HES4抑制急性T淋巴细胞白血病细胞系Jurkat对阿糖胞苷的敏感性

摘要 目的：研究hes家族bHLH转录因子4（HES4）与急性T淋巴细胞白血病（T-ALL）细胞系Jurkat对化疗药物阿糖胞苷（Ara-C）的敏感性作用。方法：构建Lenti-pCDH-HES4-puro质粒,包装慢病毒感染Jurkat细胞,感染空载体Lenti-pCDH-puro为对照组,puromycin筛选阳性细胞,Realtime-PCR检测转录水平HES4过表达情况,CCK8法检测Jurkat对Ara-C敏感性,Ara-C终浓度为0.1、1、10、100、1000、10000 nmol?L^-1;设计3对针对于HES4的特异sgRNA序列,构建LentiGuide-sgRNA1-puro、LentiGuide-sgRNA2-Puro、LentiGuide-sgRNA3-puro质粒,LentiGuide-puro空载体为对照组,包装慢病毒感染Jurkat细胞,puromycin筛选,提取基因组DNA,PCR扩增sgRNA的靶序列,一代测序检测HES4的敲除效率,CCK8法检测敲除HES4后Jurkat对Ara-C敏感性,Ara-C终浓度为0.1、1、10、100、1000、10000 nmol?L^-1。结果：与对照组相比,HES4在Jurkat中过表达（2.37 ± 0.09）倍（P < 0.001）,在Ara-C为1 nmol?L-1、100 nmol?L^-1 浓度下,过表达HES4使Jurkat对Ara-C的药物敏感性降低（P值分别小于0.01、0.05）; sgRNA1、sgRNA 2、sgRNA 3敲除分值分别为83、71、63,其中sgRNA1的敲除效果最佳,在Ara-C为1000 nmol?L^-1浓度下,敲除HES4促进Jurkat对Ara-C的敏感性（P < 0.05）,3条sgRNAs之间无明显区别（P > 0.05）。结论：HES4抑制T-ALL细胞系Jurkat对Ara-C的敏感性,为T-ALL化疗耐受的机制研究提供指导。     

漏芦醇提取物对小鼠乳腺上皮细胞氧化损伤的缓解作用

摘要 目的：探讨漏芦乙醇提取物（RUEE）对脂多糖（LPS）诱导的小鼠乳腺上皮细胞氧化损伤发挥保护作用。方法：采用体外培养的小鼠乳腺上皮细胞系 HC11 为模型,首先利用MTT法筛选RUEE的最佳作用浓度及检测LPS和RUEE对细胞活力的影响,然后用1 μg?mL^-1 LPS单独处理,20、40、80 μg?mL^-1的RUEE与 1 μg?mL^-1 LPS 共处理 HC11细胞,检测氧化应激相关指标、抗氧化相关基因mRNA和蛋白表达的变化。结果：细胞活力实验确定20、40、80 μg?mL^-1的RUEE作为后续试验的添加浓度。LPS诱导可显著提高HC11细胞内丙二醛（MDA）含量、一氧化氮（NO）水平、一氧化氮合酶（iNOS）活性（P＜0.05）;明显降低超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）、过氧化氢酶（CAT）的活性和总抗氧化能力（T-AOC）（P＜0.05）;显著抑制核因子E2相关因子2（Nrf2）、血红素氧合酶1（HO-1）、NAD(P)H醌氧化还原酶1（NQO1）的mRNA及蛋白表达（P＜0.05）。20、40、80 μg?mL^-1的RUEE预处理后可明显下调LPS诱导的HC11细胞内MDA含量、NO水平及iNOS活性（P＜0.05）;显著提高SOD、GPx、CAT的活性及T-AOC（P＜0.05）;显著上调Nrf2、HO-1、NQO1 mRNA和蛋白表达（P＜0.05）。结论：RUEE可以有效减轻LPS诱导的乳腺上皮细胞氧化损伤,这可能与RUEE能激活乳腺上皮细胞Nrf2进而促进抗氧化基因的表达有关。     

