miR-652-3p靶向同源异型核基因1对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞凋亡的影响

目的探讨miR-652-3p靶向同源异型核基因1（PRRX1）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的心肌细胞凋亡的影响。 方法大鼠心肌细胞H9c2细胞采用正常培养基培养为对照组细胞，用含1 μmol/L AngⅡ的培养基培养为AngⅡ组细胞；分别转染miR-652-3p阳性对照序列（NC）和转染miR-652-3p mimics后用含1 μmol/L AngⅡ的培养基培养为AngⅡ+NC组和AngⅡ+miR-652-3p组细胞；将miR-652-3p mimics分别与PRRX1阳性对照质粒和PRRX1过表达质粒转染至H9c2细胞中用含1 μmol/L AngⅡ的培养基培养，分别为AngⅡ+miR-652-3p+ Vctor组和AngⅡ+miR-652-3p+PRRX1组细胞。实时荧光定量PCR （RT-qPCR）检测H9c2细胞中miR-652-3p表达水平，流式细胞术检测细胞凋亡，用Western blot检测细胞中PRRX1、Bax和Bcl-2蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证H9c2细胞中miR-652-3p与PRRX1调控关系。两组间比较采用独立样本t检验，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用SNK-q检验。 结果与对照组比较，AngⅡ组H9c2细胞中miR-652-3p水平（1.00±0.08比0.21±0.05）、Bcl-2蛋白水平（0.83±0.08比0.40±0.04）均较低，而PRRX1蛋白水平（0.06±0.01比0.41±0.04）、凋亡率（5.02﹪±1.41﹪比25.33﹪±3.75﹪）、Bax蛋白水平（0.46±0.05比0.96±0.10）均较高，差异具有统计学意义（P均< 0.05）。与AngⅡ+NC组比较，AngⅡ+miR-652-3p组H9c2细胞中miR-652-3p的表达水平（0.24±0.06比0.98±0.07）、Bcl-2蛋白水平（0.38±0.04比0.72±0.07）均较高，而PRRX1蛋白水平（0.39±0.04比0.13±0.01）、凋亡率（27.02﹪±4.11﹪比12.19﹪±1.63﹪）、Bax蛋白水平（0.95±0.09比0.53±0.05）均较低，差异具有统计学意义（P均< 0.05）。与AngⅡ+miR-652-3p+Vctor组比较，AngⅡ+miR-652-3p+PRRX1组H9c2细胞凋亡率（12.88﹪±1.84﹪比25.45﹪±3.58﹪）、PRRX1蛋白水平（0.13±0.01比0.35±0.04）和Bax蛋白水平（0.54±0.05比0.82±0.08）均较高，差异具有统计学意义（P均< 0.05），而Bcl-2蛋白表达水平（0.72±0.07比0.46±0.05）降低，差异具有统计学意义（P < 0.05）。 结论AngⅡ能够下调心肌细胞中miR-652-3p的表达，上调miR-652-3p可通过靶向抑制PRRX1的表达减少AngⅡ诱导的H9c2细胞凋亡。     

柚皮苷对高糖作用下MC3T3-E1细胞活力和Akt通路相关因子表达的影响

目的探讨柚皮苷（NG）对高糖环境下MC3T3-E1细胞活力的影响及可能的分子机制。 方法体外培养小鼠MC3T3-E1细胞，实验分5组：对照组（正常无血清培养基）、高糖组（含25 mmol/L葡萄糖）、0.1 μmol/L +高糖组（0.1 μmol/L NG + 25 mmol/L葡萄糖）、1 μmol/L +高糖组（1 μmol/L NG+25 mmol/L葡萄糖）、10 μmol/L +高糖组（10 μmol/L NG+25 mmol/L葡萄糖）。药物干预后，采用CCK-8法检测细胞活力；实时荧光定量PCR（qPCR）法检测细胞成骨特异性转录因子（Runx2）、胰岛素样生长因子-1（IGF-1）、蛋白激酶（Akt1）mRNA的表达；蛋白质印迹法（Western blot）检测细胞碱性磷酸酶（ALP）、Akt1、IGF-1蛋白的表达。多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。 结果CCK8检测结果显示，与对照组比较，高糖组细胞OD值（12 h：0.90±0.01比0.80±0.01，24 h：1.00±0.05比0.84±0.01，48 h：1.09±0.03比0.90±0.01）均降低，差异有统计学意义（P < 0.01）；与高糖组比较，0.1 μmol/L+高糖组细胞OD值（24 h：0.84±0.01比0.93±0.05，48 h：0.90±0.01比0.99±0.01）、1 μmol/L +高糖组和10 μmol/L+高糖组OD值（12 h：0.80±0.01比0.92±0.01、1.01±0.32，24 h：0.84±0.01比1.01±0.04、1.16±0.03，48 h：0.90±0.01比1.12±0.02、1.20±0.02）均升高，差异有统计学意义（P < 0.05）。与对照组比较，高糖组细胞Runx2、IGF-1、Akt1的mRNA的表达水平（24 h：1.00比0.34±0.02、1.00比0.34±0.01、1.00比0.15±0.02）、（48 h：1.00比0.72±0.03、1.00比1.09±0.07、1.00比0.38±0.04）降低，差异有统计学意义（P < 0.01）。与高糖组比较，1 μmol/L +高糖组和10 μmol/L+高糖组细胞Runx2、IGF-1、Akt1的mRNA表达水平（24 h：0.34±0.02比0.62±0.09、0.64±0.05，0.34±0.01比0.77±0.03、1.02±0.07，0.15±0.02比0.24±0.08、0.4±0.09）、（48 h：0.72±0.03比1.27±0.02、1.37±0.02，1.09±0.07比2.44±0.19、2.73±0.04，0.38±0.04比0.86±0.06、1.43±0.03）均升高，差异有统计学意义（P < 0.05）。与对照组比较，高糖组细胞ALP、Akt1、IGF-1蛋白表达水平（48 h：1.00比0.72±0.02、1.00比0.89±0.03、1.00比0.09±0.01）均降低，差异有统计学意义（P < 0.05）；与高糖组比较，0.1 μmol/L+高糖组、1 μmol/L+高糖组和10 μmol/L+高糖组ALP、Akt1、IGF-1蛋白表达水平（48 h：0.72±0.02比1.92±0.02、2.30±0.30、3.09±0.10，0.89±0.03比1.50 ± 0.03、1.43±0.04、1.40±0.13，0.09±0.01比1.75±0.01、2.30±0.31、2.07±0.07）均升高，差异有统计学意义（P < 0.05）。 结论NG逆转高糖诱导的MC3T3-E1细胞活力减退；同时改善高糖的抑制作用，促进MC3T3-E1细胞IGF-1、AKt-1、Runx2 mRNA和IGF-1、AKt-1、ALP蛋白的表达。     

