亚麻胚性细胞悬浮培养体系的建立和影响因素

亚麻品种‘双亚五号’的胚性愈伤组织诱导最佳培养基为MB（MS无机盐加B5维生素）＋1.0mg·L^-12,4-D;细胞初始悬浮培养的最佳培养基为MB＋0.2mg·L-16-BA;细胞继代悬浮培养的最佳培养基为改良的MB（NH4NO3减半,KNO3加倍）＋0.02mg·L^-12,4-D＋0.2mg·L^-16-BA;适宜的蔗糖量为50g·L^-1;适宜的继代接种量为1.0～1.5g·（25mL）^-1;继代间隔为5～7d。     

太子参微块根发育的解剖学与组织化学定位

采用植物组织培养、解剖学及组织化学定位方法研究太子参试管微块根发育的形态结构与营养物质积累特征的结果表明：太子参微块根由组培苗膨大的腋芽基部长出的不定根发育而成,经历了初生结构与次生结构发育,其膨大加粗是由于不定根的次生生长。维管形成层向内形成大量的次生木质部构成微块根的主要部分。淀粉粒是太子参微块根的主要营养存储方式。随着微块根的次生生长,淀粉粒先在次生木质部薄壁细胞中形成,随后在次生韧皮薄壁细胞中也大量积累。膨大的微块根可以合成太子参皂苷,成熟微块根中次生韧皮部的皂苷含量略高于次生木质部。离体太子参微块根的生长发育和营养物质的积累与块根中的相同。     

松潘乌头块根愈伤组织诱导及再生体系的建立

以野生松潘乌头块根为材料,进行愈伤组织诱导与植株再生培养。由于松潘乌头离体培养时,组织褐变严重,因此在愈伤组织诱导前须进行除褐培养,培养基以MS＋6-BA 1.0 mg·L^-1＋VC 300 mg·L^-1＋PVP 200 mg·L^-1效果较好,连续转移3次后褐变率显著降低到10%。适宜的愈伤组织诱导培养基为MS＋2,4-D 3.0 mg·L-1＋6-BA 2.0 mg·L^-1＋LH 500 mg·L^-1,诱导率100%;不定芽分化培养基为MS＋ZT 1.0 mg·L^-1＋6-BA 2.0 mg·L^-1＋NAA 0.5 mg·L^-1,分化率93%;不定芽增殖培养基为MS＋6-BA 2.0 mg·L^-1＋NAA 0.3 mg·L^-1,平均增殖倍数为6.0左右;生根培养基为1/2MS＋IAA 0.3 mg·L^-1＋VC 100 mg·L^-1（或PVP 300 mg·L^-1）,平均生根数10条左右,生根率为96%以上。将瓶苗移栽于森林土和蛭石以1：1（V/V）混合的基质中,生长良好,成活率达90%以上。     

北美鹅掌楸原生质体的分离与培养

以鹅掌楸属植物北美鹅掌楸的悬浮细胞和组培苗叶片为材料,对北美鹅掌楸原生质体分离、纯化与培养条件进行研究.结果表明:叶片和悬浮细胞用含有0.1％2-吗啉乙磺酸(MES)和0.6 mol/L甘露醇的Cell ProtoplastWash(60M-CPW)溶液25℃预处理lh效果最好;悬浮细胞最佳酶解液为60M-CPW+ 1％纤维素酶+1％半纤维素酶+0.2％果胶酶Y-23+0.1％ MES,每克材料25℃酶解6h有效原生质体产量可以达到3×106个;叶片最佳酶解液为60M-CPW+2％纤维素酶+1％半纤维素酶+0.2％果胶酶Y-23+0.1％ MES,每克材料25℃酶解10 h有效原生质体产量可以达到11×106个;悬浮细胞原生质体易于培养,在KM8p+1.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-BA培养基中培养25 d可形成肉眼可见的愈伤组织.     

刺葡萄幼胚愈伤组织诱导及其高产原花青素细胞系筛选

以刺葡萄幼胚为材料,研究不同培养方式、培养基配方和培养条件对其愈伤组织诱导的影响,采用正交试验设计法筛选刺葡萄愈伤组织继代增殖的培养基配方,并对继代保持的培养条件和方式进行优化,同时进行了高产原花青素刺葡萄愈伤组织细胞系的筛选研究。结果表明,刺葡萄幼胚以平放的方式接种到MS＋1.0 mg·L^-1 2,4-D或MS＋1.0 mg·L^-1 2,4-D＋0.5mg·L^-1 KT的固体培养基上,在黑暗的条件下,能有效的诱导出愈伤组织,诱导效率为80%;刺葡萄愈伤组织继代增殖以MS＋1.5 mg·L^-1 2,4-D或MS＋1.5 mg·L^-1 2,4-D＋0.5 mg·L^-1 KT的固体培养基为佳,并且采用此两种培养基交替继代培养,在光照条件下能长期保持旺盛且生长一致的刺葡萄愈伤组织;筛选出了紫红色松脆状的高产原花青素的刺葡萄愈伤组织细胞系,培养35 d后每克鲜样的原花青素含量可达1 671.16μg。     

皱皮木瓜愈伤组织诱导与快速繁殖

以皱皮木瓜（Chaenomeles speciosa）当年生枝条的茎尖和茎段为外植体进行离体培养与快速繁殖。结果表明：芽萌发及愈伤组织诱导的最佳培养基是MS＋2.0mg·L^-1 6-BA＋1.0mg·L^-1NAA;愈伤组织分化最佳培养基是MS＋1.0mg·L^-1 6-BA＋0.05mg·L^-1NAA;芽增殖最佳培养基是MS＋1.0mg·L^-1 6-BA＋0.05-0.1mg·L^-1NAA,其增殖系数为6.59;最佳生根培养基是1/2MS＋1.0mg·L^-1IAA,生根率为86.7%;采用珍珠岩二步移栽,成活率可达90%以上。     

