淡水鱼类微囊藻毒素去毒酶基因的克隆

微囊藻毒素去毒酶在鱼类微囊藻毒素去毒过程中起着关键作用,研究成功克隆鲢鱼、鳙鱼、草鱼、鲫鱼、鳜鱼、罗非鱼等淡水鱼类微囊藻毒素去毒酶基因cDNA核心片段而首次获得这些淡水鱼类微囊藻毒素去毒酶氨基酸序列。鲢鱼、鳙鱼、草鱼、鲫鱼、鳜鱼、罗非鱼微囊藻毒素去毒酶基因与人、小鼠、大鼠、牛、猪、羊的谷胱甘肽S-转移酶基因氨基酸同源性为60%左右,表明淡水鱼类微囊藻毒素去毒酶基因在进化上变异性较大,与其承担微囊藻毒素去毒代谢之特殊功能相适应。     

穴居狼蛛毒中磷酸单酯酶和核酸酶的研究

本文分别用对硝基酚磷酸酯、3＇-[32p]标记的RNA和大肠杆菌噬菌体入DNA作底物测定了新疆产穴居狼蛛毒中与核酸代谢有关的酶,发现此毒中含有磷酸单酯酶、核糖核酸酶和脱氧核糖核酸酶。     

鲢鱼可溶性谷胱甘肽S-转移酶(sGST)基因cDNA全序列与5′调控区的克隆与分析

淡水鱼类可溶性谷胱甘肽S-转移酶(sGST)在微囊藻毒素去毒代谢过程中具有独特 的关键作用,因而也称为微囊藻毒素去毒酶. 从淡水食毒藻鱼类鲢鱼(Hypophthalmichthys molitrix)肝脏通过简并引物克隆微囊藻毒素去毒酶基因cDNA核心序列,应用5′RACE和3′RACE技术分别扩增该序列的5′末端和3′末端序列,最后通过序列拼接获得鲢鱼肝脏微囊藻毒素去毒酶基因cDNA全序列. 序列分析结果表明,鲢鱼肝脏微囊藻毒素去毒酶基因cDNA全长920 bp,其中5′-UTR长74 bp,3′-UTR长174 bp,编码区长672 bp,编码223个氨基酸. 应用基因组步行法,在鲢鱼克隆得到淡水鱼类微囊藻毒素去毒酶基因5′侧翼区878 bp序列. 与哺乳动物及海水鱼sGST基因不同,鲢鱼微囊藻毒素去毒酶基因的5′侧翼区,发现存在多个脂多糖反应元件(LPSRE),表明来源于毒藻的脂多糖可能对鲢鱼微囊藻毒素去毒酶基因表达有潜在调控作用.     

鲢鱼可溶性谷胱甘肽S-转移酶(sGST)基因cDNA全序列与5′调控区的克隆与分析

淡水鱼类可溶性谷胱甘肽S-转移酶(sGST)在微囊藻毒素去毒代谢过程中具有独特的关键作用,因而也称为微囊藻毒素去毒酶.从淡水食毒藻鱼类鲢鱼(Hypophthalmichthysmolitrix)肝脏通过简并引物克隆微囊藻毒素去毒酶基因cDNA核心序列,应用5′RACE和3′RACE技术分别扩增该序列的5′末端和3′末端序列,最后通过序列拼接获得鲢鱼肝脏微囊藻毒素去毒酶基因cDNA全序列.序列分析结果表明,鲢鱼肝脏微囊藻毒素去毒酶基因cDNA全长920bp,其中5′-UTR长74bp,3′-UTR长174bp,编码区长672bp,编码223个氨基酸.应用基因组步行法,在鲢鱼克隆得到淡水鱼类微囊藻毒素去毒酶基因5′侧翼区878bp序列.与哺乳动物及海水鱼sGST基因不同,鲢鱼微囊藻毒素去毒酶基因的5′侧翼区,发现存在多个脂多糖反应元件(LPSRE),表明来源于毒藻的脂多糖可能对鲢鱼微囊藻毒素去毒酶基因表达有潜在调控作用.     

何谓“清栓酶”“AT—3”?

