脂肪酸2.51％;同时含二十碳五烯酸（EPA）,占总脂肪酸的0．41％;不饱和脂肪酸占总脂肪酸的80％。经鉴定为头孢霉属（Caphalosporiumsp．）真菌。同时发现两株菌含EPA,经鉴定为小克银汉霉（Cunninghamellasp.）和毛霉（Mucorsp．）。在这几个属中发现DHA和EPA尚属首次。头孢霉菌DHA产量及百分含量和斜面菌种在不同温度下储藏有关。菌种在20℃储藏10天,在液体PDA培养基上发酵,DHA可占总脂肪酸11．27％,产量达63．35mg／L。     

“微生物多样性调查与鉴定”模块化实验教学的改革与实践

围绕"微生物多样性调查与鉴定"主线,设计一个由4个相互关联、前后衔接、形成一体的综合性研究型实验教学模块,并进行教学实践,它们是:环境微生物样品的采集与观察;不同微生物类群菌落的比较及细菌多样性观察与鉴定;放线菌与真菌多样性的观察与鉴定;自然界中噬菌体的分离与纯化。     

一株烟酸羟基化转化菌株的筛选和鉴定

从南京地区的土壤中筛选到一株高效转化烟酸为 6_羟基烟酸的菌株NA_1。形态及生理生化特征测定结果表明 ,NA_1菌株与假单胞菌属 (Pseudomonas)中的恶臭假单胞菌 (P .putida)种的特征基本一致。测定了该菌株的16SrDNA序列并根据 16SrDNA构建了系统发育树 ;在系统发育树中 ,NA_1菌株与恶臭假单胞菌形成一个类群 ,序列同源性为 99%。因此将NA_1菌株鉴定为恶臭假单胞菌     

应用重组表达钙离子敏感蛋白YC2.1研究粟酒裂殖酵母细胞内钙离子浓度的分布

把重组表达钙离子敏感蛋白的YC2．1基因（yellow cameleon 2．1）导入了粟酒裂殖酵母中,观察了粟酒裂殖酵母细胞内钙离子浓度的分布。结果发现,钙离子敏感蛋白所指示的钙离子呈细胞周缘胞质较高浓度分布,而在细胞胞质中部的钙离子浓度相对低一些。通过DAPI染色实验证实这是由于胞质中部细胞核的填充而形成。fluo-3染色的裂殖酵母细胞,由于fluo-3进入到细胞器（房室化现象）,所以出现胞质的内部区域高的荧光信号,而在周缘的胞质区相对弱,不能真实反应胞质钙离子的分布。因此重组表达钙离子敏感蛋白测定钙离子的方法优于fluo-3荧光探针的方法,对于裂殖酵母细胞胞内钙离子的研究具有良好的应用前景。     

恶臭假单胞菌NA-1菌体培养转化和静息细胞转化联合工艺生产6-羟基烟酸研究

现有微生物羟基化烟酸采用的是静息细胞转化工艺。但研究揭示,恶臭假单胞菌NA-1(Pseudomonas putidaNA-1)在培养过程中不降解发酵液中由诱导剂烟酸转化形成的6-羟基烟酸,这是由于烟酸的存在抑制了羟基烟酸降解酶的作用,而不是因为细胞停止生长不利用羟基烟酸的缘故。因而尝试利用菌体诱导培养过程进行烟酸转化生产,建立了一种新的生产工艺,即菌体培养转化和静息细胞转化联合工艺。该工艺在恶臭假单胞菌NA-1培养过程中持续补充烟酸以维持1%(W/V)浓度,使烟酸被生长细胞转化为羟基化烟酸并在发酵液中线性积累,而不被进一步降解;培养转化结束后,发酵液中的静息细胞依然拥有很高的羟基化酶活力,能够再次用于转化反应。该联合转化工艺与传统的静息细胞转化工艺相比,不仅节约了诱导剂烟酸,而且6-羟基烟酸的产量提高了65%。     

用Overlap-PCR法从Trichoderma reesei QM9414基因组DNA中克隆并表达木聚糖酶Ⅲ

禾本科植物木聚糖酶在其成熟过程中需在细胞进入程序性死亡后,经蛋白水解酶多次剪切方显活性,常规蛋白质克隆表达系统无法表达这类酶。通过GenBank搜索获得一与之同族、结构相似的来源于T．reesei QM9414(ATCC26921)突变种PC—3—7菌株的xynⅢ。但该酶在T．reesei QM9414中不表达,而在基因组中存在。通过overlap-PCR法将4个外显子分别克隆、测序,再连接测序,最终获得该基因的全长cDNA序列。将该基因连接到表达载体pETBlue—2上,并转化到Tuner DE3表达菌株中,常规条件下可表达并有木聚糖酶活性显示。低温(15℃)64h诱导显著提高可溶性xynⅢ酶活。     

番茄(Solanum lycopersicum)果胶酸裂解酶P56在大肠杆菌中的重组表达

果胶酸裂解酶P56在番茄花粉管伸长过程中起着重要的作用,为了制备番茄P56蛋白的抗体,进行番茄花粉管萌发过程中P56蛋白的免疫组织化学研究,对P56基因在大肠杆菌系统的重组表达进行了研究。先采用Overlap-PCR的方法,从番茄基因组DNA中克隆了成熟P56蛋白的cDNA序列(LAT56),再构建重组表达质粒pET28a(+)-LAT56,转化大肠杆菌BL21-CodenPlus(DE3)-RIL,得到了重组表达工程菌pET-28a(+)-LAT56-BL21-Co-denPlus(DE3)-RIL。在0.5 mmol/L IPTG、15℃和180 r/min条件下,经过60 h的诱导培养,重组蛋白表达量为细胞总蛋白的30%左右,主要以包涵体形式存在,重组蛋白经Ni²⁺-nitrilotriacetate-agrose亲和柱层析,得到了SDS-PAGE显示为单一蛋白带的纯化蛋白。