二氢杨梅素对高糖诱导的H9C2心肌细胞损伤的影响

目的探讨二氢杨梅素（DHM）对高糖（HG）诱导的心肌细胞H9C2损伤的影响及机制。 方法细胞处理分为对照组、35 mmol/L HG组、35mmol/L HG+50 μmol/L DHM组及50 μmol/L DHM组。CCK-8法检测细胞活力,化学比色法检测丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）水平,流式细胞术检测ROS水平;荧光定量PCR法及Elisa法分别检测TNFα、IL1β、IL6 mRNA和含量,Western Blotting检测p-IκBα、IκBα蛋白及核蛋白NF-κB p65的表达水平。采用单因素方差分析进行组间比较。 结果对照组、35mmol/?L HG组、35?mmol/L HG+50?μmol/L DHM组、35?mmol/L HG+100?μmol/L DHM组的细胞活力分别是（100±0.00） ﹪、（52.23±5.69） ﹪、（74.58±6.12） ﹪和（86.04±3.76）﹪,差异具有统计学意义（F?= 40.61,P?< 0.01）。对照组、35?mmol/L HG组和35?mmol/L HG+100?μmol/L DHM组的MDA和ROS水平,SOD和CAT活性分别是（0.44±0.06）?nmol/?ml,（2.33±0.40）?nmol/?ml,（1.48±0.41）?nmol/ml、（156.0±9.00）U/ml,（325.3±10.69）U/ml,（244.0±9.54）?U/ml,（10.62± 1.59）?U/?ml,（5.18±0.34）U/ml,（7.75±0.53）U/ml,（11.31±0.98）?U/ml,（5.20±1.12）?U/?ml和（8.06±0.66）U/ml,差异具有统计学意义（F?= 30.34,29.75,14.72,P均< 0.01）。DHM预处理可明显拮抗HG对H9C2心肌细胞TNFα、IL1β和IL6 mRNA及含量的上调作用,差异存在统计学意义（P?均< 0.01）。DHM可抑制HG对H9C2心肌细胞p-IκBα/?IκBα蛋白和核蛋白NF-κB p65表达的增加作用,差异存在统计学意义（P均< 0.01）。 结论DHM可拮抗HG诱导的H9C2心肌细胞损伤,这可能与其抑制NF-κB信号通路有关。     

下调血管生成素样蛋白7表达对血管紧张素Ⅱ介导的血管平滑肌细胞炎症反应的影响

目的探讨RNA干扰血管生成素样蛋白7 （Angptl7）基因对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的血管平滑肌细胞（VSMC）炎症因子的影响及其作用机制。 方法体外培养人VSMC,分为常规F12K培养基培养（对照）和1 μg/mL AngII培养24 h。VSMC用AngⅡ（1 μg/mL）处理24 h后,采用siRNA-Angptl7和阴性对照siRNA-NC在Lipofectamine 2000介导下转染VSMC。RT-qPCR检测mRNA表达水平;Griess反应测定一氧化氮（NO）含量;蛋白免疫印记法检测相关蛋白的改变;酶联免疫吸附法检测VSMC中炎症因子肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素-1β （IL-1β）和IL-6水平。多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验,两组间比较采用独立样本t检验。 结果与对照比较,1 μg/mL AngⅡ处理可促进VSMC中Angptl7 mRNA （0.97±0.06比3.05±0.21）和蛋白表达（1.01±0.12比1.61±0.14）,亦可促进VSMC中IL-1β[（45.21±8.10）比（126.17±11.77） pg/mL]、IL-6[（50.50±7.51）比（108.50±9.51）pg/mL]和TNF-α的表达[（60.77±9.58）比（185.67±17.35）pg/mL],差异有统计学意义（P均< 0.01）。与对照和转染siRNA-NC相比,转染siRNA-Angptl7下调Angptl7蛋白表达（0.99±0.12,0.98±0.12比0.44±0.14,P < 0.01）。与AngⅡ干预组相比,siRNA-Angptl7降低AngⅡ介导的VSMC炎症反应相关蛋白TNF-α、IL-6和IL-1β的表达,核因子κB （NF-κB）/诱导型一氧化氮合酶（iNOS）/环氧化酶2 （COX-2）信号通路相关蛋白NF-κB、iNOS和COX-2表达及NO含量亦降低,差异有统计学意义（P均< 0.01）。与siRNA-NC相比,siRNA-Angptl7组AngⅡ诱导的VSMC炎症反应相关蛋白TNF-α （0.99±0.13比0.51±0.12）、IL-6 （1.00±0.12比0.38±0.05）和IL-1β的表达（0.99±0.14比0.48±0.11）,NF-κB （1.00±0.10比0.42±0.08）、iNOS （1.02±0.12比0.42±0.10）和COX-2表达（1.00±0.11比0.52±0.12）均降低,NO含量[（54.78±2.76）比（18.08±3.61）μmol/L]亦降低,差异有统计学意义（P均< 0.01）。 结论AngⅡ可通过Angptl7促进VSMC炎症反应,下调Angptl7蛋白表达可以抑制VSMC的炎症反应,其作用机制可能与抑制NF-κB/iNOS-COX-2信号通路有关。     

活化的肝星状细胞RBP-J可诱导性基因敲除小鼠的构建及应用

目的:利用Cre-loxp可诱导系统构建活化的肝星状细胞RBP-J可诱导性基因敲除小鼠模型,以实现肝纤维化过程中活化的肝星状细胞Notch信号通路的特异性阻断。方法:将Sm22αCre ERT2和RBP-Jflox/flox转基因小鼠杂交,得到F1小鼠,将繁殖的F1小鼠继续进行交配,得到F2小鼠,通过PCR鉴定出基因型为Sm22αCre ERT2,RBP-Jflox/flox的小鼠。通过腹腔注射四氯化碳建立肝纤维化模型,检测四氯化碳注射不同时间段后肝脏纤维化进展情况和肝星状细胞活化过程中Sm22α的表达情况。注射他莫昔芬诱导活化肝星状细胞中RBP-J基因的特异性敲除。分选肝星状细胞,q-PCR和Western Blot检测活化肝星状细胞中Notch下游靶基因Hes1、Hey1表达情况以验证敲除效果。结果:通过连续交配我们获得了Sm22αCre ERT2,RBP-Jflox/flox小鼠。四氯化碳腹腔注射4周即可诱导肝脏发生较为明显的纤维化,同时肝星状细胞活化并逐渐高表达Sm22α。给予他莫昔芬诱导Cre重组酶发挥作用后,敲除了活化的肝星状细胞中的RBP-J基因,其下游基因Hes1、Hey1表达降低70%以上,阻断了Notch信号通路。结论:我们成功构建了RBP-J可诱导性条件性基因敲除小鼠模型,实现了小鼠肝纤维化过程中活化肝星状细胞Notch信号通路的阻断,为深入研究Notch信号通路在肝纤维化中的作用和机制奠定了坚实的基础。     