編辑同志: 近来我们发现蝮蛇抗栓酶的名目较多,有“清栓酶”,报纸上又见有“AT—3”,到底是不是同一样的产品? 田阳县医院邓有辉我国从蛇毒中提取有效成份制成抗血栓药物目前有三种,即用东北白眉蝮蛇毒制成“东北蝮蛇抗栓酶”江浙蝮蛇毒制成的,“江浙蝮蛇抗栓酶”和用五步蛇毒制成的“去纤酶”。     

用酶联免疫吸附试验检测肉毒毒素

<正>近年来建立的酶联免疫吸附试验(ELISA)给肉毒毒素的快速检测增加了一项重要的手段。某些酶既可结合于抗原(如竞争性酶联免疫吸附试验中的毒素),也可结合于抗体(如爽心法酶联免疫吸附试验中的IgG)。考虑到肉毒毒素是一种强毒物质,故更多地用后一标记方法。藉此已对A、B、E、G型肉毒毒素及A、B、E三型混合毒素,C和D型的毒素有关抗原和毒性的关系,一些肉毒梭     

清栓酶（蝮蛇抗栓酶）的药理研究与临床应用进展

清栓酶（蝮蛇抗栓酶）的药理研究与临床应用进展中国蛇协蛇毒研究所邓禄延,覃公平,胡征林自本世纪八十年代起,蛇毒抗凝制剂在我国研制及应用于临床以来,相继有尖吻蝮蛇毒制剂去纤酶,长白山陆生白眉蝮蛇毒制剂清栓酶（蝮蛇抗栓酶）及江浙蝮蛇毒制剂江浙蝮蛇毒抗栓酶（...     

微囊藻毒素去毒酶转基因模型的构建

根据已克隆的鲢鱼(Hypophthalmichthysmolitrix)微囊藻毒素去毒酶cDNA全序列设计特异引物,利用PCR方法获得鲢鱼微囊藻毒素去毒酶基因编码区,将该编码区与绿色荧光蛋白连接,分别构建融合表达载体pEGFP-N1-sGST和双顺反子表达载体pIRES2-EGFP-sGST。利用脂质体转染法将融合表达载体pEGFP-N1-sGST转染Hela细胞,60h后检测到绿色荧光基因表达;通过显微注射,将双顺反子表达载体pIRES2-EGFP-sGST注入斑马鱼(Daniorerio)受精卵,获得了转鲢鱼微囊藻毒素去毒酶基因斑马鱼,从而构建了微囊藻毒素去毒酶转基因模型。上述2种转基因模型的成功构建为进一步研究鲢鱼、鳙鱼(Aristichthysnobilis)、罗非鱼(Oreochromisnilotica)等淡水鱼类微囊藻毒素去毒酶基因调控元件、去毒分子机理及研发转基因鲢鱼、鳙鱼、罗非鱼等微囊藻毒素高效生物去毒器奠定了基础。     

蝮蛇毒抗凝血活酶组份及几种蛇毒粗毒对人红细胞和血小板的作用

蝮蛇毒抗凝血活酶组分及蝗蛇毒、圆斑蝰蛇毒和眼镜蛇毒粗毒,不仅能够水解血浆中的磷脂,而且还能水解完整人红细胞膜和完整人血小板膜上的磷脂。但是五步蛇毒和金环蛇毒粗毒却不能水解完整人血小板膜上的磷脂。 扫描电镜观察表明,由于抗凝血活酶组份和几种蛇毒粗毒的作用,人红细胞和人血小板的形态发生了巨大的变化;人红细胞由正常的双圆盘形变成带刺的小球,人血小板的外形变成蜂窝状。     

蛇毒类凝血酶的基因工程研究进展

自 1 936年 Klobusitzki和 Konig首次从美洲矛头蝮蛇 ( Bothrops jararaca)毒中获得部分纯化的类凝血酶以来 ,迄今已发现 30多种蛇毒中含有类凝血酶组份 ,并有 2 0多种先后得到分离和纯化。尤其近年来基于有关蛇毒类凝血酶分子结构及酶学性质的研究成果 ,部分蛇毒类凝血酶已经作为治疗药物而广泛应用于临床 ,如国外的 Ancrod和Batroxobin蛇毒抗凝剂 ,国内的五步蛇毒去纤酶、东北白眉蝮蛇抗栓酶 (清栓酶 )、江浙蝮蛇抗栓酶等已广泛用于临床治疗脑血栓形成、脉管炎、冠心病、心肌梗死 ,也有用于治疗癌痛综合症 [1]。但目前有关蛇毒类凝血酶…     

