虎乳灵芝液体发酵培养研究

目的:建立虎乳灵芝菌丝液体发酵培养方法。方法:采用改变培养基的pH和选择不同的碳源及氮源,通过比较虎乳灵芝菌丝的低温冷冻干燥重量,分别研究菌丝生长的最适培养基。结果:虎乳灵芝菌丝最适生长的液体培养基pH 6~7(中性微偏弱酸);菌丝生长的最好的液体培养基中的碳源为葡萄糖,氮源为酵母粉。结论:葡萄糖 酵母粉液体培养基可以作为虎乳灵芝菌丝大量发酵培养的培养基。     

一株嗜麦芽寡养单胞菌的分离及其生物学特性

近年来,基于高通量测序技术对植物根际土壤微生物菌群结构的测定结果表明,土壤中绝大多数微生物难以通过传统的富营养培养基实现培养和分离。为进一步探索分离土壤中寡营养微生物的方法,结合多种培养因素,以土壤浸出液为基础培养基设计寡营养培养基分离土壤细菌菌株。并通过菌株的细胞形态、生理生化特征、16S rRNA和gyrB基因序列等对其中一株菌进行鉴定,同时对其蛋白酶与铁载体的产生能力进行检测以评价其在植物根际促生方面的应用潜力。利用土壤浸出液做培养基是有效分离土壤寡营养细菌的方法 ;编号为S35的菌株鉴定为嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia),具有蛋白酶和铁载体产生能力。采用的寡营养培养基可以分离获得在富营养培养基上不易分离的细菌,得到S. maltophilia S35菌株在植物促生方面具有一定的应用潜力。     

细菌产纤维素酶和脂肪酶固体培养基及接种和培养时间的研究

为准确鉴定和筛选产纤维素和脂肪酶细菌，通过平板扩散法测定不同氮源培养基对细菌产纤维素酶和不同碳源培养基对细菌产脂肪酶活性的影响，确定细菌产纤维素酶和脂肪酶的最佳培养基，利用最佳培养基研究不同琼脂含量、海水和淡水溶剂、菌种的培养时间及接种后的培养时间对细菌纤维素酶和脂肪酶活性的影响。结果表明，以蛋白胨为氮源的A培养基为细菌产纤维素酶最佳培养基，以Tween-20为碳源的培养基为细菌产脂肪酶最佳培养基；培养基中琼脂的最佳用量均为13‰；所有菌株在海水培养基上产生的纤维素酶活性比淡水培养基上高，但脂肪酶活性并非如此；鉴定和筛选产纤维素酶和脂肪酶细菌接种菌种的最佳培养时间分别为18 h和24~32 h，测定细菌产纤维素酶和脂肪酶的最佳培养时间分别为48~72 h和120 h。     

HPLC指纹图谱技术在灵芝组织分离试验中的应用

利用HPLC指纹图谱技术研究从同一灵芝子实体不同部位组织分离获得的菌株三萜化合物的差异。用常规组织分离方法获得不同菌株,在A、B、C、D四种培养基上进行出菇试验,运用HPLC指纹图谱技术获得各子实体三萜提取物HPLC指纹图谱,计算图谱间的相似度,分析三萜指纹的差异。结果表明,从子实体不同部位分离获得的四个菌株在同一培养基相同条件下培养获得的灵芝子实体的三萜指纹图谱相似度均大于0．99;同一部位分离获得的菌株在不同培养基相同培养条件下获得的子实体,其粗三萜HPLC图谱相似度均大于0．96;不同的组织分离部位和不同的培养基对灵芝菌株三萜指纹图谱的影响均不显著。18号菌株在C培养基上培养获得的子实体三萜含量最高,上层菌肉为最优组织分离部位,C培养基为最优培养基。灵芝的三萜组成不受生长环境的影响,而生长环境会对其三萜化合物含量产生一定的影响。本文首次应用HPLC指纹图谱方法对灵芝组织分离获得的菌株的差异性进行了研究。     

HPLC指纹图谱技术在灵芝组织分离试验中的应用

利用HPLC指纹图谱技术研究从同一灵芝子实体不同部位组织分离获得的菌株三萜化合物的差异。用常规组织分离方法获得不同菌株,在A、B、C、D四种培养基上进行出菇试验,运用HPLC指纹图谱技术获得各子实体三萜提取物HPLC指纹图谱,计算图谱间的相似度,分析三萜指纹的差异。结果表明,从子实体不同部位分离获得的四个菌株在同一培养基相同条件下培养获得的灵芝子实体的三萜指纹图谱相似度均大于0.99;同一部位分离获得的菌株在不同培养基相同培养条件下获得的子实体,其粗三萜HPLC图谱相似度均大于0.96;不同的组织分离部位和不同的培养基对灵芝菌株三萜指纹图谱的影响均不显著。18号菌株在C培养基上培养获得的子实体三萜含量最高,上层菌肉为最优组织分离部位,C培养基为最优培养基。灵芝的三萜组成不受生长环境的影响,而生长环境会对其三萜化合物含量产生一定的影响。本文首次应用HPLC指纹图谱方法对灵芝组织分离获得的菌株的差异性进行了研究。     