沉默Gpr48基因表达对皮肤鳞状细胞癌细胞系A431 PKC信号通路活化及细胞侵袭的影响

目的分析沉默G蛋白偶联受体48 （Gpr48）基因表达对皮肤鳞状细胞癌（SCC）蛋白激酶C （PKC）信号通路及细胞侵袭能力的影响。 方法构建ShRNA感染皮肤SCC细胞株A431,设计干扰Gpr48表达shRNA（shRNA-Gpr48组）及阴性对照shRNA-NC组,采用实时定量反转录聚合酶联反应（RT-PCR）检测Gpr48相对表达量;以蛋白印迹法（Western Blot）测定PKC相关抗体蛋白表达情况,进行Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,总结Gpr48缺失对三丙胺（TPA）刺激A431细胞株PKC活化及细胞侵袭能力的影响,为SCC靶向治疗提供参照。组间比较采用独立样本t检验。 结果qRT-PCR结果：shRNA-Gpr48组Gpr48相对表达量（0.27±0.06）低于shRNA-NC组（1.01±0.12）,差异具有统计学意义（t?= 17.441,P?< 0.01）,shRNA-Gpr48组p-PKCδ （0.463±0.035）低于shRNA-NC组（0.721±0.074）,shRNA-?Gpr48组NF-κB p65 mRNA （0.631±0.079）低于shRNA-NC组（0.834±0.102）,差异具有统计学意义（t?= 9.966、4.975,P均< 0.01）,Notch1 mRNA（0.981±0.037）高于shRNA-NC组（0.562±0.041）,差异具有统计学意义（t?= 23.991,P?< 0.01）;Western Blot结果：shRNA-Gpr48组p-PKCδ（0.221±0.034）低于shRNA-NC组（0.292±0.046）、NF-κB p65蛋白表达（0.512±0.047）低于shRNA-NC组（0.636±0.051）,差异具有统计学意义（t?= 3.925,5.653,P均< 0.01）,Notch1（0.524±0.063）高于shRNA-NC组（0.421±0.076）,差异具有统计学意义（t?= 3.299,P?< 0.01）;shRNA-Gpr48组侵袭细胞率为（35.03±1.54）﹪,低于shRNA-NC组的（51.83±2.76）﹪,差异具有统计学意义（t?= 16.809,P?< 0.01）。 结论沉默Gpr 48缺失表达可能通过抑制PKC活化,降低p-PKCδ、NF-κB p65表达,上调抑癌基因Notch1表达,抑制癌细胞增殖、侵袭。     

降钙素基因相关肽对大鼠肺泡上皮Ⅱ型细胞间质转分化的作用及机制

目的：观察降钙素基因相关肽（CGRP）对大鼠肺泡上皮细胞间质转分化（EMT）的作用并探讨其机制。方法：实验设Control组、TGF-β1（5 ng/ml）、CGRP （1、10、100 nmol/L）组、CGRP8-37（1 μmol/L）+CGRP （100 nmol/L）组。每组设9个复孔。细胞分别用CGRP或加CGRP8-37预处理1 h,再用转化生长因子β1（TGF-β1）处理48 h。MTT法检测大鼠肺泡上皮Ⅱ型细胞（RLE-6TN细胞）活性。分别采用Real-time PCR和Western blot检测细胞E-cadherin、α-SMA、eIF3a、Notch1和collagen Ⅲ mRNA及蛋白表达。结果：与TGF-β1（5 ng/ml）相比,不同剂量CGRP （1、10、100 nmol/L）均可明显提高RLE-6TN细胞活性,显著抑制eIF3a、Notch1、α-SMA及collagen Ⅲ胶原的表达,上调E-cadherin的表达,而CGRP的这些作用可以被CGRP阻断剂CGRP8-37所取消。结论：CGRP对EMT具有一定的抑制作用,其机制可能与其抑制Notch1、eIF3a表达有关。     

PSP下调miR-345-5p对雨蛙素诱导的AP腺泡细胞氧化应激和炎症因子表达

目的探讨黄精多糖（PSP）对雨蛙素诱导的急性胰腺炎（AP）腺泡细胞氧化应激和炎症因子表达的影响及分子机制。 方法取对数期大鼠胰腺腺泡细胞AR42J,采用100 nmol/L雨蛙素处理细胞6 h,建立AP腺泡细胞损伤模型,并采用不同浓度（1、2、4 mg/mL）PSP处理AP细胞（AP+PSP-L、AP+PSP-M、AP+PSP-H）。试剂盒检测细胞中丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）活性以及培养液中白细胞介素-6 （IL-6）、肿瘤坏死因子-α （TNF-α）和IL-1β水平,实时荧光定量PCR （RT-qPCR）检测miR-345-5p表达水平。将miR-345-5p抑制物转染AR42J细胞,检测下调miR-345-5p表达对AP细胞氧化应激和炎症因子表达的影响。将miR-345-5p模拟物转染AR42J细胞,检测上调miR-345-5p表达和PSP处理对AP细胞氧化应激和炎症因子表达的影响。两组比较采用t检验,多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。 结果与对照比较,AP细胞MDA含量、IL-6、TNF-α、IL-1β水平和miR-345-5p表达水平均升高,SOD和GPx活性降低（P < 0.05）。与AP细胞比较,不同浓度（1、2、4 mg/mL）PSP作用的AP细胞中MDA含量[（1.08± 0.07）比（0.88±0.06）,（0.73±0.06）,（0.60±0.05） nmol/mg]降低,SOD [（43.01±4.37）比（59.60±5.62）,（72.37±6.32）,（94.21±8.70） U/mg]和GPx活性[（29.03±2.51）比（44.11± 4.71）,（58.07±4.20）,（72.67± 6.56） U/mg]均升高,培养液中IL-6 [（310.72±22.27）比（257.01±20.85）,（192.28±17.70）,（146.93±11.90） pg/mL]、TNF-α [（223.82±21.87）比（175.57±15.85）,（137.00±11.31）,（89.26±7.05） pg/mL]、IL-1β表达水平[（41.66±3.85）比（33.82±3.20）,（26.15±2.56）,（20.14±1.71） pg/mL]和miR-345-5p表达水平（2.78±0.24比2.38±0.21,1.91±0.12,1.25±0.13）均降低,且呈浓度依赖性,差异有统计学意义（P均< 0.05）。下调miR-345-5p表达后,AP细胞中MDA含量[（1.13±0.08）比（0.72±0.06） nmol/mg]降低,SOD活性[（41.31±3.98）比（81.73±7.62） U/mg]和GPx [（28.82±2.97）比（61.41±5.81） U/mg]升高,培养液中IL-6 [（314.65±25.02）比159.76±11.93） pg/mL]、TNF-α [（235.18±23.13）比（100.41±8.09） pg/mL]和IL-1β水平[（48.67±4.50）比（27.73±2.54） pg/mL]降低（P均< 0.05）。上调miR-345-5p表达可逆转PSP对AP细胞的影响。其中MDA含量[（0.58±0.03）比（0.95±0.08） nmol/mg]升高、SOD活性[（96.52±9.54）比（54.24±4.15） U/mg]、GPx活性[（79.62±6.23）比（39.81±3.84） U/mg]降低、IL-6 [（145.38±12.49）比（275.38± 21.55） pg/mL]、TNF-α [（84.83±7.81）比（183.73±16.39） pg/mL]和IL-1β [（19.38±1.85）比（36.97±3.62） pg/mL]的表达水平升高（P均< 0.05）。 结论PSP以剂量依赖方式减轻雨蛙素诱导AP细胞炎症反应和氧化应激损伤,其机制与下调miR-345-5p表达有关。     

