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为利用Patatinclass-Ⅰ启动子的块茎表达专一性以达到改良马铃薯的目的,利用PCR技术从马铃薯总DNA中扩增出Patatinclass-Ⅰ启动子及信号肽基因,并将其克隆:序列分析发现该基因片段与已发表的CNDA相应片段约94%同源。 相似文献
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马铃薯class I patatin基因家族的一个新亚型 总被引:2,自引:0,他引:2
马铃薯classⅠ与classⅡpatatin基因是具有不同组织表达专一性的一个多基因家族。用马铃薯classⅡpatatin启动子为探针,从中国马铃薯栽培品种“东农303”基因文库中筛选到一个classⅠpatatin基因。测定其DNA顺序1.8kb;它包括patatin基因5'侧翼区1407bp、结构基因363bp。根据5'端非翻译区顺序,它属classⅠpatatin基因。该基因的5'侧翼区 相似文献
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本文报道了从假单胞菌130菌株(Pseudomonas sp.130)染色体上克隆得到的6.8kb的GL-7-ACA酰化酶基因片段的限制酶谱,基因定位以及在不同的大肠杆菌基因启动子控制下酰化酶基因的表达水平。结果表明,所克隆的片段上,不存在EcoR Ⅰ、HindⅢ、claⅠI切点,分别具有一个HpaⅠ、两个xhoⅠ、三个BamHⅠI以及四个Pst I切点,同时初步确定了这些酶切位点之间的相对位置。经过一系列次级克隆研究,GL一7一AcA酰化酶基因已被定位在3.Okb的B 2-B3-Hpa Ⅰ片段上。实验比较了以pACYCl84、pDR540、pUCl9等为载体的次级克隆株(分别为pMR9、pMRl0和pMR11)在大肠杆菌中酰化酶基因的表达水平,测定数据表明tac启动子的启动活力比tet启动子强,即pMRl0的产酶量比pMR9高一倍,而当tac启动子前再串接一个lac启动子时(pMRll),产酶水平并不进一步提高。本文还对假单胞菌基因在大肠杆菌中的表达进行了讨论。 相似文献
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E.coli分泌表达载体的构建和人表皮生长因子在E.coli中的分泌… 总被引:2,自引:0,他引:2
采用PCR技术从E.coli基因组片中克隆出碱性磷酸酯酶的启动子和信号肽序列,在PhoA启动子5端设计了EcoRⅠ酶位点,在信号肽编码序列3端设计了HindⅢ酶切位点,将PCR产物酶切后EcoRⅠ-HindⅢ片段克隆至pBR322的EcoRⅠ-HindⅢ倍点,组构出含有PhoA启动子和信号肽序列的分泌表达载体pBM-Pho-,之后将人表皮生长因子的成熟肽基因克隆至该载体,使之有E.coli中获得分 相似文献
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杆状病毒早期基因启动子载体的构及报道基因的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
以AcNPVp10基因为侧翼序列,用AcNPV的IEI基因启动子构建了杆状病毒早期基因启动子载体,并将新霉天抗性基因插入IE1基因启动子下游,得到转移载体pAcPIneo。将它和野生型AcNPV DNA共转染昆虫细胞Sf9,由于neo基因的表达,通过G418的选择和富集作用,得到重组病毒vAcPIneo的纯培养。 相似文献
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透明颤菌血红蛋白基因在阿维链霉菌中的表达 总被引:7,自引:0,他引:7
将含有自身启动子的透明颤菌血红蛋白基因( vhb) 克隆至大肠杆菌—链霉菌穿梭质粒载体pIJ653 中构建成表达载体p WY101 和p WY102 ,用它们转化阿维菌素(avermectins) 产生菌———阿维链霉菌( Streptomyces avermitilis) ,经Western blotting 分析并未检测到vhb 基因表达,但用穿梭载体pHZ1252( 其中的vhb 基因位于受硫链丝菌素诱导的链霉菌强启动子PtipA之下) 转化阿维链霉菌并经硫链丝菌素诱导,则在该菌中表达出了有活性的VHb 蛋白。pHZ1252 在阿维链霉菌中发生了重组缺失,但缺失的pHZ1252 上仍含有完整的vhb 基因及诱导型强启动子,且可在阿维链霉菌中稳定遗传,却不能再转化大肠杆菌。 相似文献
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用基因枪法将GUS基因导入烟草脱外壁花粉及其瞬间表达 总被引:2,自引:0,他引:2
以β-葡糖苷酸酶(β-glucuronidase,GUS)基因作为报告基因,用基因枪法将其导入烟草(Nicotiana tabacum L.)脱外壁花粉和作为对照系统的完整花粉,探讨了启动子及不同轰击条件对外源基因瞬间表达的影响,比较了二者的转化频率。结果表明:玉米花粉特异启动子能启动GUS基因在脱外壁花粉和完整花粉中表达,而CaMV35S启动子则不能。靶距离越近,着弹率越高,GUS基因瞬间表达频 相似文献
