鳜鱼(Sinipera chuatsi)鱼苗肠道微生态调节的研究

对鳜鱼鱼苗肠道菌进行好氧菌和兼性厌氧菌的分析鉴定 ,发现鳜苗肠道中存在哈夫尼亚菌属和气单胞菌属 ,其中哈夫尼亚菌属量为 4 .8× 10 6cfu/ g ,气单胞菌属量为 2 .4 3× 10 5cfu/ g。哈夫尼亚菌属和气单胞菌属的拮抗实验表明哈夫尼亚菌对气单胞菌的生长有一定的抑制作用。分别用哈夫尼亚菌、气单胞菌作饵料添加剂 ,前者将鱼苗成活率由 18%提高至 33%～ 4 0 % ,后者将鱼苗成活率由 18%降至 2 %～ 4 %。     

利用肠道菌群的分布和16S DNA序列研究鲤科肠道菌系统演化关系

肠道微生物与寄主具有复杂的、多方面的相互依存效应,这种依存效应所产生的共生关系或协同进化关系既可反映寄主间的系统演化关系,也可显示肠道微生物间的系统演化关系,共生关系或协同进化关系是由于寄主与肠道微生物两者之间存在着相互自然选择作用所形成的,在长期的进化历程中逐步发生的共生关系信息很可能被记录在DNA序列中。本文通过检测鲤鱼科8种鱼中9种肠道菌群的分布含量对这9种菌群进行分析,且利用从GenBank调取这9种肠道细菌菌属的43个种或亚种的16S DNA序列的构建NJ树和MP树,将这6个科9个属43个种或亚种分为革兰氏阴性和革兰氏阳性两大类群（一级分枝）。在这两类群中,又以科为单位分为6个亚类群（二级分枝）,而肠杆菌科中则以属为单位分为4个小类群（三级分枝）,此外球状菌与杆状菌也能截然分开。将16S DNA的NJ树隐去所有的种,以属为单位所得到的以分枝形式的无根树在拓扑结构上与菌群分布含量（寄主范围）所构建的无根树相近,但芽孢杆菌在两种无根树的位置中有较大的差异。如果提高检测水平,扩大所检测的寄主对象,这种差异有可能消除。 Abstract:There is a complex- and multi-effect for interdependent survival between intestinal- microorganisms and hosts.The symbiosis or coevolution that results from this effect for interdependent survival is used to reveal the phylogenies of hosts as well as intestinal microorganisms.The symbiosis or coevolution between intestinal microorganisms and hosts has been generated by interactive natural selection occurred between them.The symbiosis information that has been formed by interactive natural selection during a long evolutionary process must be recorded in DNA sequences.According to this point of view,we analyzed the phylogeny of 9 intestinal bacteria genera using their contents in intestines of 8 Cyrinidate species.At the same time,we fetched the 16S rRNA gene DNA sequences of 43 intestinal bacteria species being included in these nine genera of six intestinal families from GeneBank and constructed phylogenetic trees by NJ and MP methods.The NJ tree and MP tree have the same topologic configuration and are identical with the classical phylogenetic tree.Both the trees of 16S rRNA gene separated 43 bacteria species into gram-negative bacteria group and the gram-positive bacteria group,which are the first branches.Each of the first branches (groups) made again 6 subbranches (subgroups) where each subbranch is a family.Especially,the subbranch (subgroup) of enterobacteriaceace made again four small branches as genus taxon.This tree also shows that bacilliform bacterium is distinct from each other in the NJ and MP trees.After all species on the tree are merged,the topological configuration of the unrooted tree of 16S gene is closed to that of the host range unrooted tree.However,the position of bacillus is greatly changed on both the unrooted trees.The difference can be found if we increase the examination level and extend the hosts examed.     

灵芝的人工栽培

灵芝的人工栽培赵庆新世界上共有１２０多种灵芝,我国有８０种以上。灵芝曾被我国明朝名医李时珍收入《本草纲目》,现代科学研究确证灵芝含有多种与生命活动密切相关的物质。因此。市场供不应求。发展灵芝栽培产业,很有前途。１灵芝的生物学特点灵芝属药用真菌,为腐生...     

用Overlap-PCR法从Trichodermareesei QM9414基因组DNA中克隆并表达木聚糖酶Ⅲ

禾本科植物木聚糖酶在其成熟过程中需在细胞进入程序性死亡后 ,经蛋白水解酶多次剪切方显活性 ,常规蛋白质克隆表达系统无法表达这类酶。通过GenBank搜索获得一与之同族、结构相似的来源于T .reeseiQM94 1 4(ATCC2 6 92 1 )突变种PC 3 7菌株的xynⅢ。但该酶在T .reeseiQM9414中不表达 ,而在基因组中存在。通过overlap PCR法将 4个外显子分别克隆、测序 ,再连接测序 ,最终获得该基因的全长cDNA序列。将该基因连接到表达载体pETBlue-2上 ,并转化到TunerDE3表达菌株中 ,常规条件下可表达并有木聚糖酶活性显示。低温 (15℃)64h诱导显著提高可溶性xynⅢ酶活.     

