肺泡Ⅱ型细胞表皮生长因子和转化生长因子α、β1及其受体表达的研究

分离培养成年大鼠的肺泡Ⅱ型细胞,通过斑点杂交、原位杂交和免疫组织化学染色,研究肺泡Ⅱ型细胞内表皮生长因子（EGF）、转化生长因子α和β1（TGFα、TGFβ1）及其受体基因的表达。结果显示肺泡Ⅱ型细胞可表达EGF、TGFα和TGFβ1,也可表达相应的EGF受体（EGFR）、TGFβ受体Ⅰ型和Ⅱ型（TβRⅠ、TβRⅡ）。表明肺泡Ⅱ型细胞是合成和分泌EGF、TGFα和TGFβ1的细胞之一;细胞凭借其EGFR、TβR的存在,其增殖与分化可能受EGF、TGFα和TGFβ1的旁分泌和自分泌两种途径调控。     

人肝癌细胞与成纤维细胞共育时几种生长因子的表达

本文采用定位细胞培养技术．将人肝癌细胞和成纤维细胞有序地排列在同一容器内。采用过氧化物酶标记链霉卵白素染色法（LSAB法）．观察人肝癌细胞和成纤维细胞表达碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、表皮细胞生长因子（EGF）和转化生长因子β1（TGFβ1）．研究肝癌细胞和成纤维细胞之间的相互调控作用。结果显示,bFGF、EGF和TGFβ1在两类细胞中的表达量随着细胞增殖率的变化也发生着动态变化。在细胞增殖率增高的时相,正性生长因子bFGF、EGF在细胞中的表达量也增高．而负性生长因子TGFβ1的表达量则降低;在细胞增殖率降低的时机．其表达量正好相反。表明肝癌细胞和成纤维细胞共育培养时,自分泌、旁分泌生长因子对细胞的增殖起着近程调控作用。     

嵌合表皮生长因子疫苗E5T-mSEA的设计及抑瘤活性检测

表皮生长因子受体(Epidermal growth factor receptor,EGFR)及其配体在多种肿瘤细胞中高表达,免疫注射表皮生长因子(Epidermal growth factor,EGF)-载体蛋白所产生的抗体能够干扰EGFR与EGF的相互作用,进而抑制肿瘤生长。本实验室设计了EGF和TGFα的嵌合配体E5T,并将具有免疫增强作用的葡萄球菌肠毒素A(Staphylococcal enterotoxin A,SEA)与之融合。融合蛋白在大肠杆菌内表达后,通过金属螯合亲和层析,得到了纯度较高的E5T-mSEA融合蛋白。将E5T-mSEA免疫小鼠,能够产生高滴度的抗体,该抗体能够同时识别EGF和TGFα。将抗E5T-mSEA免疫血清与肿瘤细胞共培养,在1:10的稀释度下能显著抑制EGFR阳性肿瘤细胞的生长,而对EGFR阴性肿瘤细胞293T的生长没有明显影响。     

转化生长因子α

转化生长因子α(transforming growth factor α,TGFα)是50个氨基酸的单链多肽,由160个氨基酸的前体加工而成。由于表皮生长因子(EGF)受体是 TGFα的功能性膜受体,因此,TGFα的许多生物学效应与 EGF 相似。TGFα最主要的功能是通过自分泌机制维持转化细胞的恶性生长。     

转化生长因子

转化生长因子(transforming growth fact-or,简称TGF)最初是指小鼠肉瘤病毒转化3 T3细胞系所产生的肉瘤生长因子。由于其能刺激正常细胞在软琼脂层锚着不依赖性生长,故后被称为TGF。进一步发现TGF包括TGFα和TGFβ。虽然两者名字类似,但结构和功能却彼此截然不同。越来越多的证据表明,TGF除了能使正常细胞转化外,在细胞增殖、生长和分化等基本活动中行使多种重要的调节作用和其他生物学效应。     

转化生长因子β的细胞生物学

无限繁殖是肿瘤细胞区别于正常细胞的主要特征之一。近年来,人们对细胞的生长分化及其调控机制的认识已有了深刻的变化。正常细胞均存在促进(如TGFα)和抑制(如TGFβ)其生长的多肽生长因子,该两种因子的平衡决定着细胞生长的生理或病理性变化。本文将简述转化生长因子β(TGFβ)近年来研究的一些进展。一、TGFβ是一组具有调节功能的多肽目前,已发现的TGFβ有五种亚型:TGFβ_1-TGFβ_5,其氨基酸有95-80%的同源性。TGFβ_1-TGFβ_3,其编码基因分别位于第19、1和14染色体上。TGFβ_1     

