P277多肽融合热休克蛋白65提高抗1型糖尿病的作用

为了提高P277肽抗1型糖尿病的作用, 把P277肽融合在卡介苗热休克蛋白65的C端, 构建了pET28a- HSP65-P277高效表达载体, 在大肠杆菌中高效可溶性表达。利用硫酸铵分级沉淀、阴离子交换柱层析分离纯化了融合蛋白HSP65-P277。使用HSP65-P277在没有任何佐剂存在的情况下免疫非肥胖性糖尿病(NOD)小鼠, 通过三次腹腔注射, 每月收集被免疫动物的血清, 血糖浓度用自动生化分析仪测定。结果显示HSP65-P277免疫组小鼠血糖平均值及糖尿病的累积发病率和其余组相比均有显著差异(P<0.01), 融合蛋白HSP65-P277抗NOD小鼠糖尿病的作用显著高于单独的P277和HSP65。为进一步开发能用于临床的1型糖尿病疫苗提供了良好的设计思路, HSP65-P277极有可能进一步发展成为新的抗I型糖尿病的疫苗。     

鸡痘病毒载体启动子的优化

要提高外源基因在鸡痘病毒（ＦＰＶ）载体的表达量,必须使用强启动子来控制表达。为构建较强的启动子组合,根据痘苗病毒天然启动子Ｐ７．５的结构,人工合成４条寡核苷酸,形成一个早期启动子和一个晚期启动子,其首尾可相互连接。利用分子生物学常用实验方法把合成的启动子进行不同组合,最终形成１０个较有代表性的启动子组合ＰＳ１￣１０。在其下游插入大肠杆菌β－半乳糖苷酸基因ＬａｃＺ,并进一步构建成鸡痘病毒转移载体ｐＦ     

舌下含服卡托普利用于院前急救高血压急症的临床疗效及对患者血清sCD40L、sPECAM-1、PDGF-BB水平的影响

目的:探讨舌下含服卡托普利用于院前急救高血压急症的临床疗效及对患者血清可溶性CD40L(sCD40L)、可溶性血小板内皮细胞黏附分子1(sPECAM-1)、血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)水平的影响。方法:选择2015年5月到2017年5月我院院前急救高血压急症患者65例作为研究对象,按照随机数表法分为观察组(n=35)和对照组(n=30)。对照组给予硝苯地平舌下含化治疗,观察组采用舌下含服卡托普利治疗。比较两组治疗后的疗效,治疗前后血清s CD40L、sPECAM-1、PDGF-BB水平、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、心率(HR)的变化及不良反应的发生情况。结果:治疗后,观察组临床疗效总有效率为94.29%,显著高于对照组(73.33%,P0.05);两组血清s CD40L、sPECAM-1、PDGF-BB、SBP、DBP及HR水平均较治疗前明显下降,且观察组以上指标均显著低于对照组(P0.05);观察组患者不良反应发生率为17.14%,明显低于对照组(56.67%,P0.05)。结论:舌下含服卡托普利用于院前急救高血压急症患者的临床效果显著优于硝苯地平舌下含化治疗,其可更有效改善患者血清sCD40L、sPECAM-1、PDGF-BB水平。     

小鼠HSP60基因的克隆与表达条件的优化

目的:克隆小鼠热休克蛋白60(HSP60)基因,在大肠杆菌中表达,并进一步对其表达条件进行优化.方法:采用RTPCR技术克隆出非肥胖性糖尿病(NOD)小鼠HSP60的cDNA序列.构建重组表达载体pET28a- HSP60,以其转化大肠杆菌感受态细胞BL21( DE3),在不同的菌体浓度、不同浓度的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)、不同诱导时间以及不同温度条件下诱导,检测重组蛋白的表达情况.结果:获得一个含有1 721bp的cDNA的片段,重组蛋白HSP60在E.coli BL -21 (DE3)中的最佳表达条件是菌体密度A600nm为0.6,诱导时间为5h,诱导物(IPTG)浓度为4mmol/L,诱导温度为35℃,重组蛋白大小约为60kD.结论:成功克隆了小鼠HSP60基因,并在大肠杆菌中获得高效表达,为重组蛋白的分离纯化及进一步研究其生物学功能奠定了基础.     