手足口病合并脑炎患儿外周血T淋巴细胞亚群、血清VCAM-1及CRP的表达水平及其检测价值分析

摘要 目的：探讨与分析手足口病（HFMD）合并脑炎患儿外周血T淋巴细胞亚群、血清VCAM-1及CRP的表达水平及其检测价值。方法：2017年4月到2020年10月选择在本院诊治的手足口病合并脑炎患儿42例作为合并组,同期选择手足口病不合并脑炎患儿68例作为对照组,检测两组外周血T淋巴细胞亚群、血清血管细胞粘附分子-1（VCAM-）及C-反应蛋白（CRP）表达水平,并判断检测价值与进行相关性分析。结果：合并组的CD4⁺、CD8⁺T淋巴细胞相对比例都明显少于对照组（P<0.05）。合并组的血清VCAM-1及CRP含量明显高于对照组（P<0.05）。在80例患儿中,Spearsman分析显示CD4⁺、CD8⁺T淋巴细胞相对比例和血清VCAM-1、CRP含量都与手足口病合并脑炎的发生存在相关性（P<0.05）。二分类Logistic回归分析显示CD4⁺、CD8⁺T淋巴细胞相对比例和血清VCAM-1、CRP含量都为导致手足口病合并脑炎发生的重要因素（P<0.05）。结论：手足口病合并脑炎患儿多伴随有外周血T淋巴细胞亚群异常与血清VCAM-1、CRP的高表达,CD4⁺、CD8⁺T淋巴细胞相对比例、血清VCAM-1、CRP含量都为导致手足口病合并脑炎发生的重要因素。     

齐墩果酸对APP/PS-1双转基因AD小鼠的神经保护作用研究

摘要 目的：研究齐墩果酸（Oleanolic Acid，OA）对APP/PS-1双转基因阿尔茨海默病（Alzheimer''s disease，AD）小鼠模型神经保护作用及机制。方法：选取6月龄APP/PS-1雄性小鼠21只，随机分为模型组（0.5% CMC-Na）、阳性组（多奈哌齐组，0.7 mg?kg^-1）、齐墩果酸组（10 mg?kg^-1）每组7只，6月龄同背景SPF级C57BL/6小鼠7只为对照组。灌胃8周之后通过Morris水迷宫实验观察小鼠学习记忆能力的改变，HE染色观察神经元细胞形态，ELISA检测血清中Aβ1-42含量；免疫组化检测Aβ_1-42、APP、Iba1蛋白表达情况；Western blot检测APP、Iba1蛋白表达水平。结果：（1）对照组，模型组，阳性组及齐墩果酸组进入有效区域次数分别为7.00±2.09，1.00±0.89，3.67±1.97，4.33±2.50，与模型组相比，对照组，阳性组，齐墩果酸组均有统计学意义（P<0.05）；（2）血清Aβ_1-42含量按上述顺序依次为4.98±0.25，2.50±0.66，4.63±0.73，4.36±0.97，与模型组相比，对照组，阳性组，齐墩果酸组均有统计学意义（P<0.05）；（3）免疫组化结果显示与模型组相比，对照组，阳性组，齐墩果酸组Aβ_1-42、APP、Iba1蛋白阳性细胞数减少；（4）WB结果：对照组，模型组，阳性组，齐墩果酸组APP蛋白相对表达量分别为0.52±0.17，1.38±0.35，0.89±0.25，0.93±0.27；这四组的IBA1蛋白相对表达量分别为0.98±0.34，1.79±0.74，1.06±0.61，0.88±0.49，与模型组相比，野生对照组，阳性组，齐墩果酸组APP、IBA1蛋白相对含量有统计学意义（P<0.05）。结论：齐墩果酸组可以改善APP/PS-1模型小鼠记忆力及认知功能，降低海马神经元的损伤，并通过下调Aβ_1-42、APP、Iba1蛋白的表达水平来发挥保护神经作用。     

