怀山药种质资源的包埋玻璃化超低温保存与植株再生

通过对怀山药(Dioscorea opposita)种质资源的包埋玻璃化超低温保存与植株再生进行研究,结果表明:将低温下锻炼7天的怀山药试管苗带芽茎段放入预培养基中,低温下培养3天,然后在室温下用3%的海藻酸钠和0.5mol·L-1CaCl2包埋,包埋珠用MS+0.2mol·L-1蔗糖+2mol·L-1甘油+50g·L-1二甲基亚砜在0°C下装载60分钟,用30%甘油+15%乙二醇+10%二甲基亚砜+15%聚乙二醇+0.4mol·L-1蔗糖在0°C下脱水60分钟,迅速投入液氮,24小时后立即用40°C水浴快速化冻,再用MS+0.5mol·L-1蔗糖溶液洗涤2次,转入再生培养基中培养,可获得再生植株。再生植株成活率因基因型而异,铁棍山药、太谷山药、怀庆1号山药和B号山药的成活率分别为64.29%、49.21%、13.11%和39.81%。     

大薯类原球茎的离体诱导及再生体系的建立

采用正交试验设计方法,以大薯带节茎段为外植体,离体诱导类原球茎并建立大薯类原球茎的再生体系,以解决愈伤组织分化成苗和试管苗移栽成活率低的难题。结果表明：以带节茎段为外植体诱导类原球茎的最适培养基为MS（含3×Ca2＋）＋1.0 mg·L-1 6-BA＋0.2 mg·L-1 NAA＋0.1%PVP＋3%蔗糖,诱导率高达93.33%;类原球茎增殖的最适培养基为MS＋4mg·L-1 6-BA＋80 mg·L-1 Ad＋0.1%PVP＋3%蔗糖;类原球茎生根的最适培养基：1/2MS＋0.10 mg·L-1 NAA＋0.1%PVP＋3%蔗糖。将诱导得到的生根类原球茎植株进行炼苗,移栽基质珍珠岩：蛭石=2：1,移栽成活率可达到95%。     

水杉愈伤组织诱导及植株再生

通过愈伤组织诱导器官发生途径,建立了水杉（Metasequoia glyptostroboides）的植株再生体系,探讨了不同外植体（种胚、幼叶切块、茎段、根段）和植物生长调节剂对不定芽直接再生和愈伤组织诱导器官发生的影响。结果表明：以种胚、无菌苗叶片、茎段和根作为外植体,在MS补加2,4-D、NAA和6-BA不同组合的培养基上都能诱导得到愈伤组织,其中种胚诱导愈伤组织效果最好,诱导率可达100%,茎诱导效果次之,诱导率为97.1%。诱导愈伤组织效果较好的培养基有：MS＋1.0mg·L-12,4-D＋0.5mg·L-16-BA、MS＋0.1mg·L-16-BA＋1.0mg·L-1NAA、MS＋0.5mg·L-16-BA＋1.0mg·L-1NAA、MS＋1.0mg·L-16-BA＋1.0mg·L-1NAA、MS＋0.5mg·L-16-BA＋2.0mg·L-1NAA、MS＋1.0mg·L-16-BA＋2.0mg·L-1NAA和MS＋0.5mg·L-12,4-D＋0.5mg·L-1NAA。以愈伤组织在MS培养基上植株再生效果最好,再生率为62.5%。     

同源四倍体灯盏花离体再生及其倍性鉴定

以四倍体灯盏花的无菌苗叶柄为外植体进行离体培养,研究其再生体系,并对再生植株进行染色体倍性鉴定。结果表明:叶柄外植体在MS+0.05 mg·L-1NAA+0.5 mg·L-16-BA+0.65%琼脂+3%蔗糖的培养基上不定芽的再生频率可达87.3%;继代培养(MS+0.1 mg·L-1NAA+0.3 mg·L-16-BA+0.65%琼脂+3%蔗糖)增殖系数为7.8,诱导(1/2MS+1.0 mg·L-1NAA+1.0 mg·L-1IBA+0.65%琼脂+3%蔗糖)生根率100%,移栽成活率为90%。细胞学鉴定结果表明,再生植株的染色体数为2n=4x=36,而原二倍体的染色体数目为2n=2x=18,基数x=9,因此,再生植株为四倍体。     