关于草鱼肠炎微生态调节的研究

对健康草鱼肠道菌、患肺炎病草鱼肠道菌进行菌群分析,发现正常草鱼肠道中有气单胞菌(Aeromonas)、哈夫尼亚菌(Hafnia)、黄杆菌属(Flavobacterium)等多种菌,肠炎病鱼肠道中一般仅有气单胞菌的单一菌群。拮抗试验表明哈夫尼亚菌与气单胞菌之间有一定的拮抗性。回归试验表明哈夫尼亚菌无致病性,3种气单胞菌有致病性。微生态治疗试验表明哈夫尼亚菌对患肠炎病的草鱼肠道有促进肠道微生态平衡作用。     

鲤科四种鱼肠道菌群的相似性及其与系统进化的关系

在同一背景条件下,对草鱼、白链、团头鲂和鲤等4种鱼的肠道菌群中好氧性菌或兼性厌氧菌进行分析鉴定,得到4种鱼之间的肠道菌群相似值。用UPGMA和NJ法构建鲤科的雅罗鱼亚科,链亚科,Bian亚科和鲤亚科等4种亚科的系统演化树。不同亚科的鱼间菌群分布有较大差异。但雅罗鱼亚科和Bian亚科和菌群分布方面有极显的正相关性,哈夫尼亚菌属、致病杆菌属、气单胞菌属、柠檬酸菌属、假单胞菌属等在4种鱼肠道中均有分布,链球菌属,拉恩氏菌属、牙包杆菌属、葡萄球菌属等属于共生菌,雅罗鱼亚科和Bian亚科相邻邻接为一个共同接点,该接点与鲤亚科连接为一个接点,鲤亚科可能是最原始的类型。     

关于食用菌基质菌丝代谢及其质内环境改良的研究

食用菌基质菌丝分解代谢与呼吸过程产生酸性物质和引起基质氧气缺乏,在基质中加过氧化钙可抵制pH值下降的趋势,并可补充氧气.     

米曲霉(Aspergillus oryzae)果胶酸内切水解酶(PGA)在原核系统中重组表达

果胶酶具有广阔的商业用途,在食品工业上主要用于果汁和酒类的澄清、提高植物油的提取率、提高水果的硬度和植物纤维脱胶。米曲霉(Aspergillusoryzae)一直用于传统发酵食品的生产,自然条件下其果胶酶的产量较低。文献报道的果胶酶的重组表达成功的例子较少,且活性较低。通过RT-PCR的方法,获得不含信号肽的果胶酸内切水解酶A(polygalacturonaseA,PGA)的cDNA,PGAcDNA连入pET-28a( )载体,构建pET-28a( )-pga质粒。pET-28a( )-pga转化Turner(DE3)placⅠ细胞,得到转化子pET-28a( )-pga-Turner(DE3)placⅠ,首次实现了米曲霉PGA在大肠杆菌系统中过表达,进一步对PGA在大肠杆菌系统中表达的条件进行了研究。在37℃、220r/min条件培养pET-28a( )-pga-Turner(DE3)placⅠ细胞,OD600至0·8左右时,用500μmol/Lisopropylβ-D-thiogalactogalactopyranoside(IPTG)进行诱导表达,在15℃和170r/min条件下继续培养24h,表达效果最好,相对于每毫升培养基而言,产酶可达到70u/mL,是米曲霉自然条件产酶量的87·5倍,远优于文献报道的重组表达的PGA酶活。     

用Overlap-PCR法从Trichoderma reesei QM9414基因组DNA中克隆并表达木聚糖酶Ⅲ

禾本科植物木聚糖酶在其成熟过程中需在细胞进入程序性死亡后,经蛋白水解酶多次剪切方显活性,常规蛋白质克隆表达系统无法表达这类酶。通过GenBank搜索获得一与之同族、结构相似的来源于T．reesei QM9414(ATCC26921)突变种PC—3—7菌株的xynⅢ。但该酶在T．reesei QM9414中不表达,而在基因组中存在。通过overlap-PCR法将4个外显子分别克隆、测序,再连接测序,最终获得该基因的全长cDNA序列。将该基因连接到表达载体pETBlue—2上,并转化到Tuner DE3表达菌株中,常规条件下可表达并有木聚糖酶活性显示。低温(15℃)64h诱导显著提高可溶性xynⅢ酶活。