数字减影血管造影引导下肝动脉化疗栓塞对肝癌患者肝功能、细胞免疫功能及肿瘤标志物的影响

摘要 目的：探讨数字减影血管造影（DSA）引导下肝动脉化疗栓塞（TACE）对肝癌患者肝功能、细胞免疫功能及肿瘤标志物的影响。方法：随机选取2021年1月～2022年1月来我院就诊的行DSA引导下TACE化疗的肝癌患者50例为研究组,另随机选取同期行常规治疗的肝癌患者50例为对照组,对比两组临床总有效率、肝功能、细胞免疫功能及肿瘤标志物和不良反应情况。结果：研究组的临床总有效率为56.00%（28/50）高于对照组的34.00%（17/50）,差异有统计学意义（P<0.05）。两组治疗结束后谷草转氨酶（AST）和谷丙转氨酶（ALT）升高,但研究组低于对照组（P<0.05）。两组治疗结束后CD8⁺升高,但研究组低于对照组（P<0.05）;CD4⁺、CD4⁺/CD8⁺、CD3⁺均下降,但研究组高于对照组（P<0.05）。两组治疗结束后甲胎蛋白（AFP）、糖链抗原（CA）242、CA724、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3（GPC3）下降,且研究组低于对照组（P<0.05）。对照组（30.00%）、研究组（24.00%）的不良反应发生率组间对比无差异（P>0.05）。结论：DSA引导下TACE化疗治疗肝癌患者,疗效可靠,可有效阻止疾病进展,同时减轻化疗所致的肝损伤和细胞免疫功能损伤。     

Chk2在Bmi1缺失所致的肾脏早衰和纤维化中的作用和机制研究

摘要 目的：探究细胞周期检测点激酶2（cell-cycle checkpoint kinase 2，Chk2）在B淋巴瘤Mo-MLV插入区1（B cell-specific MLV integration site-1，Bmi1）缺失所致的肾脏早衰和纤维化中的作用及可能的机制。方法：取5周龄WT、Bmi1^-/-、Chk2^-/-、Bmi1^-/-Chk2^-/-小鼠肾脏，采用HE染色观察肾脏结构变化，采用免疫荧光和Masson染色观察肾脏纤维化情况，采用衰老相关β半乳糖苷酶（Senescence-associated β-galactosidase，SA-β-gal）染色观察肾脏衰老情况，采用免疫组化染色和western blot观察肾脏超氧化物歧化酶1（Superoxide Dismutase 1，SOD1）、超氧化物歧化酶2（Superoxide Dismutase 2，SOD2）表达水平和定位。从5周龄WT、Bmi1^-/-、Chk2^-/-、Bmi1^-/-Chk2^-/-小鼠肾脏皮质中提取和分离原代肾小管上皮细胞，采用免疫荧光和western blot检测其SOD1、SOD2表达水平。结果：与WT小鼠肾脏组织相比，Bmi1^-/-小鼠肾脏组织表现为体积变小、肾脏皮质厚度减少、肾小球数量减少，β-gal活性增加，SOD1和SOD2水平降低；与Bmi1^-/-小鼠肾脏相比，Bmi1^-/-Chk2^-/-小鼠肾脏体积增大、肾脏皮质厚度增加，肾小球数量增多，β-gal活性降低，SOD1和SOD2水平增加。与WT小鼠肾脏皮质原代肾小管上皮细胞相比，Bmi1^-/-小鼠肾脏皮质原代肾小管上皮细胞中SOD1和SOD2水平；与Bmi1^-/-小鼠肾脏皮质原代肾小管上皮细胞相比，Bmi1^-/-Chk2^-/-小鼠肾脏皮质原代肾小管上皮细胞中抗氧化指标SOD1和SOD2增加。结论：Chk2通过抑制肾小管上皮细胞的抗氧化能力促进Bmi1缺失所致的肾脏早衰和纤维化。     