类叶升麻苷通过上调miR-204对缺氧/复氧诱导H9C2细胞凋亡的抑制作用

目的探讨类叶升麻苷对缺氧/复氧（H/R）处理大鼠心肌细胞（H9C2）损伤的影响及其分子机制。 方法体外培养H9C2细胞,H/R （4 h/20 h）建立心肌细胞损伤模型,并采用1、10、100 μmol/L类叶升麻苷,转染miR-204模拟物阴性对照（miR-NC）、转染miR-204模拟物（miR-24）,100 μmol/L类叶升麻苷干预+转染miR-204抑制剂阴性对照、100 μmol/L类叶升麻苷+转染miR-204抑制剂干预H/R细胞。分别进行RT-qPCR、MTT、流式细胞术、Western blot检测miR-204表达水平、细胞活力、细胞凋亡率和相关蛋白表达,利用相应试剂盒检测乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）水平,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测白细胞介素-6 （IL-6）、白细胞介素-β （IL-β）和肿瘤坏死因子-α （TNF-α）的含量。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用SNK-q检验。 结果与心肌损伤模型比较,10、100 μmol/L类叶升麻苷的细胞凋亡率[（25.62±1.96）%比（18.17±1.27）%,（11.24±0.57）%]、Bax（0.71±0.05比0.51±0.04、0.29±0.03）、LDH [（243.16±11.31）比（121.22±4.52）,（94.39±2.82）U/g]、MDA [（1.82±0.07）比（1.13±0.04）,（0.92±0.04）nmol/mg]、IL-6 [（121.45±6.18）比（87.16±4.53）,（47.11± 2.24）pg/mL]、IL-1β [（229.82±8.48）比（175.32±8.73）,（113.14±5.63）pg/mL]和TNF-α表达水平[（138.18±6.60）比（92.24±4.04）,（61.53±4.17）pg/mL]降低,Bcl-2 （0.18±0.01比0.35± 0.03、0.52±0.04）、SOD [（18.72±1.26）比（38.81±1.51）,（45.43±1.29）U/mg]和GSH-Px表达水平[（58.74±2.28）比（89.24±2.82）,（94.66±3.05）U/mg]升高（P均< 0.05）;与miR-NC比较,转染miR-204的细胞凋亡率[（24.12±1.12）%比（9.26±0.49）%]、Bax （0.62±0.04比0.25±0.02）、LDH [（229.11±8.47）比（86.32±5.92）U/g]、MDA [（1.75±0.08）比（0.85± 0.05）nmol/mg]、IL-6 [（134.47±7.31）比（55.26±2.13）pg/mL]、IL-1β [（211.14±9.70）比（98.11±3.18）pg/mL]和TNF-α表达水平[（152.92±3.49）比（51.34±2.66）pg/mL]降低,Bcl-2 （0.22±0.01比0.57±0.03）、SOD [（20.92±1.38）比（47.68±1.76）U/mg]和GSH-Px表达水平[（62.65±2.76）比（91.13±3.80）U/mg]升高（P < 0.05）;10、100 μmol/L类叶升麻苷可提高H/R诱导H9C2细胞中miR-204的表达水平（P < 0.05）;且下调miR-204逆转了类叶升麻苷对H/R处理H9C2细胞凋亡、氧化应激和炎症因子的影响。 结论类叶升麻苷可能通过上调miR-204表达缓解H/R诱导的H9C2细胞损伤。     