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为利用patatin class-I启动子的块茎表达专一性以达到马苓薯的目的,利用PCR技术从马铃薯总DNA中扩增出Pataitn class-I启动子及信号肽基因,并将其克隆;序列分析发现该基因片段与已发表cDNA相应片段约94%同源。 相似文献
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异戊烯基转移酶基因在转基因烟草中的特异性表达 总被引:1,自引:0,他引:1
来自农杆菌(Agrobacterium tum efaciens)的细胞分裂素生物合成基因——异戊烯基转移酶基因(ipt)与矮牵牛(Petunia hybrida Vilm .)中的磷酸核酮糖羧化酶小亚基启动子(SSU)融合后转入烟草(Nicotiana tabacum L.)。在转基因烟草中研究了这种嵌合基因的特异性表达,并且测定了内源细胞分裂素水平的变化。结果表明,矮牵牛的SSU 启动子能够特异性地控制ipt基因在烟草中的表达 相似文献
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杆状病毒早期基因启动子载体的构建及报道基因的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
以AcNPVp10基因为侧翼序列,用AcNPV的IE1基因启动子构建了杆状病毒早期基因启动子载体,并将新霉素抗性基因(neo)插入IE1基因启动子下游,得到转移载体pAcPIneo。将它和野生型AcNPVDNA共转染昆虫细胞Sf9,由于neo基因的表达,通过G418的选择和富集作用,得到重组病毒vAcPIneo的纯培养。用酶切和Southern印迹杂交证明,neo基因整合于AcNPV基因组的p10基因位相。用重组病毒感染昆虫细胞,不同时间取样提取RNA并进行杂交,结果表明neo基因在受染细胞内从早期到晚期都可发生转录。 相似文献
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来源于假单胞杆菌的邻苯二酚氧化酶结构基因与质粒四环素抗性基因的启动子相拼接构成的融合基因,不仅能在大肠杆菌中表达,而且也能在根癌农杆菌中表达。带有这融合基因作为标记的重组质粒pBZ 731,具有EcoR Ⅰ,Hind Ⅲ,BamH Ⅰ,Kpn Ⅰ,Hpa Ⅰ等多个单一的酶切位点,因而可作为常规的基因载体。重组质粒pBZ 732还可作为中间载体将外源基因引入植物基因工程载体pGV 3850,利用pBZ731和pBZ 732可以研究任何其它来源的启动子是否能在根癌农杆菌中发挥作用。以pBZ731和pBZ 732作为基因载体、检测方便而且极其迅速。 相似文献
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巴斯德毕赤酵母表达体系研究及进展 总被引:29,自引:0,他引:29
毕赤酵母表达体系是近十年发展起来的真核表达体系。作为一种成功的表达体系,有好几种因素促进了它的快速推广。主要包括如下几方面: 毕赤酵母醇氧化酶(Alcohol oxidase,AOXl)基因的强启动子特别适合于外源基因的调控表达;毕赤酵母基因操作技术和酿酒酵母Sccharomyces cerevisiae非常相似,后者是现代分子生物学中研究得透彻和应用很广的酵母表达体系;毕赤酵母对需氧生长有强的偏好,这一生理学特性使得它既能高密度发酵生长,亦有利于工业放大生产;毕赤酵母自身分泌到培养基中的… 相似文献
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本工作组建了一个含Tac启动子(promoter)的表达载体质粒pTL。pTL带有Trp-35区、Lac-10区及两个终止区(t_1t_2),并带有EcoRⅠ、SmaⅠ、BamHⅠ、SalⅠ、PstI及HindⅢ等单一酶切点,可以在这些切点中插入各种基因片段,由Tac启动子促进基因的表达。在Ap抗性基因中无PstⅠ切点,故在PstⅠ切点插入外源基因后,Ap抗性不受影响。用pTL表达人干扰素αD基因,获得较高的产率,每立升菌液约得8.2×10~7单位,相当于每立升4mg干扰素。 相似文献
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昆虫核型多角体病毒(NPV)P10基因属于晚期基因,为强启动子所控制,又是病毒复制所非必需的基因。我们对前报的家蚕核型多角体病毒(BmNPV)P10基因,应用PCR技术进行ATG区定点突变,在ATG被突变的同时形成一个BglⅡ酶切位点,得到一个不含ATG的BmNPV P10基因启动子。将长为230bp的经突变后的BmNPV P10基因5’端(包括启动子所有特征)片段克隆进pMMTV·CAT质粒中,构建成一个CAT基因在BmNPV P10基因启动子控制下的pBmPl0·CAT瞬间表达质粒。该质粒通过转染进入经野生型BmNPV感染的BmN细胞中,CAT得以表达。证明BmNPV P10启动子是比较强的启动子,可以在BmN细胞表达外源基因,具备了作为表达载体启动子的特性。 相似文献