右归饮加减方联合"固本通络"针法对类风湿性关节炎患者血清炎性因子和细胞免疫功能的影响

摘要 目的：探讨右归饮加减方联合"固本通络"针法对类风湿性关节炎患者血清炎性因子和细胞免疫功能的影响。方法：按照随机数表法将我院于2018年1月至2020年1月收治的105例患者分为对照组（n=52）和研究组（n=53）。对照组给予西医常规治疗，研究组在其基础上给予右归饮加减方联合"固本通络"针法治疗，两组均连续治疗3个月。统计两组的临床总有效率，分别于治疗前后测定DAS-28积分和症状体征指数积分，于治疗前后检测患者类风湿因子（RF）、红细胞沉降率（ESR）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、C反应蛋白（CRP）、白细胞介素-6（IL-6）、白细胞介素-1（IL-1）水平及外周血CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺水平。结果：研究组的临床总有效率明显比对照组高（P<0.05）。两组治疗后DAS-28积分、症状体征指数积分、CRP、RF、ESR、CD8⁺及血清TNF-α、IL-1及IL-6水平均明显小于治疗前（P<0.05），CD3⁺、CD4⁺均明显大于治疗前（P<0.05），研究组治疗后症状体征指数积分、DAS-28积分、RF、CRP、ESR、CD8⁺及血清TNF-α、IL-1及IL-6水平均明显小于对照组（P<0.05），CD3⁺、CD4⁺均明显大于对照组（P<0.05）。结论：右归饮加减方联合"固本通络"针法治疗类风湿性关节炎的疗效明确，有助于改善细胞免疫功能、抑制炎症反应及减轻临床症状。     

黄芪多糖基于PI3K/Akt通路对食管癌大鼠抑瘤作用及免疫功能的影响

摘要 目的：探究黄芪多糖（APS）对食管癌（EPC）模型大鼠的抑瘤作用、免疫功能及磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路的影响。方法：选取6周龄SPF级健康SD大鼠50只,随机分为模型组(M组)、顺铂组（S组）、黄芪多糖低剂量组（APSL）、黄芪多糖中剂量组（APSM）、黄芪多糖高剂量组（APSH）,每组10只。通过移植人食管癌Eca109细胞建立EPC模型,分别给予3 mg/kg顺铂和100、200、400 mg/kg的APS干预。测量各组大鼠肿瘤体积和肿瘤质量,计算肿瘤生长抑制率、胸腺指数和脾指数,HE染色观察肿瘤组织形态学,采用流式细胞仪检测外周血CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺T淋巴细胞群,Western blot测定各组肿瘤组织中PI3K和Akt蛋白的相对表达。结果：经干预后,S组和各APS组大鼠肿瘤体积和肿瘤质量均显著小于M组（P＜0.05）;S组和APSH组肿瘤体积和肿瘤质量相显著小于APSM和APSL组（P＜0.05）;APSM组大鼠肿瘤体积和肿瘤质量显著小于APSL组（P＜0.05）;APSH、APSM和APSL组的抑瘤率分别为45.59%、32.35%和17.65%。S组大鼠的胸腺指数和脾指数均显著低于M组（P＜0.05）;各APS组大鼠的胸腺指数和脾指数均显著高于S组（P＜0.05）;APSH和APSM组大鼠胸腺指数和脾指数均显著高于M组（P＜0.05）。各APS组大鼠CD3⁺、CD4⁺和CD4⁺/CD8⁺均显著高于S组和M组,而CD8+均显著低于S组和M组（P＜0.05）;APSH、APSM和APSL组之间两两相比亦均有统计学差异（P＜0.05）。S组和各APS组PI3K/Akt信号通路蛋白的相对表达均显著低于M组（P＜0.05）;APSH、APSM和APSL组之间两两相比亦均有统计学差异（P＜0.05）。结论：APS可通过调控PI3K/Akt 信号通路和改善免疫功能,发挥对EPC的抑制作用,为临床治疗EPC提供了新的思路和理论依据。     