HOXA-AS2靶向miR-17对人脐静脉内皮细胞生物学功能以及炎症因子的影响

目的探讨HOXA-AS2对动脉粥样硬化（AS）模型细胞生物学功能以及炎症因子的影响及分子机制。 方法本实验共分为4个实验;实验1：用100 μg/mL的ox-LDL处理EA.hy926细胞作为ox-LDL组,正常培养的细胞作为对照组;实验2：将pcDNA3.1、pcDNA3.1-HOXA-AS2转染至EA.hy926细胞中再用100 μg/mL的ox-LDL处理,记为ox-LDL+pcDNA3.1组、ox-LDL+pcDNA3.1-HOXA-AS2组;实验3：将pcDNA3.1、pcDNA3.1-HOXA-AS2、si-NC、si-HOXA-AS2分别转染至EA.hy926细胞中,记为pcDNA3.1组、pcDNA3.1-HOXA-AS2组、si-NC组、si-HOXA-AS2组;实验4：将pcDNA3.1-HOXA-AS2与miR-NC、miR-17分别共转染至EA.hy926细胞中再用100 μg/mL的ox-LDL处理,记为ox-LDL+pcDNA3.1-HOXA-AS2+miR-NC组、ox-LDL+pcDNA3.1-HOXA-AS2+miR-17组。实时荧光定量PCR （RT-qPCR）检测HOXA-AS2和miR-17的表达水平;蛋白质印迹（Western blot）法检测细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A （P21）、cleaved caspase 3蛋白表达;MTT检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA法检测白细胞介素-1 （IL-1）、白细胞介素-6 （IL-6）水平;荧光素酶报告实验检测HOXA-AS2和miR-17的靶向关系。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。 结果与对照组比较,ox-LDL组EA.hy926细胞中HOXA-AS2表达水平（0.23±0.02比1.02±0.10）,细胞增殖率[（47.83±5.01）﹪比（100.06±10.20）﹪]均降低,细胞凋亡率[（26.81±2.47）﹪比（8.23±0.80）﹪]、P21 （0.82±0.08比0.20±0.02）、cleaved caspase 3 （0.67±0.06比0.14±0.01）、IL-1[（792.34±59.37）ng/L比（326.14±34.59） ng/ L]和IL-6表达水平[（53.67±4.65）ng/L比（19.25±2.11）ng/L]均升高,差异具有统计学意义（P均< 0.05）。与ox-LDL+pcDNA3.1组比较,ox-LDL+pcDNA3.1-HOXA-AS2组EA.hy926细胞中HOXA-AS2表达水平（0.87±0.09比0.22±0.02）、细胞增殖率[（89.94±8.34）﹪比（48.21±4.86）﹪]均升高,细胞凋亡率[（12.33±1.18）﹪比（26.83±2.48）﹪]、P21 （0.33±0.03比0.81±0.08）、cleaved caspase 3 （0.24±0.02比0.69±0.06）、IL-1[ （446.25±46.84）ng/L比（802.21±60.18）ng/L]和IL-6表达水平[（25.64±2.65）ng/L比（55.21±5.10）ng/L]均降低,差异具有统计学意义（P均< 0.001）。与ox-LDL+pcDNA3.1-HOXA-AS2+miR-NC组比较,ox-LDL+pcDNA3.1-HOXA-AS2+miR-17组EA.hy926细胞中miR-17表达水平（2.14±0.21比1.05±0.10）、细胞凋亡率[（23.31±2.33）﹪比（13.75±1.44）﹪]、IL-1水平[（684.26±62.38）ng/L比（451.21±43.58）ng/L]、IL-6水平[（41.29±4.37）ng/L比（26.11±2.39）ng/L]均升高,细胞增殖率[（53.67±5.46）﹪比（90.21±9.16）﹪]降低,差异具有统计学意义（P均< 0.001）。HOXA-AS2与miR-17存在结合位点,荧光素酶报告实验显示,与miR-NC组比较,miR-17组中转染WT-HOXA-AS2的EA.hy926细胞荧光素酶活性降低（0.33±0.03比1.01±0.10,P < 0.05）,而转染MUT-HOXA-AS2的EA.hy926细胞荧光素酶活性差异无统计学意义（P > 0.05）;与anti-miR-NC组比较,anti-miR-17组中转染WT-HOXA-AS2的EA.hy926细胞荧光素酶活性升高（2.29±0.21比1.00±0.10,P < 0.05）,而转染MUT-HOXA-AS2的EA.hy926细胞荧光素酶活性差异无统计学意义（P > 0.05）。 结论过表达HOXA-AS2促进细胞增殖,抑制ox-LDL引起的细胞凋亡和炎症因子的释放,其机制可能与miR-17有关。     

Notch1信号通路激活在低氧诱导人脐静脉内皮细胞血管形成中的作用

目的观察低氧条件下HIF-1α/VEGF/Notch信号通路在人脐静脉内皮细胞（HUVEC）血管生成中的作用。 方法将HUVEC进行常氧和低氧[二氯化钴（CoCl2）,200 μmol/L]诱导,再将常氧和低氧处理的HUVEC应用Notch1信号通路的抑制剂DAPT （30 μmol/L,24 h）和激活剂JAG-1 （30 μmol/L,24 h）干预。通过体外小管形成实验观察低氧对HUVEC血管生成能力的影响。应用RT-PCR和Western blot检测HUVEC中低氧诱导因子-1α （HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶-9 （MMP-9）和Notch1信号分子（Notch1、Dell4和JAG-1）的mRNA和蛋白表达。通过Transwell迁移实验和伤口愈合实验观察低氧、DAPT、JAG-1对HUVEC迁移能力的影响。应用MTT法检测低氧及Notch1对HUVEC增殖的影响。两组间比较采用t检验,采用析因设计方差分析低氧和DAPT以及低氧和JAG-1对HUVEC迁移能力、距离、小管形成能力和细胞增殖的交互作用。 结果与常氧组比较,低氧组小管总长[（8.18±0.62）mm比（15.43±1.32）mm]增高,差异具有统计学意义（P < 0.05）。与常氧组比较,低氧组的HIF-1α、VEGF、MMP-9、Notch1、Dell4和JAG-1的mRNA相对表达量和蛋白相对表达量（1.01±0.03比4.43±0.35,1.02±0.03比3.55±0.28,0.98±0.04比3.24±0.25,1.01±0.03比3.22±0.25,0.99±0.02比2.89±0.22,1.02±0.04比2.43±0.19,0.98±0.01比3.13±0.24,0.98±0.02比2.67±0.21,0.97±0.03比2.45±0.19,1.01±0.03比2.44±0.19,1.00±0.04比2.30±0.18,1.03±0.05比2.27±0.18）均升高,差异有统计学意义（P均< 0.05）。Transwell迁移实验和伤口愈合实验显示,低氧条件下,DAPT干预使HUVEC的迁移能力降低,JAG-1干预使HUVEC的迁移能力升高（P均< 0.05）。小管形成和MTT法测定显示,低氧条件下,DAPT干预使HUVEC的小管形成能力和细胞增殖能力降低,JAG-1干预使HUVEC的小管形成能力和细胞增殖能力升高（P均< 0.05）。析因设计的方差分析结果显示,低氧和JAG-1对迁移细胞数、小管形成和细胞增殖能力交互作用具有协同作用（P < 0.05）。 结论低氧可通过激活HIF-1α/VEGF/Notch1信号通路提高HUVEC的血管生成能力、迁移能力和细胞增殖能力。     

miR-34a-5p靶向GMFB抑制细胞增殖对先天性巨结肠的治疗意义

目的探讨miR-34a-5p通过靶基因GMFB调控神经嵴细胞的增殖。 方法通过荧光定量PCR检测miR-34a-5p在先天性巨结肠症（HSCR）和正常结肠组织中的表达,并通过双荧光素酶报告基因检测miR-34a-5p的靶基因,SH-SY5Y细胞转染miR-34a-5p mimics及对照miR-NC,并转染GMFB表达载体,通过CCK8检测miR-34a-5p和GMFB对神经嵴细胞增殖的影响,并通过Western Blot检测miR-34a-5p对GMFB蛋白表达的影响。采用t检验和单因素方差分析。 结果荧光定量PCR结果显示,HSCR结肠组中miR-34a-5p的相对表达量为0.43±0.10,低于正常结肠组1.15±0.18,差异具有统计学意义（t = 3.50,P < 0.01）。CCK8结果显示,miR-34a-5p mimics组细胞在培养24?h和48?h后细胞A450值分别为0.53±0.03和0.87±0.04,低于miR-NC对照组0.87±0.03,1.42±0.04。双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-34a-5p mimics与GMFB 3'UTR WT载体共转染组荧光强度为0.44±0.03,低于对照miR-NC与WT载体共转染组1.02±0.06。CCK8结果所示,miR-34a-5p mimics+GMFB组细胞培养24?h和48?h后,A450值分别为0.99±0.02和1.50±0.03,高于miR-34a-5p mimics组0.53±0.03, 0.87±0.04,差异具有统计学意义（t?=?7.07,P < 0.01;t?=?9.14,P < 0.01）。Western Blot检测结果显示,miR-34a-5p mimics组细胞的GMFB蛋白表达量为0.25±0.01,低于miR-NC对照组0.90±0.03,差异具有统计学意义（t?=?35.60,P < 0.01）,miR-34a-5p mimics+GMFB组细胞GMFB蛋白表达量为1.03±0.03,高于miR-34a-5p mimics组0.25±0.01,差异具有统计学意义（t?=?42.74,P < 0.01）。 结论miR-34a-5p能够通过抑制靶基因GMFB的表达,抑制神经嵴细胞SH-SY5Y的增殖。     