蛇毒的研究和利用——Ⅲ.浙江产蝮蛇Agkistrodon halys Pallas蛇毒对凝血系统的作用

用体外和体内试验方法研究了浙江产蝮蛇毒对凝血系统的作用。实验结果表明,浙江产蝮蛇毒中至少含有两种抗凝组份——抗凝血活酶组份和胞浆素样物质。     

蛇毒的研究和利用——Ⅲ.浙江产蝮蛇 Agkistrodon halys Pallas 蛇毒对凝血系统的作用

用体外和体内试验方法研究了浙江产蝮蛇毒对凝血系统的作用。实验结果表明,浙江产蝮蛇毒中至少含有两种抗凝组份——抗凝血活酶组份和胞浆素样物质。     

用尖吻蝮蛇毒蝮蛇毒及抗蛇毒血清处理小鼠S180,EAC腹水癌的初步观察

本文报道了尖吻蝮蛇毒、蝮蛇毒及抗蛇毒血清能使接种S180、EAC腹水癌的小鼠明显延长存活时间、降低接种率,但不能完全阻止癌细胞生长。体外具有较明显的导致癌细胞肿胀、膜破裂、核纤维化、坏死等。从腹水酶活力测定及抗血清初步研究结果表明,癌细胞病变中产生的某些抗原物质可能与蛇毒中的酶和毒蛋白相近。因此注射蛇毒后可在体内产生相关抗体,中和癌细胞产生的毒素以达到治疗目的。     

谈清栓酶与东北白眉蝮蛇毒市场

近几年来,在防治各种心、脑、周围闭塞性血管病过程中,清栓酶(蝮蛇抗栓酶)显示出良好疗效,市场需求量较大。从而自86年起,生产厂家逐渐增多,目前国内已有32个厂家或单位生产此类药品。随着厂家增多,其原料东北白眉蝮蛇毒(粗原毒)也相应的畅销,售价高于江浙蝮蛇毒8～10倍。由于蛇毒差价原因,给某些商贩造成可乘之机,将江浙蝮蛇毒冒充东北白眉蝮蛇毒进行兕售。据了解不少厂家或单位直接以个体养蛇户或商贩手中购买粗原毒,造成原料不纯,直接影响清栓酶药品质量。江浙蝮蛇毒以外观上与东北白眉蝮蛇毒相似,但含神经毒、出血毒素均较高,一般分离制药残留较多,临床用药容易出现其反应,并且降低血小板作用明显。而东北白眉蝮蛇毒含神经毒极微,出血毒素极低,经一般分离制药即可以除去,临床用药安全,一般不降低血小板。根据调查分析,假冒原料有以下几个原因:     

蛇毒丝氨蛋白酶多样性：底物专一性免疫化学及序列比较研究

本文报道烙铁头蛇毒纤维蛋白原溶酶,眼镜王蛇蛇毒纤维蛋白原溶酶,竹叶青蛇毒专一纤溶酶原激活剂对５种小分子多肽底物的底物专一性,及这些蛇毒丝氨酸蛋白酶对各种凝血因子（第Ｘ因子、凝血酶原、纤溶酶原、蛋白Ｃ）的作用,并和其它蛇毒丝氨酸蛋白酶如矛头蝮蛇毒凝血酶样酶、铜头蝮蛇毒蛋白Ｃ激活剂ＡＣＣ－Ｃ、蝰蛇毒第Ｖ因子激活剂ＲＶＶ－Ｖ进行比较研究。通过酶标偶联免疫反应研究了抗ｓｖ－ＰＡ抗体与各种丝氨酸蛋白酶的免疫     

不同蝮蛇抗栓酶对动物的神经毒性敏感反应

给小鼠、家兔、豚鼠等３种动物注射不同剂量的两种蝮蛇抗栓酶,观察它们的反应。结果：东北白眉蝮蛇抗栓酶未见神经毒反应,而浙江蝮蛇抗栓酶有神经毒反应,以豚鼠的反应最为敏感,主要表现为箭毒样毒性症状     