小酸浆(Physalis minima L.)茎尖的玻璃化法超低温保存

用玻璃化法超低温保存小酸浆茎尖的结果表明,1 cm的小酸浆茎段放在改良MS培养基上室温预培养3 d后.切取2mm长的茎尖放在0℃条件下用100%PVS2溶液中处理70min.快速投入液氮保存,1 d后取出.于40℃恒温水浴中化冻2～3min后用含1.2mol·L-1蔗糖的改良MS培养液洗涤30min,接种于再生培养基上暗培养7d再转接至正常光照35μmol·m-2·s-1条件下,成活率可达36.0%,再生植株生长正常.     

毛白杨悬浮细胞系的建立及再生植株的获得

以毛白杨基因型TC152无菌苗为材料,研究毛白杨悬浮细胞系建立与植株再生,结果表明,通过悬浮培养和固体培养两种方法诱导毛白杨悬浮细胞分化不定芽,最终获得无菌生根苗。愈伤组织在MS＋1.5mg·L-12,4-D＋30g·L-1蔗糖的液体培养基中振荡培养,12d可建立悬浮细胞系;悬浮细胞系继代培养基为MS＋0.8mg·L-12,4-D＋30g·L-1蔗糖,继代周期为7d,悬浮细胞在MS＋1.0mg·L-16-BA＋0.1mg·L-1NAA＋0.5～1.0mg·L-1ZT＋30g·L-1蔗糖培养基中悬浮培养,可分化大量不定芽,每个培养瓶中可得到40～50个芽,个别不定芽玻璃化;不定芽在1/2MS＋0.6mg·L-1IBA＋20g·L-1蔗糖＋5.5g·L-1琼脂培养基上可分化不定根。悬浮细胞通过固体平板培养增殖为愈伤组织块后,在MS＋1.0mg·L-16-BA＋0.1mg·L-1NAA＋1.0mg·L-1ZT＋30g·L-1蔗糖＋5g·L-1琼脂的固体培养基上,不定芽分化率可达到70.00%。     

红芽芋茎尖的包埋玻璃化法超低温保存（英文）

对红芽芋(Colocasia esculenta var.cormosus ‘Hongyayu’)茎尖的包埋玻璃化法超低温保存技术进行了研究。茎尖从培养8周的试管苗上切下并包埋成海藻酸钙凝胶珠,并在MS+3.5 mg·L~(-1)6-BA+0.5 mg·L~(-1)IBA+0.1 mg·L~(-1)GA_3+0.3 mol·L~(-1)蔗糖的液体培养基中预培养24 h,随后用2 mol·L~(-1)甘油+0.4 mol·L~(-1)蔗糖的混合物在25℃下装载30 min,并用PVS2在25℃脱水20 min后将包埋的茎尖直接投入液氮保存。保存1 d后取出材料在40℃水浴快速复温3 min后,吸去冷冻管中PVS2,并用MS+3.5 mg·L~(-1)6-BA+0.5mg·L~(-1)IBA+0.1 mg·L~(-1)GA_3+1.2 mol·L~(-1)蔗糖的液体培养基在25℃洗涤3次,每次10 min。最后将茎尖接种于MS+3.5 mg·L~(-1)6-BA+0.5 mg·L~(-1)IBA+0.1 mg·L~(-1)GA_3的固体培养基上,暗培养3 d后转入正常的光周期中培养。红芽芋茎尖冻后成活率约为80%,其再生植株没有发生形态学的变化。这种包埋玻璃化法程序有望成为红芽芽茎尖超低温保存的常规方法。     