FBXO6介导的ERO1L泛素化降解对膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用研究

目的探究F盒蛋白6 （FBXO6）对膀胱癌细胞的作用及其作用机制。 方法体外培养人正常膀胱上皮细胞株（SV-HUC-1）和人膀胱癌细胞株（T24）。用过表达载体阴性对照（oe-NC）、过表达FBXO6 （oe-FBXO6）、过表达内质网氧化还原蛋白-1样蛋白（oe-ERO1L）及oe-FBXO6和oe-ERO1L慢病毒液（MOI = 20）感染T24细胞。RT-qPCR检测细胞FBXO6和ERO1L mRNA表达;放线菌酮（CHX）蛋白合成抑制实验检测T24细胞ERO1L蛋白稳定性;免疫共沉淀（Co-IP）实验检测FBXO6对ERO1L泛素化调控;Western blot检测细胞FBXO6和ERO1L蛋白表达;CCK-8检测细胞活力;克隆形成实验检测细胞增殖;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。 结果与SV-HUC-1相比,T24细胞中FBXO6 mRNA （1.00±0.05比0.33±0.02）和蛋白表达（1.00±0.11比0.31±0.03）均降低（P均< 0.05）,而ERO1L mRNA （1.00±0.05比2.70±0.12）和蛋白表达（1.00±0.16比3.27±0.09）均升高（P均< 0.05）。FBXO6可降低ERO1L蛋白稳定性并促进ERO1L泛素化。与空白对照和oe-NC相比,oe-FBXO6细胞中FBXO6 mRNA （1.00±0.06比3.74±0.18）和蛋白表达（1.00±0.10比2.25±0.06）均升高,ERO1L蛋白表达（0.99±0.08比0.21±0.03）,细胞活力、克隆形成数[（78.00±3.00）比（41.67±2.52）个]、迁移[（150.67±5.03）比（91.67±5.51）个]和侵袭细胞数[（122.00±7.00）比（74.67±5.51）个]均降低（P均< 0.05）;与oe-NC相比,oe-ERO1L细胞中ERO1L蛋白表达（1.01±0.06比2.58±0.02）、细胞活力、克隆形成数[ （78.00±3.00）比（121.67±7.64）个]、迁移[（150.67±5.03）比（230.33±12.01）个]和侵袭细胞数[（122.00±7.00）比（203.00± 11.53）个]均升高（P均< 0.05）;与oe-FBXO6相比,oe-FBXO6+oe-ERO1L细胞中ERO1L蛋白表达（0.54±0.02比1.02±0.06）,细胞活力、克隆形成数[（41.67±2.52）比（62.00±3.61）个]、迁移[（91.67±5.51）比（131.67±6.03）个]和侵袭细胞数[（74.67±5.51）比（102.67±7.51）个]均升高（P均< 0.05）。 结论FBXO6通过介导ERO1L泛素化降解抑制膀胱癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

吴茱萸碱抑制破骨细胞分化延缓骨丢失的研究

目的探讨吴茱萸碱对破骨细胞分化与骨吸收功能的调控及对骨质疏松症的治疗作用。 方法取小鼠原代骨髓来源巨噬细胞分别给予0、10、20、50、100、200 μmol/L吴茱萸碱处理,CCK8检测细胞活力;然后利用原代骨髓来源巨噬细胞给予小鼠重组可溶性核因子κB受体活化因子配体与集落刺激因子行破骨细胞分化诱导,分别给予20与50 μmol/L吴茱萸碱干预。抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色检测破骨细胞形成能力,荧光定量PCR分析破骨细胞分化相关基因表达,免疫荧光检测F肌动蛋白（F-actin）形成,扫描电镜观察破骨细胞骨吸收能力。7月龄C57BL/6小鼠灌胃给予100与200 mg/kg吴茱萸碱,给药3个月后Micro-CT检测小鼠骨密度与骨质量。采用单因素方差分析和t检验进行统计学分析。 结果CCK8结果显示,与对照组相比,给予10、20、50、100 μmol/L吴茱萸碱处理后细胞活力无明显变化,差异无统计学意义（P > 0.05）;而给予200 μmol/L吴茱萸碱的细胞活力下降（100.64±0.18比47.54±5.58）,差异具有统计学意义（P < 0.01）。与对照组相比,20 μmol/L吴茱萸碱的TRAP染色阳性细胞数[（200.57±28.35）比（142.29±19.21）个]、Trap （1.00±0.13比0.55±0.16）、组织蛋白酶K（Ctsk） （1.01±0.17比0.59±0.11）mRNA水平、骨吸收面积比（1.00±0.15比0.79±0.19）均减少,差异有统计学意义（P < 0.05）。与对照组相比,50 μmol/L吴茱萸碱的TRAP阳性细胞数[（200.57±28.35）比（112.71±12.18）个]、Trap （1.00±0.13比0.46±0.17）、Ctsk（1.01±0.17比0.49±0.12）、树突状细胞-特异性跨膜蛋白（DC- Stamp） （1.00±0.10比0.55±0.14）、c-Fos （1.01±0.10比0.58±0.14）、活化T细胞核因子c1 （Nfatc1） （1.00±0.10比0.59±0.14）、H+转运ATP酶v0亚基d2 （Atp6v0d2）的mRNA表达（1.00±0.10比0.59±0.18）、F-actin数量[（165.00± 18.50）比（98.33±21.15）个]和骨吸收面积比（1.00±0.15比0.62±0.10）均降低,差异有统计学意义（P < 0.05）。Micro-CT结果显示,与生理盐水组相比,100 mg/kg吴茱萸碱组小鼠骨密度有一定升高[（0.19±0.03）比（0.21±0.01）g/cm³],但差异无统计学意义（P > 0.05）;与生理盐水组相比,200 mg/kg吴茱萸碱组小鼠胫骨的骨密度[（0.19±0.03）比（0.23±0.01）g/cm³]、骨体积比[（9.79±1.39）﹪比（11.62±1.18）﹪]、骨小梁数量[（2.43±0.29）比（3.08±0.43）/mm]上升,骨小梁分离度[（0.44±0.06）比（0.27±0.05）mm]下降,差异具有统计学意义（P < 0.05）。 结论吴茱萸碱通过抑制破骨细胞分化与骨吸收功能延缓小鼠骨量丢失。     