臭椿生物碱canthin-6-one对小鼠镇静催眠作用的研究

摘要 目的：研究臭椿生物碱canthin-6-one对小鼠的镇静催眠作用。方法：选昆明小鼠随机分为空白组、地西泮阳性药物组、canthin-6-one低、中、高给药组（5、10、20 mg?kg^-1），采用阈上剂量和阈下剂量戊巴比妥钠诱导小鼠睡眠，记录入睡小鼠比例、睡眠潜伏期和睡眠持续时间。此外，酶联免疫法测定小鼠脑组织中5-HT、NE、DA和GABA含量。结果：中、高剂量canthin-6-one可使小鼠的站立次数和自主活动次数均明显减少（P＜0.05），可使阈上剂量戊巴比妥钠诱导的小鼠的睡眠潜伏期缩短（P＜0.05）；各剂量组可使阈下剂量戊巴比妥钠诱导的小鼠入睡率提高（P＜0.05）。此外，中、高剂量canthin-6-one也可降低小鼠脑组织中5-HT和NE含量，增加GABA含量（P＜0.05），对DA的含量有影响，但无统计学意义（P＞0.05）。结论：Canthin-6-one有明显的协同戊巴比妥钠改善睡眠作用，其作用与相关神经递质（5-HT、NE、GABA）具有密切关系。     

来源于中国南海的微生物新种乙醇速生杆菌(Celeribacter ethanolicus)多相分类研究

【目的】研究来源于南海海水的一株速生杆菌属菌株NH195^T 的多相分类。【方法】采用表型、基因型和化学分类方法,并综合系统发育关系结果,分析菌株NH195^T 的分类学地位。【结果】菌株NH195^T 是一株革兰氏阴性、好氧、杆状、无运动性细菌;能积累Poly-β-hydroxybutyrate (PHB);能在0.5%-10.0% (质量体积比) NaCl 浓度,pH 5.0-9.0 和20-40 ℃ 条件下生长,最适NaCl 生长浓度为1.0%-3.0%;氧化酶、触酶和脲酶反应结果阳性。菌株NH195^T 主要呼吸醌为Q-10,主要脂肪酸为C_18:1ω7c、C_18:1ω6c 和11 methyl C_18:1ω7c,主要极性脂为磷脂酰胆碱、磷脂酰甘油、双磷脂酰甘油、一个未知的氨基脂和两个未知脂。基因组G+C 含量为61.3 mol%。基于16S rRNA 基因的系统发育结果显示,菌株NH195^T 隶属于速生杆菌属;其与速生杆菌属标准菌株的16S rRNA 基因相似性范围为94.4%-97.7%。菌株NH195^T 与速生杆菌属标准菌株C. halophilus ZXM137^T 和C. indicus P73^T 的平均核苷酸一致性(ANI)分别为78.6%和78.0%;基于基因组数据计算所得的DNA 杂交同源率分别为26.1%和23.0%。【结论】基于表型和基因型结果,菌株NH195^T 代表了速生杆菌属一个新物种,命名为Celeribacter ethanolicus,标准菌株为NH195^T (CGMCC 1.15406^T=JCM 31095^T)。     

A Unique Protease Cleavage Site Predicted in the Spike Protein of the Novel Pneumonia Coronavirus (2019-nCoV) Potentially Related to Viral Transmissibility

正Dear Editor,In December 2019, a novel human coronavirus caused an epidemic of severe pneumonia(Coronavirus Disease 2019,COVID-19) in Wuhan, Hubei, China(Wu et al. 2020; Zhu et al. 2020). So far, this virus has spread to all areas of China and even to other countries. The epidemic has caused 67,102 confirmed infections with 1526 fatal cases     

Curcuminoids as inhibitors of thioredoxin reductase: A receptor based pharmacophore study with distance mapping of the active site

Curcumin is the yellow pigment of turmeric that interacts irreversibly forming an adduct with thioredoxin reductase (TrxR), an enzyme responsible for redox control of cell and defence against oxidative stress. Docking at both the active sites of TrxR was performed to compare the potency of three naturally occurring curcuminoids, namely curcumin, demethoxy curcumin and bis-demethoxy curcumin. Results show that active sites of TrxR occur at the junction of E and F chains. Volume and area of both cavities is predicted. It has been concluded by distance mapping of the most active conformations that Se atom of catalytic residue SeCYS498, is at a distance of 3.56 from C13 of demethoxy curcumin at the E chain active site, whereas C13 carbon atom forms adduct with Se atom of SeCys 498. We report that at least one methoxy group in curcuminoids is necessary for interation with catalytic residues of thioredoxin. Pharmacophore of both active sites of the TrxR receptor for curcumin and demethoxy curcumin molecules has been drawn and proposed for design and synthesis of most probable potent antiproliferative synthetic drugs.     