药用植物黄芪离体培养茎尖的包埋脱水法和包埋玻璃化法超低温保存（英文）

为找出一条黄芪种质长期包埋脱水法保存和包埋玻璃化法保存的程序,以来源于黄芪离体生长腋芽的黄芪茎尖并包埋成海藻酸钙珠。随后,在MS+0.75 mol·L~(-1)蔗糖的液体培养基中25℃下预培养5 d后,放于干硅胶上无菌干燥5 h,直至含水量达23.1%(以鲜重为基础)时将材料投入液氮保存。保存1 d后,茎尖在40℃水浴中化冻2~3 min并转入固体培养基上进行再生培养,2周后大约50%的茎尖可再生出芽。黄芪茎尖包埋玻璃化法超低温保存程序也被优化,同样包埋成海藻酸钙凝胶珠的茎尖在MS+1 mg·L~(-1)6-BA+0.05 mg·L~(-1)NAA+0.75 mol·L~(-1)蔗糖的液体培养基中25℃预培养3 d,用2 mol·L~(-1)甘油+0.4 mol·L~(-1)蔗糖装载液25℃装载90 min并再用PVS2在0℃下处理120 min后直接投入液氮。保存1 d后,取出材料在37℃水浴中化冻2~3 min,并用MS+1 mg·L~(-1)6-BA+0.05 mg·L~(-1)NAA+1.2 mol·L~(-1)蔗糖的液体培养基进行10 min的洗涤后转入MS+1 mg·L~(-1)6-BA+0.05 mg·L~(-1)NAA的固体培养基上进行再生培养。茎尖的再生率接近80%。以上两种超低温保存方式均未造成再生植株形态学上的变化。因此,包埋脱水法和包埋玻璃化法两种常规方法对于黄芪茎尖超低温保存来说均具有重要的意义。     

小金海棠叶片的组织培养与快速繁殖

1植物名称苹果(砧木)小金海棠(Malus xiaojinensis Cheng et.Jiang). 2材料类别组培苗. 3培养条件以MS为基本培养基.(1)起始和增殖培养基:MS 6-BA 0.2 mg·L-1(单位下同) IAA0.5 3%蔗糖 6.5 g·L-1琼脂;(2)生长培养基:MS 6-BA 0.6 NAA 0.2 GA3 0.3 3%蔗糖 7 g·L-1琼脂;(3)再生培养基:MS 6-BA 1.0 NAA 1.0 TDZ4.0 3%蔗糖 7 g·L-1琼脂;(4)生根培养基:1/2MS IAA 1.0 3%蔗糖 6 g·L-1琼脂.培养基pH调整至5.8,121℃、0.11 MPa灭菌20 min.培养温度为(25±2)℃,光照时间14 h·d-1,光强为40μmol·m-2·s-1.     

南荻的组织培养与快速繁殖技术

以南荻幼穗为外植体,进行了组织培养与快速繁殖技术的研究。结果表明：最佳诱导培养基：MS＋2.0mg·L-12,4-D＋0.1mg·L-16-BA＋0.5g·L-1水解酪蛋白＋0.5g·L-1脯氨酸;最佳分化培养基：MS＋0.5mg·L-1NAA＋0.5mg·L-1KT＋0.5mg·L-1IAA＋2.0mg·L-16-BA＋0.5g·L-1水解酪蛋白＋0.5g·L-1脯氨酸;最佳生根培养基：MS＋1.0mg·L-1NAA＋0.25mg·L-1Met。炼苗后,移入营养土与珍珠岩（1：1）的基质中,移栽成活率高达100%。该体系的建立为南荻规模化生产及遗传改良提供了前提条件。     