黄喉拟水龟摩氏摩根菌的分离鉴定及药敏试验

<正>黄喉拟水龟(Mauremys mutica),俗称石龟、石金钱龟、黄板龟等,为龟科拟水龟属,主要分布于中国江苏、安徽、福建以及越南、日本等。黄喉拟水龟具有食用、药用和观赏价值,近年来野生资源日趋减少,人工养殖发展迅速。细菌性病原感染是黄喉拟水龟养殖过程中常见疾病,目前已报道黏质沙雷氏菌(Serratia marcescens)[1]、松鼠葡萄球菌(Staphylococcus sciuri)[2]、摩氏摩根菌(Morganella morganii)[3]、嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophmomas     

L-天冬酰胺酶表面呈现对P277肽免疫原性及抗NOD小鼠糖尿病作用的影响

将P277多肽融合在 Ｌ-天冬酰胺酶的C端,中间引入破伤毒素肽(TTP),重组嵌合酶AnsB-TTP-P277能以可溶性蛋白的形式表达于大肠杆菌周质内,且能保持大约80%的天然酶催化活力.用纯化的嵌合酶腹腔注射非肥胖性(NOD)小鼠, 可成功诱导小鼠体内产生高水平抗P277抗体.研究表明,P277肽可呈现于 Ｌ-天冬酰胺酶表面,有效地克服单独P277的弱免疫原性,激发机体产生较强烈的免疫反应.小鼠胰腺病理学切片也显示：重组嵌合酶AnsB-TTP-P277和单纯P277肽相比,能更有效地抑制NOD小鼠糖尿病的发生.     

嗜水气单胞菌转录调控蛋白基因的克隆与序列分析

根据嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)转录调控蛋白(AhyR)基因序列设计特异性引物,采用PCR方法克隆嗜水气单胞菌Zf1菌株AhyR基因,测序目的基因大小为1 063 bp。对AhyR基因编码蛋白进行生物信息学分析,推导其开放阅读框(ORF)编码260 aa,含有自体诱导物结合域(18-168 aa)、LuxR型螺旋-转角-螺旋(HTH)DNA结合结构域(176-241 aa),以及13个磷酸化位点(15S、30T、62S、144S、145S、156S、161Y、173S、184T、188T、200S、227S、231Y)。AhyR蛋白三级结构与模板(PDB:3SZT_A)相似性达28.40%,结果显示LuxR型螺旋-转角-螺旋结构域主要以α螺旋分布在C端外侧,这与拉马钱德兰图(Ramach andran plot)检测分析AhyR蛋白空间结构基本一致。     

猪源沙门氏菌耐药性及耐药基因的分析

为研究猪源沙门氏菌耐药性与耐药基因的关系,采用K-B法测定从猪肉中分离的60株沙门氏菌对10种抗菌药物的敏感性,并通过PCR技术对沙门氏菌的耐药基因进行检测。结果显示,沙门氏菌对环丙沙星的耐药率最高,达98.3%,对复方新诺明、阿米卡星的耐药率在75%左右,而对庆大霉素、氯霉素、诺氟沙星及壮观霉素类药物比较敏感,敏感率达45%以上。耐药基因的检测结果显示,除了tetB、tetC、tetG、cat1和Aaca(3)-Ia这5种耐药基因没有扩增出来,tetA、parC、gyrA、sulI、sulII、floR和aadA1 7种耐药基因的检测率分别为53.3%、98.3%、66.7%、46.7%、33.3%、48.3%和66.3%。对已成功分离的沙门氏菌中几种常见的耐药基因进行克隆及特性分析,得知沙门氏菌的耐药基因可以决定细菌的耐药表型。     

马立克氏病病毒Rispens株B抗原基因的克隆及其重组鸡痘病毒的构建

马立克氏病病毒（Ｍａｒｅｋ’ｓＤｉｓｅａｓｅＶｉｒｕｓ,ＭＤＶ）是马立克氏病（ＭＤ）的病原,是第一个能用实验证明具有致肿瘤作用的疱疹病毒,也是研究病毒性肿瘤特别是疱疹病毒肿瘤的理想的实验模型。ＭＤ还是第一个广泛使用疫苗预防的肿瘤性病毒病。应用免疫扩散...     

奥拉西坦联合高压氧治疗重度一氧化碳中毒的疗效及对血清LPA、H-FABP及认知功能的影响

目的:探讨奥拉西坦联合高压氧治疗重度一氧化碳中毒的疗效及对血清溶血磷脂酸(LPA)、心型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)及认知功能的影响。方法:选择2016年1月-2018年1月我院收治的重度一氧化碳中毒患者90例进行研究,以随机数表法分为观察组(n=48)和对照组(n=42)。对照组给予高压氧治疗,观察组在对照组的基础上加用奥拉西坦治疗。比较两组患者的临床疗效、血清LPA、H-FABP、认知能力、住院时间、迟发性脑病发生率。结果:两组总有效率分别为93.75%、76.19%,差异显著(P0.05);治疗前,两组血清LPA、H-FABP水平无显著性差异;治疗后,两组血清LPA、H-FABP均显著下降,且观察组血清LPA、H-FAB P水平低于对照组,(P0.05);治疗前,两组患者认知功能无显著性差异;治疗后,两组认知功能较治疗前均显著升高(P0.05),且观察组定向力、记忆力、注意力、语言能力水平均明显高于对照组(P0.05);观察组患者住院时间、迟发性脑病发生率均显著低于对照组,差异显著(P0.05)。结论:在重度一氧化碳中毒患者中应用奥拉西坦联合高压氧效果显著,可有效改善患者血清LPA、H-FABP水平及认知功能。