湖南烙铁头蛇毒中一个新的舒缓激肽增强肽（TmF）

通过 70 %冷甲醇抽提、SephadexG 15分子筛和反相高效液相色谱C1 8层析 ,从湖南产烙铁头蛇毒 (Trimeresurusmucrosquamatus)冻干粉中纯化得到一个新的舒缓激肽增强肽 (BPP) ,命名为TmF。该小肽的氨基酸序列为pGlu Gly Arg Pro Leu Gly Pro Pro Ile Pro Pro (pGlu表示焦谷氨酸 )。序列结果分析表明 ,TmF和已经分离得到的BPPs有很高的序列同源性。MSI MS测定其分子量为 1.110 7kD。TmF的生物学活性和药理学活性检测的结果表明 ,它增强舒缓激肽 (BK) ( 1mg L)诱导的离体豚鼠回肠纵行肌收缩的活性为 ( 1.13± 0 .3)单位 (mg L) ;TmF ( 5 .0× 10 - 4mg kg)可以增强约 ( 14± 2 )mmHg的由BK( 5 .0× 10 - 5mg kg)诱导的舒张压下降 ;在抑制剂试验中 ,不同剂量的TmF和 5× 10 - 2 mg的血管紧张素转化酶保温 30min ,结果表明大约2 .0× 10 - 3mg的TmF表现出对ACE水解活性的半数抑制率 (IC50 )。     

不同地区舟山种和孟加拉种眼镜蛇的神经毒素

先前的工作发现 ,眼镜蛇孟加拉种的神经毒分布存在明显的地理差异 ,但是导致这种现象的原因还不是很清楚。该工作首先采集夏季的眼镜蛇种 ,进行分类学的鉴定 ,以排除因为种属分类、季节和年龄而导致的不确定因素对蛇毒成分产生影响。再从鉴定好的成年浙江舟山种和云南孟加拉种眼镜蛇蛇毒中分离获得短链神经毒素 ;同时采用RT PCR方法得到相应的基因。结果从浙江舟山种眼镜蛇蛇毒中分离到两个神经毒素 ;从云南孟加拉种蛇毒中得到三个神经毒素。这些神经毒素都是短链神经毒素。说明该两个蛇种与已经报道的台湾及浙江的舟山种眼镜蛇很相似 ,蛇毒中都以短链神经毒素为主。另外泰国孟加拉种眼镜蛇蛇毒中则以长链神经毒素为主。这种现象很难用种群发生的前后或者地理距离的长短来解释 ,而可能与地区间的气候、地理环境或者眼镜蛇的食物差别相关。实验统计表明在云南、浙江和台湾这些条件基本相似 ,而泰国就有很大的不同。     

应用改良流式法检测猕猴和食蟹猴体内血型抗体水平的分布情况

绝大部分灵长类动物存在与人类相似的ABO血型系统,该研究采用改良流式法(flow cytometry method,FCM)检测猕猴及食蟹猴血清中血型抗体水平的分布情况。以流式细胞术为基础,使用商品化人源红细胞为靶细胞,并通过加入特异性荧光标记的抗人IgM或IgG二抗,对收集的实验用猕猴及食蟹猴的血清样本进行检测,以人类健康受试者的血清样本为对照,比较两者血型抗体水平的差异。结果显示:预先用人O型浓缩红细胞吸附猴血清中所含种属间非特异性抗体后,FCM法能够准确检测其血型抗体水平及分型,并且发现猴血清中天然血型抗体的水平明显低于健康人(P<0.05)。由此得出:通过预处理清除非特异性抗体的干扰后,FCM法同样适用于灵长类动物血清中血型抗体的检测,也为构建灵长类动物模拟人ABO血型不合器官移植模型提供了技术保障和实验数据。     

菜花烙铁头蛇毒C-型凝集素基因的克隆与序列分析

从菜花烙铁头蛇（Trimeresurus jerdonii)的毒腺中提取mRNA,采用RT-PCR技术进行体外扩增,将扩增产物克隆到PMD18-T载体中,最后筛选出一个编码凝集素的基因,命名为TJL。由TJL基因序列推导的氨基酸序列中包含分别由23和135个氨基酸残基组成的信号肽和成熟肽。氨基酸序列比较分析表明,TJL含有半乳糖结合位点和钙离子结合位点,与蝰科蛇毒凝集素TSL、PAL、APL和RSL的同源性较高（87.4%-90.4%）,与眼镜蛇科蛇毒凝集素BML的同源性较低（61.5%)。     

云南孟加拉种眼镜蛇蛇毒因子在灵长类动物内应用的免疫原性研究

眼镜蛇蛇毒因子(CVF)能特异性清除机体循环中的补体C3,从而可能在防治补体介导的损伤或疾病中发挥重要的治疗作用.云南孟加拉种眼镜蛇蛇毒因子(Y-CVF)较文献报道的其他各种CVF具有更高的活性和较少的用药量.为探讨Y-CVF静脉使用是否诱导灵长类动物体内产生特异性中和抗体和异种天然抗体,给2只正常食蟹猴每两周静脉注射一次治疗剂量(0.05mg/kg)的Y-CVF,共4次,检测注射前后不同时间点血清内补体C3水平、总补体活性(CH50)、抗Y-CVF抗体和抗猪内皮细胞异种抗体的变化.结果显示,前2次注射Y-CVF后均有良好的清除补体效果,第3次注射Y-CVF后补体仪被部分灭活,第4次注射Y-CVF后则基本无效.免疫印迹和酶联免疫吸附试验均证实特异性抗Y-CVF抗体产生,且其滴度随着Y-CVF注射次数增加而递增.多次注射Y-CVF后,并没有在血清内榆测到明显的抗猪内皮细胞抗体的变化.因此,多次静脉注射Y-CVF能诱导灵长类动物产生特异性抗体,从而导致Y-CVF失效,但未发现抗α-Gal异种天然抗体明显增加.     

