苦荞胚性愈伤组织诱导与植株再生研究

以苦荞子叶和下胚轴为外植体,进行了不同浓度激素组合的MS和SH固体培养基对胚性愈伤组织诱导及植株再生的研究。结果发现,MS培养基比SH培养基更有利于胚性愈伤组织诱导;2,4-D是诱导愈伤组织的有效激素,KT能有效促进胚状体的形成;下胚轴和子叶都能有效诱导出胚性愈伤组织和再生植株。下胚轴在MS 1.5mg·L-12,4-D 1.5mg·L-1BA培养基,子叶在MS 2mg·L-12,4-D 0.5~1.5mg·L-1BA上能高效诱导出愈伤组织;愈伤组织在MS 2mg·L-12,4-D 0.1mg·L-1KT培养基中继代,能有效诱导胚性愈伤组织;来自下胚轴的胚性愈伤组织在1/2MS 2.0mg·L-1BA 0.5mg·L-1KT 0.1mg·L-1NAA培养基上能够高频再生出芽,来自子叶的胚性愈伤组织在1/2MS 1.0mg·L-1BA 0.1mg·L-1KT 0.1mg·L-1NAA培养基上芽诱导率较高;MS 1mg·L-1NAA是适宜的再生苗生根培养基。     

结缕草再生体系的研究

以结缕草品种‘Zenith’(Zoysia japonica‘Zenith’)的种子为外植体,在附加1.0 mg.L-12,4-D和0.1mg.L-16-BA或2.0 mg.L-12,4-D的MS培养基上培养,愈伤组织诱导率较高,分别达到100%和92%。在添加了2.0 mg.L-12,4-D或1.0 mg.L-12,4-D和0.1 mg.L-16-BA的MS培养基上继代培养可诱导出胚性愈伤组织,诱导率分别为3.26%和14.52%。胚性愈伤组织在含0.01mg.L-12,4-D的1/2 MS分化培养基上的分化率和生根率都达到100%。     

影响茎用芥菜愈伤组织诱导和植株再生的因素

茎用芥菜子叶培养在MS 0.25 mg·L-1NAA 0.5 mg·L-16-BA 0.25 mg·L-12,4-D培养基上,可获得较高质量的愈伤组织.愈伤组织培养在MS 1～1 mg·L-16-BA 0.2 mg·L-1NAA培养基上分化频率为8.3%,而在加有羧苄青霉素和头孢霉素的培养基上,最高分化频率可达52.4%.将获得的再生植株转移到1/2MS 0.1 mg·L-1 NAA的生根培养基中,可获得完整植株.     

水杉愈伤组织诱导及植株再生

通过愈伤组织诱导器官发生途径, 建立了水杉(Metasequoia glyptostroboides)的植株再生体系, 探讨了不同外植体 (种胚、幼叶切块、茎段、根段)和植物生长调节剂对不定芽直接再生和愈伤组织诱导器官发生的影响。结果表明: 以种胚、无菌苗叶片、茎段和根作为外植体, 在MS补加2,4-D、NAA和6-BA不同组合的培养基上都能诱导得到愈伤组织, 其中种胚诱导愈伤组织效果最好, 诱导率可达100%, 茎诱导效果次之, 诱导率为97.1%。诱导愈伤组织效果较好的培养基有:MS+1.0 mg·L^–1 2,4-D + 0.5 mg·L^–1 6-BA、MS + 0.1 mg·L^–1 6-BA + 1.0 mg·L^–1 NAA、MS + 0.5 mg·L^–1 6-BA+1.0 mg·L^–1 NAA、MS+1.0 mg·L^–1 6-BA+1.0 mg·L^–1 NAA、MS+0.5 mg·L^–1 6-BA+2.0 mg·L^–1 NAA、MS+1.0 mg·L^–1 6-BA + 2.0 mg·L^–1 NAA和MS + 0.5 mg·L^–1 2,4-D + 0.5 mg·L^–1 NAA。以愈伤组织在MS培养基上植株再生效果最好, 再生率为62.5%。     

百合体细胞胚胎发生和植株再生

以切花百合(Lilium)品种‘黄天霸’(‘Manissa’)花器官为外植体诱导体细胞胚胎发生与植株再生。结果表明,不同花器官、不同激素配比对愈伤组织形成均具有显著影响。花丝为最佳外植体,激素对愈伤组织诱导的影响效应为NAA>6-BA>2,4-D,最适培养基为MS+1.0 mg.L-1NAA+0.2 mg.L-16-BA;激素诱导体细胞胚胎发生的影响效应为2,4-D>KT>6-BA,最佳培养基配方为MS+1.0 mg.L-12,4-D+0.2 mg.L-1KT+1.0 mg.L-16-BA;MS培养基添加IBA可促进体细胞胚萌发成苗,体细胞胚芽成苗的最佳培养基为MS+0.2 mg.L-16-BA+1.0 mg.L-1IBA。     