毛蕊异黄酮通过JAK2/STAT3信号通路抑制大鼠动脉粥样硬化

摘要 目的：探究毛蕊异黄酮（CA）治疗动脉粥样硬化（AS）的作用及其机制。方法：将10只未建模和给药的Wistar大鼠作为对照组（Control组）,50只AS建模Wistar大鼠随机分为AS模型组（AS组）、低剂量CA组（L-CA组,10 mg/kg）、中剂量CA组（M-CA组,50 mg/kg）、高剂量CA组（H-CA组,100 mg/kg）和阳性药物辛伐他汀组（Sim组,2 mg/kg）,每组10只。每天给药1次,连续4周。通过苏木精伊红（HE）染色观察大鼠胸主动脉组织的病理变化。按照试剂盒说明书测定各组大鼠血清总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）水平。将大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）分为6组,Control组、血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）组（10-6 mmol/L Ang Ⅱ）、Ang Ⅱ+0.1 CA组（10^-6 mmol/L Ang Ⅱ+0.1 mg/L CA）、Ang Ⅱ+1 CA组（10^-6 mmol/L Ang Ⅱ+1 mg/L CA）、Ang Ⅱ+10 CA组（10^-6 mmol/L Ang Ⅱ+10 mg/L CA）、Ang Ⅱ+1 CA+AG490（10^-6 mmol/L Ang Ⅱ+50 μmol/L AG490）组。通过CCK-8法和EdU染色测定VSMC的增殖,Transwell测定VSMC的迁移。通过免疫荧光染色检测VSMC中的α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达。通过Western blot检测大鼠胸主动脉组织和VSMC中的α-SMA、骨桥蛋白（OPN）、JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3的蛋白表达。结果：L-CA组、M-CA组、H-CA组和Sim组大鼠胸主动脉的病变均较AS组减轻,其中H-CA组和Sim组形态改善最明显。与AS组相比,M-CA组、H-CA组和Sim组大鼠的血清中TC、TG、LDL-C和MDA水平降低（P<0.05）,血清HDL-C和SOD水平升高,胸主动脉组织中的α-SMA蛋白表达水平升高（P<0.05）,OPN的蛋白表达水平及JAK2和STAT3的蛋白磷酸化水平降低（P<0.05）。与Ang Ⅱ组相比,Ang Ⅱ+1 CA组、Ang Ⅱ+10 CA组和Ang Ⅱ+1 CA+AG490组的相对细胞活力和EdU阳性率降低（P<0.05）,迁移细胞数降低（P<0.05）,α-SMA相对荧光强度和蛋白表达水平升高（P<0.05）,OPN的蛋白表达水平及JAK2和STAT3的蛋白磷酸化水平降低（P<0.05）。结论：CA可减轻AS大鼠的胸主动脉病变、纠正血脂代谢和氧化应激失衡,其机制可能与CA对VSMC表型转化和JAK2/STAT3信号通路的抑制有关。     

血管紧张素Ⅱ对缺血心肌细胞钾离子通道的作用

实验用胶原酶酶解法急性分离豚鼠心室肌细胞,利用全细胞膜片钳的方法记录心室肌细胞的延迟整流钾电流(Ik）、内向整流钾电流（Ik1）和ATP敏感钾电流（IKATP）。采用低氧、无糖、高乳酸和酸中毒综合方式模拟缺血灌流,造成细胞的模拟缺血,并在缺血的基础上继续用含100nmol/L AngⅡ灌流细胞,观察Ang Ⅱ对模拟缺血心室肌细胞钾离子通道的影响。实验结果显示：（1）模拟缺血时,Ik明显减小;Ang Ⅱ能进一步抑制Ik。（2）模拟缺血条件下,Ik1受到抑制,并且以内向电流的抑制为主;Ang Ⅱ可加强对Ik1内向电流的抑制,而对部分外向电流则有增加的作用。（3）模拟缺血使IKATP外向电流略有增加;Ang Ⅱ则明显加强IKATP外向电流,此效应能被优降糖所阻断。     

miR-491-5p靶向调控SHOC2对食管鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨miR-491-5p对食管鳞癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响及作用机制。 方法培养永生化食管上皮细胞株HET-1A和人食管癌细胞株EC109,EC9706,KYSE510,qRT-PCR检测细胞中miR-491-5p和富含亮氨酸重复蛋白SHOC2 （SHOC2） mRNA水平。EC109细胞分为空白对照组、miR- 491-5p组、miR-NC组、miR-491-5p+pcDNA-SHOC2组和miR-491-5p+pcDNA组,MTT检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,Western Blot法检测CyclinD1、Vimentin、E-cadherin以及MAPK/ERK信号通路相关蛋白水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR- 491- 5p与SHOC2之间调控关系。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,两两比较采用SNK-q检验。 结果食管鳞癌细胞EC109、EC9706和KYSE510中miR-491-5p表达水平低于HET-1A细胞（0.32±0.06、0.62±0.10、0.61±0.08比1.00±0.08）,差异具有统计学意义（F = 106.340,P < 0.001）;SHOC2 mRNA表达水平高于HET- 1A细胞（2.85±0.16、1.73±0.10、1.45±0.06比1.02±0.09）,差异具有统计学意义（F = 464.949,P < 0.001）。miR-491-5p组EC109细胞培养72 h后的OD值、细胞迁移数、侵袭数及CyclinD1、Vimentin、p-MEK和p-ERK蛋白水平均低于miR-NC组（0.70±0.06比1.42±0.08,65.01±10.36比150.01±12.48,70.03±10.26比140.02±11.85,0.30±0.03比0.93±0.16,0.41±0.05比0.86±0.08,0.32±0.06比0.95±0.11,0.40±0.06比0.92±0.13）,差异具有统计学意义（F = 236.565、159.440、120.706、101.071、98.619、130.766、77.046,P均< 0.001）,E-cadherin蛋白水平高于miR-NC组（0.89±0.13比0.48±0.08）,差异具有统计学意义（F = 816.432,P < 0.001）。miR-491-5p在EC109细胞中负调控SHOC2表达,SHOC2过表达逆转了miR-491-5p过表达对EC109细胞增殖、迁移和侵袭及MAPK/ERK信号通路的影响。 结论miR-491-5p可抑制食管鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其作用机制可能与下调SHOC2表达抑制MAPK/ERK信号通路活性有关。     