菜花烙铁头蛇毒金属蛋白酶Jerdonitin的分离纯化和理化性质

以前从菜花烙铁头蛇毒中分离纯化到Jerdonitin。与其他Ⅱ型蛇毒金属蛋白酶相比,Jerdonitin由金属蛋白酶和去整合素两个结构域组成。但没有检测到其出血和纤维蛋白原降解活性,推测可能高压液相色谱的有机溶液影响了其酶活性。采用不含高压液相色谱柱层析的新分离手段分离得到Jerdonitin。Jerdonitin在还原和非还原SDS—PAGE电泳中分别呈现一条表观分子量为38和36kDa的条带。像其他典型的蛇毒金属蛋白酶一样,Jerdonitin优先降解人纤维蛋白原的alpha链,并且该活性能被EDTA完全抑制,而PMSF对其没有影响。Jerdonitin不诱导小白鼠皮下出血。     

云南松航播鸟鼠害初步调查

1966年以来云南省在直播造林过程中使用了飞机播种。航播的优越性在于:效率高,每架次可播种7—8千亩面积;成本低,每亩造林费用仅1.2—2.0元;适宜于大面积荒山造林。但是,多年来航播的云南松(Pinus yunanensis)种子在其萌发阶段遭到了严重的鸟、鼠害,影响造林效果。为此,云南动物所和林科所共同派人于1969年5—6月前往元谋县进行了初步调查。     

烙铁头Trimeresurus Mucrosquamatus蛇毒对血小板的活化作用

烙铁头Trimeresurus Mucrosquamatus蛇毒(TMV)可引起人和多种动物(狗、家兔、豚鼠)血小板的活化,发生聚集。血小板聚集强度与加入TMV的量有关。豚鼠血小板对TMV最为敏感,TMV引起豚鼠、家兔、狗和人的血小板聚集的最低剂量分别为0.6、12.5、2.0、2.0μg/ml。EDTA抑制而肝素不影响TMV对血小板的聚集作用。TMV的血小板聚集反应伴有5羟色胺的释放,引起家兔血小板5羟色胺最大释放(72％)的TMV剂量为100μg/ml。TMV还可以诱导血小板血栓恶烷A_2的形成。阿斯匹林能阻断TMV诱导的血栓恶烷A_2的生成,但并不抑制TMV引起的血小板聚集反应,提示TMV可能通过不依赖于血栓恶烷A_2的途径活化。初步结果表明TMV是研究血小板生理机制的有用工具。     

眼镜蛇毒腺cDNA文库的构建

目的　蛇毒含有多种生物活性成分, 从天然蛇毒中提取分离蛇毒有效成分受到蛇毒资源和质量的限制。为开发蛇毒有效成分的基因工程产品, 本研究构建了蛇毒腺的ｃ Ｄ Ｎ Ａ 文库, 为进一步筛选、克隆和表达蛇毒有关基因做准备。　方法　从眼镜蛇（ Ｎａｊａ ｎａｊａ ａｔｒａ ）毒腺中提取ｍ Ｒ Ｎ Ａ,经反转录合成ｃ Ｄ Ｎ Ａ后, 以λｇｔ１０ 噬菌体为载体, 构建非表达的ｃ Ｄ Ｎ Ａ 文库。　结果　蛇毒腺ｃ Ｄ Ｎ Ａ 非表达文库库容量为２×１０６ｐｆｕ／μｇ 重组子, 经大肠杆菌 Ｃ６００ ｈｌｆ 菌株平皿测定, 重组率为 ７０％ 。　结论　经平板鉴定和 Ｐ Ｃ Ｒ 快速鉴定表明, 所构 ｃ Ｄ Ｎ Ａ 文库达到建库要求, 能够用于目的基因筛选和克隆表达。     

广西眼镜王蛇毒神经毒素的一级结构

本文报道广西眼镜王蛇(Ophiophagus hannah)毒神经毒素(CM-9)的氨基酸顺序测定。应用固相DABITC-PITC双偶合-Edman手工降解法能对完整的还原S-羧甲胺甲基化CM-9从N端降解至第51位。联结经双向纸层析电泳纯化的用胰蛋白酶裂解肽段的顺序,完成含73个氨基酸残基的全部顺序。CM-9的顺序与Joubert报道的泰国眼镜王蛇神经毒素的顺序基本相似。整个顺序中有18%氨基酸残基不同,特别在C端四位残基有很大差别,颇与银环蛇α-毒素的C端的疏水性十分相似。