基于均匀设计法优化三种槭树属植物高效快繁体系

以花楷械、青楷械和小楷械的嫩茎段为外植体,应用均匀设计法筛选最适合于嫩茎腋芽生长伸长同时生根的培养基．结果表明,最适合花楷械的培养基为：改良MS＋IAA0．10mg·L^-1＋GAa1．10mg·L^-1,再生率为98％;最适合青楷械的培养基为：改良MS＋IAA0．40mg·L^-1＋IBA0．10mg·L^-1＋NAA0．07mg·L^-1＋GA31．10mg·L^-1,再生率为96％;最适合小楷械的培养基为：改良MS＋IBA0．10mg·L^-1＋GA31．10mg·L^-1,再生率为94％．以再生植株的茎节为材料进行快繁的结果表明,在30-35d的一个培养周期内,增殖倍数达65以上．     

亚麻胚性细胞悬浮培养体系的建立和影响因素

亚麻品种‘双亚五号’的胚性愈伤组织诱导最佳培养基为MB（MS无机盐加B5维生素）＋1.0mg·L^-12,4-D;细胞初始悬浮培养的最佳培养基为MB＋0.2mg·L-16-BA;细胞继代悬浮培养的最佳培养基为改良的MB（NH4NO3减半,KNO3加倍）＋0.02mg·L^-12,4-D＋0.2mg·L^-16-BA;适宜的蔗糖量为50g·L^-1;适宜的继代接种量为1.0～1.5g·（25mL）^-1;继代间隔为5～7d。     

油茶良种‘华硕’的组织培养及高效生根

以油茶‘华硕’带芽茎段为外植体,研究植物生长调节剂、珍珠岩对其快速繁殖及试管苗生根的影响。结果表明：茎段腋芽萌发的最佳培养基为：MS＋2.0 mg·L^-1 6-BA＋0.1 mg·L^-1 IAA,萌发率达88.68%;最佳继代增殖培养基为：WPM＋3.0 mg·L^-1 6-BA＋0.01 mg·L^-1 IBA＋6.0 mg·L^-1 GA3,增殖系数可达11.27;最佳壮苗伸长培养基为：WPM＋0.05 mg·L^-1 IAA＋6.0 mg·L-1GA3;最佳生根培养基为：1/2MS＋1.0 mg·L^-1 IBA＋50 g·L^-1珍珠岩,生根率95.83%。炼苗后移栽到泥炭土、珍珠岩、黄土（1：1：1,V/V/V）混合基质中,成活率达85%以上。     

龙凤竹的组织培养

以龙风竹[Pedilanthus tithymaloides（L.）Poit．var．nartus Dressler]茎段为外植体,研究了龙凤竹愈伤组织诱导、植株再生以及试管苗继代保存培养的培养条件。结果表明,龙风竹茎段灭菌的最佳方法是用1．0g·L^-1HgCl2处理4～10min;愈伤组织诱导与分化的最佳培养基为添加1．5mg·L^-1 6-BA和0．10～0．15mg·L^-1 NAA的MS培养基（含有30g·L^-1蔗糖和6g·L^-1琼脂粉,pH5．78～pH5．80）;试管苗生根的最佳培养基为含有0．2mg·L^-1 NAA的生根培养基（1／2MS,含有15g·L^-1蔗糖和6g·L^-1琼脂粉,pH5．78-pH5．80）,试管苗生根率可以达到93．3％;经过炼苗并移栽后,龙风竹试管苗的成活率可达95．0％以上;龙凤竹试管苗的最佳继代保存培养条件为：在含有0．1mg·L^-1 NAA的生根培养基中,于温度15℃、光照强度20μmol·m^-2·s^-1的条件下继代保存。此外,龙凤竹愈伤组织可以直接分化产生大量丛生芽,达到龙凤竹试管苗增殖的目的。     