芨芨草愈伤组织器官发生及植株再生

芨芨草(Achnatherum splendens(Trin.)Nevski)种子消毒并在MS培养基上萌发获得无菌苗,以幼苗的叶鞘和胚轴为外植体诱导愈伤组织,经继代后进一步诱导不定芽及生根.研究结果表明,诱导愈伤组织最适合的培养基为B5 1.5 mg·L-12,4-D 0.5 mg·L-1NAA;诱导芽分化较适合的培养基为B5 0.5 mg·L-1 6-BA 0.2 mg·L-1 NAA;1/4B5 1.0 mg·L-1NAA 0.2 mg·L-1 IBA 1.0 g·L-1活性炭培养基则有利于芨芨草试管苗的生根.本实验建立了完整的芨芨草植株再生体系,移栽成活率高.     

火龙果愈伤组织诱导与植株再生

为了建立火龙果愈伤组织诱导与植株再生体系,以火龙果茎段、幼苗和子叶为外植体进行离体培养试验。结果表明：茎段诱导愈伤组织的最优培养基为1／2MS＋2,4-D2．0mg·L^-1＋6-BAO．5mg·L^-1,诱导子叶愈伤组织的最适培养基是1／2MS＋2,4-D2．0mg·L^-1＋6-BA1．0mg·L^-1,诱导愈伤组织分化的最优培养基为1／2MS＋6-BA4．0mg·L^-1＋NAA0．5mg·L^-1,最佳生根培养基为1／2MS＋6．BA1mg·L^-1＋NAA0-3mg·L^-1。     

乌桕不同外植体高效再生探索

以乌桕的成熟胚、胚乳、叶片和茎段为外植体,建立高效、稳定的组培快繁再生体系,并成功获得其再生苗.结果表明:(1)全胚乳带胚的愈伤组织诱导率达90%,其愈伤组织继续在MS+1.0 mg·L-1 NAA+1.0 mg·L-1 6-BA培养基上培养,不定芽最多达15个/外植体.(2)去胚乳的胚不加调节剂则胚直接萌动成苗,萌动率和成苗率可达100%;去胚乳的胚在MS+0.05 mg·L-1 NAA+0.3 mg·L-1 6-BA最佳培养基中培养,其胚轴处可直接诱导不定芽,最多达6个/外植体.(3)无菌苗叶片在MS+0.5 mg·L-1 NAA+0.5 mg·L-1 6-BA培养基中诱导的有效不定芽数最高达18个/外植体,诱导率达90%.(4)茎段在MS+0.05 mg·L-1 NAA+0.1~0.3 mg·L-1 6-BA培养基上不定芽的诱导率较高(100%),直接诱导的不定芽数最多达17个/外植体.(5)芽苗在1/2MS+0.5 mg·L-1 IBA上生根率达到100%,但根系较细弱,而在MS+1.0 mg·L-1镧稀土中的生根率达100%,且根系粗壮;生根的小苗练苗移栽后温室内成活率为89.2%,移栽到室外沙质土壤中的成活率为68.9%.     

盐生植物海马齿离体再生

建立盐生植物海马齿（Sesuvium portulacastrum）的离体再生体系,为其生物技术改良奠定基础。以海马齿叶片、茎和腋芽为外植体, 在不同激素配比的培养基上进行愈伤组织诱导、继代培养以及不定芽的分化和生根培养。结果表明： 最适愈伤组织诱导的外植体为叶片, 其次为幼嫩的茎段和腋芽。以叶片为外植体, 愈伤组织诱导率最高的培养基为MS＋2.0mg·L^–12, 4-D ＋ 0.5 mg·L^–16-BA ＋ 3%sucrose; 芽分化最适培养基为MS ＋ 1.0 mg·L^–1 2, 4-D ＋ 0.2 mg·L^–1 6-BA ＋ 3% sucrose;生根最适培养基为MS ＋ 3%sucrose ＋ 0.1%AC。炼苗移栽后, 成活率可达80%。     