食药用菌制作酸乳深层发酵培养基的比较

利用3种深层发酵培养基对灵芝和云芝进行深层发酵培养,所得的发酵滤液可以制成相应的灵芝和云芝酸乳.经测定采用这两种食药用真菌深层发酵滤液制成的酸乳营养丰富,并具有灵芝和云芝的药用价值;但使用不同的深层发酵培养基,酸乳的营养和理化特性有差异,通过比较可以选择出最佳深层发酵培养基.     

利用DGGE评价不同培养基回收番茄根际细菌类群的能力

用营养肉汤、YG、根系分泌物、土壤浸渍液4种培养基从番茄根际分离培养细菌,并结合变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术,对4种培养基回收番茄根际细菌种群的能力进行了比较研究。结果表明,不同培养基和培养温度,回收到的细菌种群有一定差异;低营养浓度的YG培养基在较低的培养温度20℃下进行较长时间的培养,比高营养浓度营养肉汤培养基产生更多、更具代表性的细菌;以根系分泌物为基础的培养基从番茄根际回收到的优势菌群最多。该研究初步建立了用DGGE技术对不同培养基回收分离细菌种群能力进行评价的方法。     

灵芝菌丝体深层培养及多糖提取工艺研究

灵芝ＳＤ－２２菌株培养条件,培养基组分、ｐＨ、通气量、培养时间等对该菌的生物量和多糖含量均有影响。初步确定了灵芝多糖提取工艺。在优化条件下,生物量为１．８６ｇ／１００ｍｌ培养基,灵芝多糖产量为５１ｍｇ／１００ｍｌ培养基     

脑膜炎球菌多糖疫苗培养基的优化研究

目的探索A群、C群脑膜炎球菌多糖疫苗培养基的适宜配方。方法通过筛选改良培养基(配方2)中酸水解酪蛋白替代培养基配方1中原50%盐酸酪蛋白水解液制备相应的培养基,培养A群、C群脑膜炎球菌一定时间后,以收获的细菌浓度和复合多糖量来确定培养基的配比,并比较该培养基在不同温度条件下培养细菌的结果。结果在A群、C群脑膜炎球菌多糖疫苗不同培养基的细菌培养过程中,用酸水解酪蛋白制备的改良培养基(配方2)培养的细菌浓度和多糖收获量均高于其他培养基(配方1和配方3),用酸水解酪蛋白培养基能提高脑膜炎球菌的产量。结论以酸水解酪蛋白为主要原料(配方2)的改良培养基能作为流脑A群、C群细菌的最适培养基,且细菌在(37±0.2)℃培养情况良好。     

大黄鱼细菌性病原哈维氏弧菌培养特性的研究

弧菌是危害水产养殖动物的最为严重的病原之一.从患病大黄鱼肝脏分离致病的细菌哈维氏弧菌GYC1108-1为材料,对哈维氏弧菌GYC1108-1株的最佳生长条件及培养基优化进行了测定.综合考察不同的培养温度、培养时间、培养基盐度、培养基的pH值对细菌生长的影响,并采用正交实验法,对培养基配方进行优化.结果表明:不同的培养温度、培养时间、培养基盐度、培养基pH值等均会影响细菌的产量.GYC1108-1适宜生长的盐度为1%-5%、pH为5～9.5、温度为15～35℃、在培养基中添加硫酸铜、硫酸氨会明显促进生长;最佳培养条件及培养基成份为:NaCl 2%,pH8.0,温度30℃,蛋白胨1.0%、牛肉膏0.75%、CuSO4 0.3mg/L、(NH4)2SO4 0.1g/L.     