大鼠肺纤维化血小板源性生长因子、血小板源性生长因子—受体、转化生长因子—β、转化生长因子—β受体的表达

采用免疫组织化学方法观察实验性大鼠肺纤维化肺组织内转化生长因子（TGF－β）及其受体（TGF－βR）和血小板源性生长因子（PDGF）及其受体（PDGF－R）表达的变化。发现：（1）实验早期（1－3天）,TGF－β主要由单核巨噬细胞为主的炎症细胞所产生;7天以后直至实验结束（28天）,TGF－β阳性细胞主要为增生的间质细胞,TGF－βR的变化与之同步。（2）实验1－7天,病灶内单核巨噬细胞细胞PDGF染色呈强阳性反应,少量间质细胞呈阳性反应;14天以后,病灶内PDGF阳性的单核巨噬细胞减少,阳性间质细胞亦减少。PDGF－R的变化与PDGF相似。结果提示PDGF的主要来源是巨噬细胞,在肺纤维化的早、中期发挥重要作用,而TGF－β主要由间质细胞自身产生,在肺纤维化的中、后期发挥重要作用,促细胞外基质合成,使肺纤维化进行性进展。     

人膀胱癌转化生长因子α的研究

应用Northern印渍杂交和放射免疫分析技术证明了膀胱癌组织和细胞中TGFαmRNA的表达,并发现TPA能提高人膀胱移行上皮癌BIU-87细胞中TCFαmRNA和TGFα活性分子的水平,但对TGFα的功能受体(EGF受体)具有负调节作用。提示TGFα在膀胱肿瘤细胞的恶性增殖过程中起一定作用,蛋白激酶C的激活可能是调节TGFα基因表达的途径之一。     

转化的小鼠肝细胞能表达TGFαmRNA

转化生长因子α(TGFα)可以由许多细胞、尤其是转化细胞产生。细胞转化能启动并维持TGFαmRNA的表达及其多肽产物的生成。TGFα与表皮生长因子(EGF)的受体结合,以自分泌的方式刺激细胞生长。曾有报道,EGF可诱导体外培养正常角化细胞的TGFαmRNA聚集,雌激素对大鼠乳癌细胞也有此种作用,说明     

干扰TGFβRⅠ增加乳腺癌细胞MDA-MB-231对化疗药物的敏感性

转化生长因子β(transforming growth factorβ,TGFβ)与其受体(transforming growth factorβreceptor,TGFβR)结合激活下游信号通路,在肿瘤的发生发展和转移中具有重要意义,且已有迹象表明该通路可能介导肿瘤的化疗耐受.本研究构建了干扰转化生长因子βⅠ型受体(transforming growth factor receptor typeⅠ,TGFβRⅠ)的重组质粒pRNAT-U6.1/TGFβRⅠ-sh1,发现其可在mRNA和蛋白质水平均显著下调TGFβRⅠ的表达,P0.01.后将该干扰质粒转染乳腺癌细胞MCF-7/5Fu、MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-453,建立了稳定的乳腺癌TGFβRⅠ干扰模型;MTS法检测上述4种细胞模型对5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)和紫杉醇(taxol,TAX)的敏感性.结果显示,MCF-7、MCF-7/5Fu和MDA-MB-453细胞在干扰TGFβRⅠ之后对5-FU和TAX敏感性并未发生改变;但是间质表型的MDA-MB-231细胞在干扰TGFβRⅠ之后对5-FU和TAX的敏感性显著增加.由此可见,干扰TGFβRⅠ的表达阻断TGFβ信号通路,进而显著增加间质型乳腺癌细胞对化疗药物的敏感性,这为临床乳腺癌治疗提供了一定的理论依据.     

表皮生长因子及受体在甲状腺肿瘤中的表达

目的:研究表皮生长因子(Epidermal Growth Factor,EGF)及受体(Epidermal Growth Factor Receptor,EGFR)及在甲状腺肿瘤中的表达。方法:应用免疫组织化学法检测91例甲状腺病变组织中EGFR和EGF的表达情况。结果:结节性甲状腺肿、甲状腺腺瘤、分化型甲状腺癌标本中EGFR表达的阳性率分别为15%、25%、68.62%,EGF表达的阳性率分别为10%、15%、68.62%,其中EGFR、EGF在分化型甲状腺癌与其余两组间差异均有统计学意义(P<0.05)。EGFR和EGF在甲状腺乳头状癌中的表达与性别、年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、临床分期等临床因素无明显相关。结论:EGF和EGFR的表达可作为鉴别甲状腺肿瘤良恶性的一个指标。     

