靶向HPV16-E6的siRNA对宫颈癌CaSki细胞的抑制作用

以RNA干扰技术为手段,HPV编码的癌蛋白E6为靶标．探讨靶向HPV16-E6的siRNA对宫颈癌细胞生物学行为的影响,并试图阐明该实验的临床意义．构建靶向HPV16-E6的siRNA表达载体,应用体外转染试剂转染HPV16-E6阳性的宫颈癌CaSki细胞．以RT—PCR检测CaSki细胞中E6蛋白的mRNA的表达．借助细胞色素c测定来分析细胞凋亡相关分子的表达和活性．从而研究靶向HPV16-E6的siRNA诱导细胞凋亡的分子机制．RT．PCR检测结果表明,将靶向HPV16-E6的siRNA的表达载体瞬时转染到HPV16-E6阳性的CaSki细胞后,其所舍E6蛋白质和mRNA的表达下调;Westernblotting栓出抑凋亡蛋白Bcl．2的表达亦告下调;细胞色素C释放实验结果显示,HPV16-E6siRNA能够诱导细胞色素c从线粒体释放到细胞浆中。从而诱导细胞凋亡．靶向HPV16-E6的siRNA能够有效抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡．靶向HPV16-E6的siRNA为研究重要致瘤蛋白HPV16-E的功能开辟了新途径,给HPV16-E6阳性肿瘤的靶向基因治疗提供新的实验依据．并探索了HPV感染及宫颈癌的新基因疗法．     

多媒体课件在医学细胞生物学教学中的应用体会

通过教学实践证明医学细胞生物学多媒体课件的应用不仅可以激发学生学习兴趣、提高学生学习的主动性、强化学生的理解能力,还可以使学生轻松、准确掌握所学的内容,是提高教学质量的有效途径。并针对在多媒体教学过程中仍存在的一些问题。提出行之有效的解决之道。     

苯中毒的代谢障碍

苯是广泛采用的工业溶剂,可由吸入、皮肤接触和摄食等途径进入人体。如长期接触苯,就会引起血中毒（ｈｅｍａｔｏｘｉｃｉｔｙ）与造血功能的进行性障碍,甚至发展成各类血细胞减少,再生障碍性贫血（再障）与白血病。我国最高容许苯浓度应低于４０ｍｇ／ｍ３［２］。１．诱发苯中毒的代谢机制已有不少证据表明,苯必须先经代谢活化才具有毒性作用。早在１９５３年,Ｐａｒｋｅ与Ｗｉｌｌｉａｍ就从体内实验分离出苯的大多数代谢物。苯的代谢途径至少不止一条,而它引起毒性的病理生化过程也可能是多因素的。近来提出了两种假说以解释苯毒…     

再障红细胞的膜化学组成改变与代谢障碍机理

再生障碍性贫血（AA）严重危害人类健康．为阐明患者造血干细胞与骨髓微环境受损的病理生化机理,多年来从多条途径进行了探索．1986～2001年,研究组从临床生化与实验血液学的角度,较系统地研究了AA患者与AA大、小鼠模型红细胞的膜化学组成改变与代谢障碍．现就所获结果扼要作一综述．     

关于几个生化名词的汉译

近两年浏览国外生化与生物医学文献 ,见有几个较生疏的生化名词 ,现列出查阅到或自行试译的名词如下 ,并简介其涵义 ,以与同行商榷。( 1 )共济蛋白 (ｆｒａｔａｘｉｎ)　　Ｆｒｉｅｄｒｅｉｃｈ共济失调 (Ｆｒｉｅｄｒｅｉｃｈ′ｓａｔａｘｉａ)是一种最常见的遗传性共济失调 ,发病于幼年或少年 ,表现为脊髓的背侧及外侧硬化 ,每伴有葡萄糖代谢的紊乱 ,属常染色体隐性疾病 ,是由于一种线粒体蛋白———共济蛋白的合成降低所致。共济蛋白由雌性染色体上Ｘ 2 5基因编码 ,Ｘ 2 5的内含子 1中ＧＡＡ重复序列的纯合子表达会抑制该蛋白的正常合成…     