腺嘌呤对菠萝快速繁殖的影响

以腺嘌呤（adenine,Ad）作为基本培养基（MS）的添加成分,进行菠萝的快速繁殖。以不加Ad作对照,结果显示不同浓度的Ad分别为1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mg.L-1对芽的分化及增殖均无显著促进作用。而在壮苗培养中,除Ad为1.0 mg.L-1外,其他各浓度均能极显著地提高幼苗的生长速率,而且在不同浓度间也出现了极显著差异。Ad在3.0～5.0 mg.L-1时,幼苗生长速率最快,可使出苗时间提前30 d以上。     

建兰与纹瓣兰种间杂种胚培养研究

采用人工授粉的方法,以‘小桃红’建兰为母本、纹瓣兰为父本进行杂交,获得了种间远缘杂交后代植株。杂交果苹与母本自交果荚的大小差异大小,但鲜重明显大于母本,果荚内的种子量却少于母本。杂种胚离体培养90d出现绿色原球胚,210d可萌发出大量植株;而‘小桃红’自交种子培养210d只形成少量绿色根状茎。杂种胚的萌发具有杂种优势,不仅萌发快,而且出苗率高,萌发时先形成原球胚,原球胚上长出大量小根毛,继而形成大量假鳞茎,假鳞茎经转瓶培养后,分化形成大量健壮植株,分化率高。     

廊坊杨3号快繁和转基因的再生系统

对杂交杨树新品种廊坊杨3号（Populus langfangensis 3,(P. deltoides (“Shan Hai Guan”)×((P. simonii × pyramidalys)₁₂×Ulmus pumila) 的离体叶片和茎段在附加BA、NAA、IBA和2,4-D的MS培养基上的直接和间接的器官分化、愈伤组织形成和植株再生进行了研究。叶柄和叶片最容易在叶脉处直接诱导生芽。从叶片直接诱导生芽的激素条件为1～2 mg·L^-1 BA和0.5 mg·L^-1 IBA,最高生芽率可达90%。2,4-D促进愈伤组织的形成。由愈伤组织诱导生芽的激素条件为0.3～0.5 mg·L^-1 BA 和 0.02 mg·L^-1 IBA或NAA,生芽率达76%。较好的生根条件为0.1 mg·L^-1 BA和0.2～0.5 mg·L^-1 IBA,生根率可达67％。以上再生条件为廊坊杨3号的转基因育种和无性快繁技术提供了可能。     

阳桃胚乳愈伤组织诱导和不定芽发生的研究

首次成功建立阳桃胚乳组织培养并获得胚乳再生植株。胚乳愈伤组织诱导以培养基MS 2,4-D2．0mgL^-1 BA0．2mgL^-1的效果最好,诱导频率可达94．7％,愈伤组织乳白色,结构致密,生长旺盛;将其接种在培养基MS ZT3．0mgL^-1 NAA0．2mgL^-1上,愈伤组织由乳白色致密型转变为淡绿色致密型,进而形成绿色芽点,分化出不定芽,分化频率可达73．3％;胚乳植株在培养基MS ZT2．0-2．5mgL^-1 NAA0．05mgL^-1上进行壮苗和营养繁殖。     

费约果外植体灭菌及愈伤组织的诱导

以费约果(Feijoa sallowiana Berg.)嫩叶和带芽茎段作为外植体,研究费约果愈伤组织诱导的最佳条件和方法.结果表明:(1)最佳基本培养基是MS;(2)二步灭菌法优于一步灭菌法;(3)嫩叶和带芽茎段愈伤组织诱导的最佳活性炭浓度分别为2.0 g L-1和3.0 g L-1;(4)最佳青霉素浓度分别为200 mg L-1和50 mg L-1;(5)光培养方式优于暗培养方式.(6)费约果嫩叶诱导愈伤组织的最佳培养基是MS 2.0 mgL-1 2,4-D 1.0 mg L-1 KT(或0.1 mg L-1NAA);(7)带芽茎段的最佳培养基是MS 1.0 mg L-16-BA 0.5 mg L-1NAA 1.0 mg L-1GA或MS 2.0 mg L-16-BA 0.1 mgL-1NAA 1.0 mgL-1GA.     

血叶兰的组织培养与快速繁殖

以血叶兰的嫩茎段为外植体, 建立了血叶兰的组培快繁体系。结果表明： 芽诱导最适宜的培养基是MS＋6-BA 5.0 mg·L-1; 最适芽增殖培养基为MS＋6-BA 5.0 mg·L-1＋NAA 0.5 mg·L-1＋TDZ 0.3 mg·L-1, 芽增殖率达4.92倍; 最佳壮苗培养基为MS＋NAA 0.3 mg·L-1＋GA3 1.0 mg·L-1＋15%椰汁, 芽苗高度达到4.33 cm, 芽粗为0.61 cm; 生根最适培养基为1/2MS＋IBA 1.0 mg·L-1＋15%香蕉＋0.5 g·L-1活性炭, 生根率在93.0%以上; 炼苗后, 移栽在泥炭土＋珍珠岩＋松树皮（3：1：1, V/V/V）混合基质中, 存活率高于87.0%。     