Comparative morphology of the carpel in the Liliaceae: Hewardieae, Petrosavieae, and Tricyrteae

The young pistils in the melanthioid tribes, Hewardieae, Petrosavieae and Tricyrteae, are uniformly tricarpellate and syncarpous. They lack raphide idioblasts. All are multiovulate, with bitegmic ovules. The Petrosavieae are marked by the presence of septal glands and incomplete syncarpy. Tepals and stamens adhere to the ovary in the Hewardieae and the Petrosavieae but not in the Tricyrteae. Two vascular bundles occur in the stamens of the Hewartlieae and Tricyrtis latifolia. Ventral bundles in the upper part of the ovary of the Hewardieae are continuous with compound septal bundles and placental bundles in the lower part. Putative ventral bundles occur in the alternate position in the Tricyrteae and putative placental bundles in the opposite. position in the Petrosavieae. The dichtomously branched stigma in each carpel of the Tricyrteae is supplied by a bifurcated dorsal bundle.     

Enterovirus 71 3C proteolytically processes the histone H3 N-terminal tail during infection

Highlights
1. The N-terminal tail of histone H3 is specifically cleaved during EV71 infection.
2. Viral protease 3C is identified as a protease responsible for proteolytically processing the N-terminal H3 tail.
3. Our finding reveals a new epigenetic regulatory mechanism for Enterovirus 71 in virus-host interactions.     

Detection of EBV and HHV6 in the Brain Tissue of Patients with Rasmussen’s Encephalitis

Rasmussen’s encephalitis (RE) is a rare pediatric neurological disorder, and the exact etiology is not clear. Viral infection may be involved in the pathogenesis of RE, but conflicting results have reported. In this study, we evaluated the expression of both Epstein-Barr virus (EBV) and human herpes virus (HHV) 6 antigens in brain sections from 30 patients with RE and 16 control individuals by immunohistochemistry. In the RE group, EBV and HHV6 antigens were detected in 56.7% (17/30) and 50% (15/30) of individuals, respectively. In contrast, no detectable EBV and HHV6 antigen expression was found in brain tissues of the control group. The co-expression of EBV and HHV6 was detected in 20.0% (6/30) of individuals. In particular, a 4-year-old boy had a typical clinical course, including a medical history of viral encephalitis, intractable epilepsy, and hemispheric atrophy. The co-expression of EBV and HHV6 was detected in neurons and astrocytes in the brain tissue, accompanied by a high frequency of CD8⁺ T cells. Our results suggest that EBV and HHV6 infection and the activation of CD8⁺ T cells are involved in the pathogenesis of RE.     

Perinatal Vertical Transmission of Chikungunya Virus in Ruili,a Town on the Border between China and Myanmar

正Dear Editor,Chikungunya virus (CHIKV), an arbovirus in the family of Togaviridae, genus Alphavirus, is transmitted by the A.aegyptii or A. albopictus mosquito, and causes disease in humans characterized by fever, rash, and arthralgia (Silva and Dermody 2017; Suhrbier 2019). It was first reported in 1953 in Tanzania, and caused only a few outbreaks and sporadic cases in Africa and Asia in last century. However, in the epidemic in 2004, CHIKV acquired mutations that conferred enhanced transmission by the A. albopictus mosquito(Schuffenecker et al. 2006). Since then, it has successively caused outbreaks in Africa, the Indian Ocean, South East Asia, the South America, and Europe (Zeller et al. 2016).     

Development of a Novel Reverse Transcription Loop-Mediated Isothermal Amplification Method for Rapid Detection of SARS-CoV-2

In conclusion, the novel visual RT-LAMP assay is a simple, rapid, and sensitive approach for detection of SARS-CoV-2, and it is ready for application in primary care and community hospitals or health care centers, and even patients' own houses in response to the current SARS-CoV-2 epidemic because the assay does not require sophisticated equipment and skilled personnel. Furthermore, it is also ready to be used in fields for screening samples from wild animals and environments to facilitate the identification of potential intermediate hosts that mediate the cross-species transmission of SARS-CoV-2 from bats to humans.