离子对反相HPLC测定小鼠骨髓BFU-E、CFU-E中PRPP合成酶活性

采用离子对反相高效液相色谱法 ( IPr HPLC)的单液等度洗脱 ,测定了小鼠骨髓红系爆增性集落形成单位 ( BFU- Es)与红系集落形成单位 ( CFU- Es)的 PRPP合成酶活性 .方法学研究表明 ,加入离子对试剂硫酸氢四丁基铵 ( TBAHS)后 ,ADP谱峰分离完全 ,其反应增加量易于计算 .本法的批内变异系数平均值为 - 2 .30 %～ - 1 .0 6%与 1 .0 6%～ 2 .30 % ,平均相对偏差为 0 .81 %～ 1 .74% ,回收率为 93.9%～ 98.5% ,能达到操作简便、灵敏和准确的要求 .采用本法测得 2 0只正常昆明小鼠的 BFU- E和 CFU- E中该酶活性各为 ( 0 .563± 0 .0 2 7)μmol/( min·g· m L- 1)与 ( 0 .41 6± 0 .0 2 6) μmol/( min·g·m L- 1) .     

离子对反相HPLC测定小鼠骨髓BFU—E,CFU—E中PRPP合成酶活性

采用离子对反相高效液相色谱法（ＩＰｒＨＰＬＣ）的单液等度洗脱,测定了小鼠骨髓红系爆增性集落形成单位（ＢＦＵ－Ｅｓ）与红系集落形成单位（ＣＦＵ－Ｅｓ）的ＰＲＰＰ合成酶活性。方法学研究表明,加入离子对试剂硫酸氢四丁基铵（ＴＢＡＨＳ）后,ＡＤＰ谱峰分离完全,其反应增加量易于计算。本法的批内变异系数平均值为－２．３０％￣－１．０６％与１．０６％￣２．３０％,平均相对偏差为０．８１％￣１．７４％,回收率为９     

HES4抑制急性T淋巴细胞白血病细胞系Jurkat对阿糖胞苷的敏感性

摘要 目的：研究hes家族bHLH转录因子4（HES4）与急性T淋巴细胞白血病（T-ALL）细胞系Jurkat对化疗药物阿糖胞苷（Ara-C）的敏感性作用。方法：构建Lenti-pCDH-HES4-puro质粒,包装慢病毒感染Jurkat细胞,感染空载体Lenti-pCDH-puro为对照组,puromycin筛选阳性细胞,Realtime-PCR检测转录水平HES4过表达情况,CCK8法检测Jurkat对Ara-C敏感性,Ara-C终浓度为0.1、1、10、100、1000、10000 nmol?L^-1;设计3对针对于HES4的特异sgRNA序列,构建LentiGuide-sgRNA1-puro、LentiGuide-sgRNA2-Puro、LentiGuide-sgRNA3-puro质粒,LentiGuide-puro空载体为对照组,包装慢病毒感染Jurkat细胞,puromycin筛选,提取基因组DNA,PCR扩增sgRNA的靶序列,一代测序检测HES4的敲除效率,CCK8法检测敲除HES4后Jurkat对Ara-C敏感性,Ara-C终浓度为0.1、1、10、100、1000、10000 nmol?L^-1。结果：与对照组相比,HES4在Jurkat中过表达（2.37 ± 0.09）倍（P < 0.001）,在Ara-C为1 nmol?L-1、100 nmol?L^-1 浓度下,过表达HES4使Jurkat对Ara-C的药物敏感性降低（P值分别小于0.01、0.05）; sgRNA1、sgRNA 2、sgRNA 3敲除分值分别为83、71、63,其中sgRNA1的敲除效果最佳,在Ara-C为1000 nmol?L^-1浓度下,敲除HES4促进Jurkat对Ara-C的敏感性（P < 0.05）,3条sgRNAs之间无明显区别（P > 0.05）。结论：HES4抑制T-ALL细胞系Jurkat对Ara-C的敏感性,为T-ALL化疗耐受的机制研究提供指导。