柴胡皂苷D对甲状腺乳头状癌细胞TPC-1生物学行为的影响

目的探讨柴胡皂苷D对体外甲状腺乳头状癌（PTC）细胞TPC-1增殖、侵袭、迁移、活性氧和凋亡的影响。 方法不同浓度（0、5、10、20 μmol/L）柴胡皂苷D干预TPC-1细胞,CCK-8法检测细胞增殖率;Annexin-V-FITC/PI双染试剂盒检测细胞凋亡率;活性氧试剂盒检测细胞活性氧;Transwell小室法检测细胞侵袭、迁移能力;Western blot法检测凋亡蛋白剪切的半胱天冬酶3 （cleaved caspase 3）、B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）、Bcl2相关X蛋白（Bax）和侵袭迁移相关蛋白E钙黏蛋白（E-cadherin)和N钙黏蛋白（N-cadherin）及Wnt/β连环蛋白（β-catenin）信号通路相关蛋白Wnt3a和β-catenin的表达量。多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。 结果与0 μmol/L柴胡皂苷D干预相比,（5、10、20 μmol/L）柴胡皂苷D干预TPC-1细胞存活率[24 h：（88.07±0.75）%、（76.06±0.56）%、（65.80± 1.66）%比（100.00±1.00）%;48 h：（72.40±0.35）%、（52.26± 0.22）%、（41.30±0.17）%比（100.00± 1.53）%;72 h：（56.50±0.22）%、（40.26±0.21）%、（31.10± 0.14）%比（100.00±0.14）%]、细胞侵袭率[（65.43±1.32）%、（49.46±0.31）%、（22.48±0.85）%比（100.00±1.25）%]、迁移率[（67.45±0.96）%、（52.42±0.39）%、（42.12±1.10）%比（100.00±2.00）%]、Bcl-2蛋白表达量（0.51±0.02、0.31±0.02、0.22±0.02比0.62±0.01）、Wnt3a表达量（0.56±0.06、0.37±0.01、0.26±0.02比0.72±0.03）、β-catenin表达量（0.59±0.02、0.40±0.03、0.14±0.03比0.82±0.03）和N-cadherin表达量（0.49±0.05、0.34 ±0.03、0.14± 0.03比0.62±0.05）均降低,细胞活性氧含量增加,凋亡率[（12.36±1.32）%、（23.15±2.27）%、（36.65±3.22）%比（7.32±1.25）%]、Bax蛋白表达量（0.45±0.02、0.51±0.01、0.79±0.02比0.32±0.01）、cleaved caspase-3蛋白表达量（0.26±0.02、0.37±0.02、0.40±0.02比0.13±0.01）和E-cadherin表达量（0.20±0.02、0.37±0.02、0.46±0.05比0.12±0.01）均增加（P均< 0.05）。 结论柴胡皂苷D能够抑制PTC细胞的生物学行为。     

CGRP抑制AngⅡ诱导HUVECs的损伤及其ERK1/2信号通路

目的:探索降钙素基因相关肽(CGRP)对经血管紧张素Ⅱ (AngⅡ)损伤的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用且CGRP与细胞外信号调节激酶(ERK1/2)的关系.方法:不同浓度的CGRP、AngⅡ处理体外培养的HUVECs,噻唑蓝比色法检测HUVECs活力;流式细胞仪分析HUVECs凋亡率及其增殖指数;显微镜观察HUVECs的形态学变化;Western blot检测p-ERK1/2的表达.结果:AngⅡ (0.1-100 nmol/L)浓度依赖性降低HUVECs的活力,而CGRP (0.1-1000 nmol/L)浓度依赖性增加HUVECs的活力;HUVECs增殖指数PI值受AngⅡ、CGRP及PD98059(ERK1/2抑制剂)影响;AngⅡ孵育HUVECs在第10min时ERK1/2磷酸化水平可达到最大;CGRP能抑制AngⅡ诱导的HUVECs内ERK1/2磷酸化水平;CGRP8-37(CGRP受体拮抗剂)可部分减弱CGRP抑制ERK1/2磷酸化水平作用;PD98059(ERK1/2抑制剂)作用下,ERK1/2磷酸化水平显著降低,但是对细胞内总ERK1/2水平表达无明显影响.结论:CGRP可抑制AngⅡ对HUVECs的损伤作用,可能与CGRP抑制信号通路ERK1/2有关.     

lncRNA RPL34-AS1通过靶向调控miR-575表达对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响

目的探究RPL34-AS1对卵巢癌细胞增殖、迁移的影响及其作用机制。 方法取对数生长期SKOV3细胞用无血清培养基同步化12 h,将pcDNA、pcDNA-RPL34-AS1、si-NC、si-RPL34-AS1、anti-miR-NC、anti-miR-575转染至SKOV3细胞中,分别记为pcDNA组、pcDNA-RPL34-AS1组、si-NC组、si-RPL34-AS1组、anti-miR-NC组、anti-miR-575组;将pcDNA-RPL34-AS1与miR-NC、miR-575分别共转染至SKOV3细胞中,记为pcDNA-RPL34-AS1+miR-NC组、pcDNA-RPL34-AS1+miR-575组。实时荧光定量PCR （RT-qPCR）检测临床组织标本及转染后各组细胞中RPL34-AS1和miR-575的表达水平;双荧光素酶报告实验检测RPL34-AS1和miR-575的靶向关系;四甲基偶氮唑盐比色法（MTT）检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹（Western blot）法检测细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A （p21）、B细胞淋巴瘤/白血病-2 （Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）蛋白表达水平。两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验。 结果与癌旁组织相比,卵巢癌组织中RPL34-AS1表达水平降低（1.00±0.08比0.47±0.05）,miR-575表达水平升高（1.01±0.07比3.12±0.28）（P < 0.05）。转染si-RPL34-AS1后,细胞活性升高（48 h：0.68±0.06比0.55±0.05;72 h：0.99±0.08比0.71±0.06）,G1期细胞所占比例降低（13.42±1.38比32.15±2.11）,S期细胞所占比例升高（53.75±5.22比34.69±3.41）,细胞凋亡率降低（4.31±0.42比9.25±0.91）,CyclinD1、Bcl-2表达水平升高（0.92±0.08比0.71±0.07;0.86±0.07比0.61±0.06）,p21、Bax表达水平降低（0.13±0.02比0.29±0.03;0.19±0.02比0.31±0.03） （P均< 0.05）。RPL34-AS1靶向调控miR-575,过表达RPL34-AS1或抑制miR-575后可抑制细胞活性,阻滞细胞周期和促进细胞凋亡。miR-575过表达逆转了RPL34-AS1过表达对卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制和凋亡促进的作用。 结论过表达RPL34-AS1可抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与下调miR-575有关。