菘蓝花药培养及单倍体的诱导

探讨菘蓝花药处于单核晚期的形态指标,并以适宜发育时期的花药为外植体,进行花药培养及单倍体诱导。实验结果表明,4℃低温处理2d后,在含有6-BA0．5mg·L-1和NAA1．0mg·L-1。的Ms培养基上,花药愈伤组织的诱导率为23．35％;将其转接到Ms附加6．BA1．0mg·L-1,NAA0．5mg·L-1的分化培养基上,80．00％以上的愈伤组织可以诱导产生不定芽;再将分化出的试管苗转接到1／2MS＋NAA1．0mg·L-1的生根培养基上,3d左右即可获得完整植株。经叶边缘压片检查染色体数目,花药培养所得的弱小绿苗为单倍体植株。     

骆驼刺发根农杆菌转化系的原生质体培养和植株再生

从发根农杆菌A4转化的荒漠植物—璐驼刺毛状根愈伤组织中分离的原生质体培养的结果表明,酶解新转代7～10d的淡黄色松软愈伤组织,可获得大量有活力的原生质体。原生质体在附加有1．5mg．L-1 2,4．D、0．2mg．L-1 6．BA、0．3m01．L-1甘露醇、2％（W/V）蔗糖和500mg·L-1水解酪蛋白的DPD培养基中进行液体浅层培养可持续分裂。培养基的最适渗透压为（450±3）mOsm·kg-1,原生质体的最适植板密度为4×10^5个．mL-1。制备原生质体的愈伤组织以低温（4℃）预处理后,原生质体的产率和分裂频率均提高,分裂频率最高可达50％。原生质体分裂形成的愈伤组织转移在附加1-2mg．L-1 6-BA（或KT）和0．2mg·L-1NAA的MS培养基上培养后,可以分化并获得再生植株。纸电泳检测表明,原生质体再生的愈伤组织和分化植株仍然含有毛状根转化系的特异产物——冠瘿碱。     

血叶兰的组织培养与快速繁殖

以血叶兰的嫩茎段为外植体, 建立了血叶兰的组培快繁体系。结果表明： 芽诱导最适宜的培养基是MS＋6-BA 5.0 mg·L-1; 最适芽增殖培养基为MS＋6-BA 5.0 mg·L-1＋NAA 0.5 mg·L-1＋TDZ 0.3 mg·L-1, 芽增殖率达4.92倍; 最佳壮苗培养基为MS＋NAA 0.3 mg·L-1＋GA3 1.0 mg·L-1＋15%椰汁, 芽苗高度达到4.33 cm, 芽粗为0.61 cm; 生根最适培养基为1/2MS＋IBA 1.0 mg·L-1＋15%香蕉＋0.5 g·L-1活性炭, 生根率在93.0%以上; 炼苗后, 移栽在泥炭土＋珍珠岩＋松树皮（3：1：1, V/V/V）混合基质中, 存活率高于87.0%。     

铁核桃离体培养与快速繁殖

以优良单株‘纳雍-1’的单芽茎段为外植体,建立了铁核桃（Juglanssigillata）离体培养与快速繁殖的体系。结果表明,附加6-BA1．0mg·L-1 ＋活·IgK（AC）3．0g·L-1的DKw培养基适宜铁核桃腋芽诱导;适宜铁核桃芽增殖的培养基为DKW＋6-BA1．0mg·L-1 ＋IBA0．02mg·L-1,40d后增殖系数可达7．33;试管苗的茎尖和茎段均可用于增殖培养;一步生根法（低浓度的生长素IBA持续诱导）不利于铁核桃试管苗嫩茎生根;采用二步生根法,生根率最高可达71．73％,其中,不同IBA浓度、暗培养时间、蔗糖浓度和AC含量对试管苗嫩茎生根影响显著,铁核桃试管苗在附]sulBA5,0mg·L-1的1／4DKW培养基中暗培养12d,再转移到不含IBA的1／4DKW培养基（附加AC 3g-L-1和蔗糖20g·L-1）中生根效果最好;生根试管苗采用珍珠岩和营养土两步炼苗,60d后成活率达到87．50％。