花背蟾蜍胎肺发育中表皮生长因子受体的表达和定位作用

取花背蟾蜍(Bufo raddei)363、7、38、39期蝌蚪肺组织和幼蟾肺组织,进行常规石蜡切片,用免疫组化SP两步法检测EGFR的表达。观察了表皮生长因子受体(EGFR)在花背蟾蜍胎肺发育过程的表达特征,并探讨表皮生长因子(EGF)和转化生长因子α(TGF-α)通过与EGFR的作用,对花背蟾蜍胎肺形态发生和肺泡上皮成熟分化的作用。结果表明,36期,EGFR在肺网状隔膜上皮细胞处有表达;37期,肺网状隔膜处EGFR阳性表达很明显,在肺泡囊处表达呈弱阳性;38期,肺网状隔膜处EGFR的阳性表达变弱,在远端的肺泡囊上皮细胞处其阳性表达增强;39期,EGFR在肺泡囊上皮细胞处阳性表达最活跃,在网状隔膜处EGFR的表达很弱;幼蟾期,EGFR阳性反应主要定位在肺泡上皮细胞。结论是,在胎肺发育的不同时期,EGFR在上皮细胞的定位有迁移,免疫组化反应强弱也有差异,说明EGFR在胎肺不同发育阶段发挥不同的功能,它对肺泡上皮细胞的成熟分化有重要调节作用。     

正常大鼠肺内表皮生长因子受体(EGFR)的免疫组化定位

作者以免疫组织化学技术对大鼠肺组织内表皮生长因子受体(EGFR)进行了定位研究.结果显示 EGFR 广泛分布于支气管粘膜上皮细胞、肺泡细胞、血管内皮下结缔组织和血管平滑肌细胞上。其提示 EGF 通过作用于肺组织内的特异性 EGFR 而发挥其生理和/或病理学功能。     

恶性转化的成纤维细胞表皮生长因子受体的研究

本文用受体的放射性配基结合分析方法观察了C_3H小鼠胚胎成纤维细胞C_3H_(10)T1/2 CL8(简称NC_3H_(10))和~3H-TdR恶性转化的C_3H_(10)T1/2CL8(简称TC_3H_(10))的表皮生长因子受体(EGFR)。结果表明细胞恶性转化前后的EGFR都存在高亲和力和低亲和力两种结合位点,细胞恶性转化后能结合表皮生长因子的EGFR结合位点减少,Western blotting和受体的亲和交联分析表明EGFR的分子量为170kD,是单链多肽。     

皮肤创伤愈合中几种生长因子的免疫组织化学研究

用免疫荧光ABC法动态观察了大鼠皮肤创伤愈合过程中转化生长因子β（TGFβ1、β2、β3）·表皮生长因子（EGF）和白介素-6（IL－6）的分布。背部创伤术后1天,创面血痂中五种生长因子免疫染色均呈阳性。术后3天与7天,肉芽组织中密集的成纤维细胞内除TGFβ3、外其余四种生长因子呈阳性,巨噬细胞呈TGFβ1、TGFβ2与IL－6阳性。术后14天与28天,组织内细胞密度降低而其免疫染色性质不变。本文讨论了这些生长因子与创伤愈合的关系。     

阿霉素肾病大鼠表皮生长因子及其受体的表达

目的研究阿霉素肾病大鼠肾组织中表皮生长因子(EGF)及其受体EGFR的表达分布以及表达量与尿蛋白之间关系。方法选择第5天、14天、28天作为动态观察的时点,同期设立正常对照。采用荧光定量RT-PCR、免疫组织化学及计算机图像定量分析EGF mRNA以及EGF、EGFR蛋白在肾组织的表达,同时测定24 h尿蛋白定量。WT1和EGFR双重免疫组化确定EGFR在肾小球内确切细胞定位。结果阿霉素注射后第5天,EGFmRNA即较正常增高,28 d明显增高并高于5 d和14 d。正常对照组EGF阳性细胞主要分布于远曲小管和髓袢,阿霉素组EGF还在集合管和近曲小管上表达;EGF阳性表达范围和强度随尿蛋白增加而增加;EGFmRNA表达量以及EGF在肾小管中的表达强度与24 h尿蛋白量呈正相关。肾小管上皮细胞广泛表达EGFR,阿霉素组EGFR在小管表达均高于正常,但组间各时点差异无显著性;随尿蛋白增加EGFR在肾小球内表达逐渐增多。EGFR在肾小球和肾小管中的表达强度均与24 h尿蛋白量呈正相关。WT1和EGFR双重免疫组化显示阿霉素肾病组EGFR可在足突细胞上表达,正常组则无。结论阿霉素肾病大鼠的肾小球脏层上皮有EGFR的表达。EGF/EGFR可能参与了阿霉素肾病的发病过程以及蛋白尿的形成。     