用尖吻蝮蛇毒、蝗蛇毒及抗蛇毒血清处理小鼠S_(180)、EAC腹水癌的初步观察

本文报道了尖吻蝮蛇毒、蝮蛇毒及抗蛇毒血清能使接种S_(180)、EAC腹水癌的小鼠明显延长存活时间、降低接种率,但不能完全阻止痛细胞生长。体外具有较明显的导致,菡细胞肿胀、膜破裂,核纤维化,坏死等。从腹水酶活力测定及抗血清初步研究结果表明,癌细胞病变中产生的某些抗原物质可能与蛇毒中的酶和毒蛋白相近。因此注射蛇毒后可在体内产生相关抗体,中和癌细胞产生的毒素以达到治疗目的。     

蛇伤性肢体溃疡的治疗进展

混合毒类毒蛇和血循毒类毒蛇的蛇毒中含有丰富的血循毒素，卵磷脂酶A、透明质酸酶、蛋白水解酶等毒性物质，进入人体后对组织产生严重损害，尤其是对微血管的内皮细胞、细胞的膜系统，增强管壁的通透性，以致发生组织水肿、坏死性炎症，甚至直接作用于肌纤维，导致肌纤维的断裂，从而形成溃疡和组织坏死，严重时坏死可深达骨膜，使肌腱和骨骼外露。中医认为，     

腐植酸胺肥料对矿毒土中水稻根部末端氧化酶活力的影响

实验采用腐植酸铵处理在矿毒土中生长的7302晚稻,应用测压法对水稻四个发育时期(移栽期、分蘖期、分蘖盛期、孕穗期)禾苗根部的末端氧化酶进行测定,发现在四个发育时期均有细胞色素氧化酶和抗坏血酸氧化酶的存在。这两种氧化酶在不同的发育时期酶的活力也不同。实验分三组、即腐胺组,碳胺组,对照组。实验结果证明以腐胺组酶的活力最强,其中细胞色素氧化酶在禾苗分蘖盛期根部酶的活力最高,孕穗期酶活力下降。抗坏血酸氧化酶的活力也比其他两组为高,但抗坏血 酸 氧化酶在四个发育时期酶活力变化不大,远不及细胞色素氧化酶变化的那样显著。但实验结果证明腐植酸胺处理生长在矿毒土中的7302晚稻两种酶的活力都比碳酸氢铵组和对照组为高,作者认为细胞色素氧化酶在分蘖盛期表现酶的活力增强,这是由于腐植酸铵肥料处理矿毒土后,使土壤得到改良,使严重缺氧矿毒土的土壤透气性得到改善。腐植酸可使铁、铝、钙、镁等金属的不溶性盐类释放,从而被腐植酸中的过多的正电荷所吸附,作为养料。同时腐植酸分子中存在着多元酚基,它参与植物体内的氧化还原过程,腐植酸的醌—酚结构既起着氧的活化剂的作用又是氢的载体,因此在矿毒土严重缺氧的情况下更为突出。另一方面腐植酸铵能促进生物氧化还原过程,增强水稻体内氧化还原状况,促进有机物质的积累与合成,促进根系生长,以达到增产的目的,因此在我国大面积的矿毒土中施用腐植酸铵是增加生产的有力措施。     

水稻依赖抗坏血酸H2O2清除系统在抗铁毒中的作用

根据营养液培养试验从水稻Ａｚｕｃｅｎａ×ＩＲ６４ 发展的一双单倍体（ＤＨ） 群体中筛选出抗铁毒与敏感品系。在铁毒害处理后,各品系的抗坏血酸过氧化物酶（ＡＰ） 、脱氢抗坏血酸还原酶（ＤＲ） 、谷胱甘肽还原酶（ＧＲ） 的活性均有明显提高;水稻受铁毒后的生物量递减量与ＡＰ、ＤＲ、ＧＲ 活性呈负相关。说明抗坏血酸过氧化物酶Ｈ２Ｏ２ 清除系统在水稻抗铁毒中起着十分重要的作用。