Effects of a contractile prostaglandin antagonist (L-640,035) upon allergen-induced bronchoconstriction in hyperreactive rats and conscious squirrel monkeys

The effects of an antagonist of contractile prostanoids, L-640,035 (3-hydroxymethyl-dibenzo[b,f]thiepin-5-dioxide) upon antigen-induced bronchoconstriction have been studied in inbred rats with non-specific bronchial hyperreactivity and in conscious squirrel monkeys. L-640,035 was a potent inhibitor of antigen-induced dyspnea (ED50 3.1 mg/kg p.o.) in inbred rats pretreated with methysergide (3 micrograms/kg i.v.) but produced no significant inhibition in untreated rats. Administration of L-640,035 (10 mg/kg p.o.) to conscious squirrel monkeys exposed to aerosols of ascaris antigen markedly inhibited changes in pulmonary resistance (RL) and dynamic compliance (CDYN). At a lower dose (1 mg/kg p.o.) the inhibition of changes in CDYN were similar but the effects on RL were reduced. It was concluded first that contractile prostanoids may be important mediators of antigen-induced bronchoconstriction and secondly that L-640,035 may be effective in human allergic asthma.     

春石斛优良品种‘森禾2006’组培快繁体系的建立

本文研究了春石斛‘森禾2006’的拟原球（PLBs）诱导、增殖、分化及壮苗和生根,建立了其组培快繁体系。结果表明：‘森禾2006’PLBs最适诱导培养基为1／2MS＋TDZ0．5mg·L-1＋水解酪蛋白2．0gL-1;PLBs增殖培养基为1／2Ms＋水解酪蛋白2．0gL-1;PLBs分化培养基为1／2MS＋KT1．0mg·L-1＋NAA0．1mg·L-1;壮苗生根培养基为Ms＋IBA0．5mg·L-1＋NAA0．1mg·L-1＋香蕉泥100．0g．L-1。     

太子参细胞悬浮培养及其皂苷含量分析

以太子参的幼叶为外植体,诱导培养获得太子参愈伤组织,并通过细胞悬浮培养获取皂苷.结果表明：用MS＋BA 0.2 mg L^-1＋2,4-D 1.0 mg L^-1＋KT 1.0 mgL^-1液体培养基可获得大量繁殖速度快、生长均匀一致的悬浮细胞.由细胞悬浮培养获得的太子参皂苷的HPLC色谱峰值与常规种植及组培苗的相同,但纯度较好.细胞悬浮培养约30 d时,每克干重细胞的培养液内可提取总皂苷量为2.13-2.92 mg,略低于大田常规种植所收获的每克干重太子参块根内的总皂苷含量（3.6-4.3 mg）,与组培苗收获的太子参块根内的总皂苷含量相近.     

文心兰类原球茎的愈伤组织诱导及其植株再生

该研究首次以文心兰的类原球茎( protocorm-like bodies, PLBs)为外植体进行愈伤组织诱导及其植株再生培养,并分析了不同浓度的TDZ和2,4-D配比对愈伤组织增殖的影响。结果表明：以1/2MS为基本培养基,添加1 mg.L-1 TDZ与3 mg.L-12,4-D,从接种的 PLBs上可以诱导出乳白色的、较疏松的愈伤组织,诱导频率达到100％。愈伤组织继代培养时,在2,4-D浓度为0.5~2.0 mg.L-1的范围内,其增殖主要受TDZ浓度的影响,TDZ浓度从1.0 mg.L-1降低到0.5 mg.L-1,愈伤组织鲜重增殖倍数显著增加,由最低的4.50倍增加到最高的6.04倍。愈伤组织增殖的最适培养基为1/2MS ＋0.5 mg.L-1 TDZ ＋1.0 mg.L-12,4-D。将在最适愈伤组织增殖培养基上继代培养约1个月的愈伤组织转移到T2培养基(3.5 g.L-1花宝1号＋20 g.L-1红薯＋25 g.L-1香蕉＋1 g.L-1 tryptone ＋20 g.L-1蔗糖＋3.5 g.L-1 phytagel)上,黑暗培养1个月后,每克鲜重的愈伤组织约诱导出1328.67个PLBs。将诱导出的PLBs转移到新鲜的T2培养基上光照培养1个月,萌发率为90.12％。而将小植株转移到添加1 g.L-1活性炭的1/2MS培养基上,成苗率达到100％。该研究结果成功建立了文心兰的高频愈伤组织诱导及其植株再生体系,为文心兰基因工程育种提供了一个高效、稳定的转化受体系统。