表皮生长因子受体胞外区在哺乳动物细胞HEK293T中的分泌表达和鉴定

目的:融合表达表皮生长因子受体(EGFR)胞外功能区,为制备针对该分子的特异性抗体提供可用的靶标抗原。方法:通过PCR扩增EGFR胞外区基因,将其克隆入真核表达载体pABhFc中,重组质粒瞬时转染HEK293T细胞,进行EGFR的瞬时分泌表达,纯化获得电泳纯级的分泌蛋白,并通过ELISA、Western印迹、Biacore3000系统对融合蛋白进行鉴定。结果:经测序证实扩增得到了正确的EGFR胞外区基因序列,SDS-PAGE初步确认获得了单、双体的EGFR胞外区,ELISA检测证实双体融合蛋白hFc-EGFR可与商业化的EGF特异性结合,Western印迹检测证实单体融合蛋白His-EGFR可与商业化抗体特异性结合;经Biacore3000蛋白分子相互作用系统测定,双体融合蛋白hFc-EGFR与商业化抗体爱必妥的亲和力达0.5 nmol/L。结论:利用哺乳动物细胞HEK293T分泌表达系统获得了结构正确的单、双体2种类型的EGFR胞外区融合蛋白纯品,将用于抗EGFR特异性抗体的筛选。     

HSC的活化、增殖与TGF-β1及其Ⅰ型受体在中晚期纤维化肝组织中的改变及护杆片对其的影响

目的 探讨护肝片对中、晚期纤维化大鼠肝组织肝星状细胞(HSC)的活化与增殖及转化生长因子-β1(TGF-β1)及其Ⅰ型受体(TβRⅠ)表达的影响.方法 采用12.5% CCl4诱导的大鼠肝纤维化模型,自造模之日起,大鼠分组灌胃给药(护肝片921mg·kg-1)或溶媒,每日一次,直至8或13周末,分别处死动物,取左叶肝组织石蜡包埋,制作组织芯片,免疫组化S-P法检测大鼠肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、TGF-β1及TβRⅠ蛋白的表达,并用MetaMorph图像分析系统计数α-SMA阳性细胞数、对TGF-β1及TβRⅠ蛋白表达量进行定量分析.结果 1.模型复制8周和13周,模型组的肝损伤及其纤维化分级均明显高于正常组(P＜0.01),护肝片组的肝损伤及其纤维化分级均轻于模型组.2.模型复制8周和13周,模型组活化的HSC(即α-SMA阳性细胞)数量较正常组明显增多、TGF-β1及TβRⅠ蛋白的表达较正常组明显增强(P＜0.01);3.护肝片显著抑制8、13周纤维化肝组织HSC的活化与增殖和TGF-β1及TβRⅠ蛋白的表达(P＜0.01).结论 抑制HSC的活化与增殖和TGF-β1及TβRⅠ的表达可能是护肝片抗肝纤维化作用的靶点之一.     

卵泡刺激素和表皮生长因子对小鼠精原细胞增殖的影响

利用生殖细胞-体细胞体外无血清共培养模型研究了卵泡刺激素(FSH)和表皮生长因子(EGF)对小鼠A型精原细胞增殖的影响。精原细胞在ITS培养液(添加胰岛素、转铁蛋白和亚硒酸钠的DMEM)中培养24h后进行c-kit免疫细胞化学鉴定和EGF及其受体(EGFR)免疫细胞化学检测,72h后测定其形成集落数的情况。结果表明:ITS培养液能维持生殖细胞的活性,增殖细胞核抗原(PCNA)的表达增高。A型精原细胞呈c-kit阳性,EGF和EGFR主要表达于精原细胞。单独的FSH(1～100ng/ml)或EGF(1～10ng/ml)显著促进精原细胞集落数的增加。此外,EGF(0.1ng/ml)联合FSH(10ng/ml)具有加性效应,但更高剂量的EGF(1～10ng/ml)则降低了FSH的刺激作用。结果说明FSH可联合适量的EGF促进精原细胞的增殖。     

转化生长因子β对雌激素非依赖性乳癌细胞有抑制作用

转化生长因子β(TGFβ)对正常或转化细胞都有广泛的调节作用,而且通过自分泌或旁分泌机制发挥作用。曾有报道,TGFβ能抑制人上皮细胞癌的生长。最近,美国Arteage等测定了TGFβ与两种不同类型的人乳腺癌细胞增殖的关系。一种乳癌细胞不含雌激素受体,其生长不依赖于雌激素,称为ER~-细胞,它能迅速增殖,分化能力差;另一种是雌激素依赖细胞,含有雌激素受体,称为ER~ 细胞,生长较慢。实验表明,两类细胞对TGFβ反应性不同。ER~-细胞分泌大量TGFβ于介质中,能表达高亲和力TGFβ受体。~3H-胸苷掺入测定,微量外源性TGFβ即能抑制