6-BA对红掌组织培养中红叶变异的影响

以红掌盆栽品种‘Avo-Gloria’为试材,以MS＋0.2mg·L^-12,4-D为基本培养基,分别在添加1～10mg·L^-16-BA的10种脱分化培养基上,诱导其叶柄外植体产生愈伤组织;再以MS＋2mg·L^-16-BA＋0.2mg·L^-1 NAA为分化培养基诱导分化不定芽;以MS＋0.2mg·L^-1 NAA为生根培养基,从不定芽获得再生植株。结果显示：（1）在MS＋0.2mg·L^-12,4-D＋8～10mg·L^-16-BA的3种脱分化培养基上可产生9%～10%的绿色、质地较硬的愈伤组织;（2）愈伤组织在MS＋2mg·L^-16-BA＋0.2mg·L^-1 NAA的分化培养基上,经6～8次继代培养,可获得3%～7%的不定芽,并可生根长成再生植株;（3）再生植株定植3个月后,有3%～7%植株出现红叶变异,此红叶可终生表现为红色。     

小叶龙竹（Dendrocalamus barbatus）愈伤组织诱导及植株再生

以小叶龙竹种子为外植体,通过研究MS培养基中不同植物生长调节剂浓度组合对外植体愈伤组织诱导和不定芽分化的影响以及不同配比对生根的作用,建立了稳定的繁殖再生体系。试验结果表明愈伤组织诱导的最适培养基为MS＋2,4-D5．0mg·L-1;不定芽分化的最适培养基为MS＋2,4-D0．5mg·L-1＋6．BA1．0mg·L-1＋KT0．25mg·L-1;小苗的最适生根培养基为1／2MS＋6-BA0．5mg·L-1＋NAA1．0mg·L-1＋IBA0．4mg·L-1,建立的繁殖再生体系将为进一步利用分子生物学技术对竹类植物进行遗传改良奠定基础。     

药用植物金荞麦愈伤组织诱导与植株再生

目前转基因技术已成为植物定向遗传改良的重要手段,而建立稳定高频的离体再生系统是实现遗传转化的基础和前提.本试验以25 ～30 d苗龄的金养麦(Fagopyrum dibotrys)无菌苗叶片、茎节间、叶柄为外植体进行愈伤组织诱导与植株再生研究.结果表明:叶片在MS +2,4-D 4.0 mg/L +6-BA 1.0 mg/L培养基上愈伤组织诱导率达到89％.茎节间在MS +2,4-D 2.0 mg/L +6-BA 2.0 mg/L培养基上愈伤组织诱导率为87％.叶柄在MS +2,4-D 4.0 mg/L +6-BA 2.0 mg/L+ IBA 0.2 mg/L培养基上的最高诱导率仅为54％.愈伤组织分化不定芽的适宜培养基为MS +6- BA2.0 mg/L +TDZ0.2 mg/L +NAA0.2 mg/L;金荞麦不定芽在1/2 MS +NAA 0.5 mg/L的培养基上生根效果最好.组培再生植株经炼苗后移栽到田间成活率达80％以上,且生长表现正常.高频完整再生体系的建立,为金荞麦进一步遗传操作和扩大药材资源奠定了基础.     

松潘乌头块根愈伤组织诱导及再生体系的建立

以野生松潘乌头块根为材料,进行愈伤组织诱导与植株再生培养。由于松潘乌头离体培养时,组织褐变严重,因此在愈伤组织诱导前须进行除褐培养,培养基以MS＋6-BA 1.0 mg·L^-1＋VC 300 mg·L^-1＋PVP 200 mg·L^-1效果较好,连续转移3次后褐变率显著降低到10%。适宜的愈伤组织诱导培养基为MS＋2,4-D 3.0 mg·L-1＋6-BA 2.0 mg·L^-1＋LH 500 mg·L^-1,诱导率100%;不定芽分化培养基为MS＋ZT 1.0 mg·L^-1＋6-BA 2.0 mg·L^-1＋NAA 0.5 mg·L^-1,分化率93%;不定芽增殖培养基为MS＋6-BA 2.0 mg·L^-1＋NAA 0.3 mg·L^-1,平均增殖倍数为6.0左右;生根培养基为1/2MS＋IAA 0.3 mg·L^-1＋VC 100 mg·L^-1（或PVP 300 mg·L^-1）,平均生根数10条左右,生根率为96%以上。将瓶苗移栽于森林土和蛭石以1：1（V/V）混合的基质中,生长良好,成活率达90%以上。     

多花黄精诱导愈伤组织与不定芽培养基筛选

以多花黄精Polygonatum cyrtonema的根状茎为外植体,通过L9(34)正交试验比较不同植物生长调节剂及其组合对多花黄精愈伤组织诱导的影响,筛选最适生长调节剂配方,同时筛选通过器官发生方式直接成芽较为合适的培养基。结果表明,含有2,4-D和KT的培养基诱导愈伤组织效果显著,多花黄精愈伤组织诱导的最适培养基为MS + 6-BA 2.0 mg·L-1 + 2,4-D 0.5 mg·L-1 + NAA 0.1 mg·L-1 + KT 1.0 mg·L-1,该培养基的愈伤组织诱导率可达39.10%;培养基MS + 6-BA 4.0 mg·L-1 + NAA 0.2 mg·L-1可诱导多花黄精根状茎直接产生不定芽。     

崖白菜的愈伤组织诱导及植株再生

通过愈伤组织诱导不定芽发生途径,建立了崖白菜的组培再生体系,研究了崖白菜幼嫩子房和不同植物生长调节剂对其愈伤组织诱导和不定芽发生的影响。结果表明,以崖白菜的幼嫩子房作为外植体,诱导子房分化形成愈伤组织的最适培养基为MS＋6．BA1．0mg·L-1＋2,4-D0．2mg·L-1,诱导率可达82．83％;最适的不定芽分化培养基为Ms＋6-BA0．5mg·L-1＋NAA0．1mg·L-1;诱导不定芽生根的最适培养基为1／2MS＋NAA0．1mg·L-1。     

领春木体细胞胚胎发生及植株再生

以领春木（Eupteleapleiospermum Hook．f.etThoms．）种子幼胚为试验材料,对领春木体细胞胚胎发生进行了研究。结果表明：在附加1．0mg·L-1 2,4．D＋0．5mg·L-1 6-BA＋3％蔗糖＋0．8％琼脂的Ms培养基上可诱导出愈伤组织。愈伤组织在附加0．5mg·L-1 NAA＋0．5mg·L-1 6．BA的培养基上可形成体细胞胚;体胚在附加0．5mg·L-1 6-BA＋0．05mg·L-1 NAA＋0．1％PVP的1／2MS培养基上能大量增殖;将成熟体胚转移到不添加任何植物生长调节剂的MS培养基上,培养60d,形成正常植株。     

蓝花楹组织培养与快速繁殖研究

以蓝花楹(Jacaranda mimosifolia Humb.et Bonpl.)胚轴为外植体进行组织培养和快繁体系建立的研究。结果表明,蓝花楹种子经40℃-45℃温水浸泡后发芽率较高,达到55.7%。蓝花楹不定芽和愈伤组织诱导的最适培养基分别为MS+6-BA2.0 mg L-1+NAA 0.1 mg L-1+2,4-D 0.1 mg L-1和M S+6-BA 0.5 mg L-1+NAA 1.0 mg L-1+2,4-D 1.0 mg L-1。不定芽和愈伤组织增殖的最适培养基分别为改良MS培养基+6-BA 0.5 mg L-1+NAA 0.5 mg L-1+IBA 0.5 mg L-1和MS+6-BA 1.0 mg L-1+NAA 0.5 mg L-1+ZT 3.0 mg L-1。愈伤组织分化最适培养基为M S+BA 1.0 mg L-1+NAA 0.5 mg L-1+2,4-D 0.5 mg L-1。最适生根培养基为1/2MS+蔗糖20 g L-1+NAA 0.1 mg L-1+活性炭2.0 g L-1,生根率达78.3%。     

锁阳愈伤组织诱导和增殖及不定根分化

以药用寄生植物锁阳的不同部位肉质茎为外植体,研究外植体形态及植物生长调节剂配比对愈伤组织形成、增殖及不定根分化的影响,建立了高效的锁阳肉质茎愈伤组织诱导、增殖和不定根分化体系。结果表明,锁阳茎下部大小为1．5cmx1．5cmxl．5cm的外植体,维管束平行于培养基放置,有利于愈伤组织形成;外植体培养50d,愈伤组织形成。高效的愈伤组织诱导培养基为Ms＋6-BA1．0mg.L-1＋2,4-D3．0mg·L-1,愈伤组织诱导率可达67％;增殖培养基为Ms＋6．BA0．5mg·L-1。＋2,4-D1．5mg·L-1,NxsN74％;在Ms＋6．BA1．0mg·L-1＋NAA2．0mg·L-1。分化培养基中,不定根诱导率达56％。