毛白杨悬浮细胞系的建立及再生植株的获得

以毛白杨基因型TC152无菌苗为材料,研究毛白杨悬浮细胞系建立与植株再生,结果表明,通过悬浮培养和固体培养两种方法诱导毛白杨悬浮细胞分化不定芽,最终获得无菌生根苗。愈伤组织在MS＋1.5mg·L-12,4-D＋30g·L-1蔗糖的液体培养基中振荡培养,12d可建立悬浮细胞系;悬浮细胞系继代培养基为MS＋0.8mg·L-12,4-D＋30g·L-1蔗糖,继代周期为7d,悬浮细胞在MS＋1.0mg·L-16-BA＋0.1mg·L-1NAA＋0.5～1.0mg·L-1ZT＋30g·L-1蔗糖培养基中悬浮培养,可分化大量不定芽,每个培养瓶中可得到40～50个芽,个别不定芽玻璃化;不定芽在1/2MS＋0.6mg·L-1IBA＋20g·L-1蔗糖＋5.5g·L-1琼脂培养基上可分化不定根。悬浮细胞通过固体平板培养增殖为愈伤组织块后,在MS＋1.0mg·L-16-BA＋0.1mg·L-1NAA＋1.0mg·L-1ZT＋30g·L-1蔗糖＋5g·L-1琼脂的固体培养基上,不定芽分化率可达到70.00%。     

太子参试管微块根形成及其应用初探

太子参组培苗单茎节段插入含45g·L^-1蔗糖的MS培养基中,于60μmol·m^-2·s^-1光照强度下培养120d后,其节部位长出不定根膨大形成与太子参体内块根相似、重量约为块根1/20的微块根,平均每株可形成1.54个微块根。微块根移植入大田后,其生长特性和物候期与大田块根相似,都有低温萌芽、高温休眠的特性;开花结果、不定根膨大、块根成熟等也相似。同时,组培中的微块根还具有易培养、耐贮存、体积小、易移栽和繁殖系数高等优点,在生产中具有很大的应用潜力。     

油樟悬浮培养及次生代谢产物的诱导

以油樟（Cinnamomum longepaniculatum）叶片为外植体在附加6-BA和NAA不同激素浓度组合的MS培养基上筛选质地疏松、生长旺盛的愈伤组织,分别接种在MS、B5、WPM三种液体培养基中进行细胞悬浮培养,并检测诱导产生的次生代谢产物。结果表明：2mg·L^-16-BA＋0.5mg·L^-1NAA能诱导质地疏松、生长旺盛的愈伤组织,B5基本培养基中细胞长势最好;愈伤组织在B5＋2mg·L^-16-BA＋0.5mg·L^-1NAA中悬浮培养,继代2次后形成均一的单细胞;从油樟悬浮培养物中检测出50%以上的成分是苯甲醇。     

栽培太子参块根中皂苷的组织化学定位及其含量变化

应用植物解剖学、组织化学定位及植物化学技术,研究了栽培太子参块根不同发育时期的结构特征与皂苷积累的关系.结果表明:太子参不定根的初生结构和次生结构类似一般草本双子叶植物根的特征.在成熟的块根中次生木质部约占80%,其中以木薄壁组织细胞为主.导管很少,次生韧皮部中也以薄壁组织细胞居多,从而形成纺锤状块根.组织化学定位显示,在根的初生结构中,皂苷分布在中柱鞘和初生韧皮部的薄壁组织细胞中.在次生结构与成熟块根中,皂苷分布在除木栓层及导管外的周皮及次生维管组织其它细胞中,其中次生韧皮部显色较深.植物化学检测结果表明,2月与7月块根的皮部中皂苷的含量高于木部,与组织化学结果一致:根头部的皂苷含量＞根尾部＞根中部.在块根的发育过程中,皂苷的含量存在高一低一高的动态特点,此种变化规律与其根系的发育特点相关.     

Studies on Fermentation Culture of Cells of Panax notoginseng

The saponin content of Panax notoginseng cell cultures-was 11.14% of dry weight, the saponin yield was 1513.3mg· L-1, and yield of cell cultures was 13.58g dry wt · L-1 per month in fermentation culture, which were all better than those obtained from in suspension culture. Increasing inoculum quantity could obviously increase growth rate, saponin content and yield of cell cultures. An aeration rate of 0.8vvm was optimal for fermentation culture of the cells. The pH value of the culture broth went down from 5.80 to 3.92 gradually and never returned in fermentation culture of P. notoginseng cells.     

柠檬醛猴樟茎段组织培养技术研究

柠檬醛猴樟是重要的园林绿化、用材、油用树种。以柠檬醛猴樟一年生枝条为材料,研究采集季节、消毒时间、激素对柠檬醛猴樟茎段组织培养的影响。结果表明：5月中旬,柠檬醛猴樟半木质化茎段组织培养用浓度为0.1% HgCl₂消毒5 min,茎段腋芽萌芽率最高,褐化率和污染率较低。猴樟茎段萌芽适宜培养基为MS+1.0 mg·L^-1 6-BA+0.05 mg·L^-1 IBA,萌芽率为60%。增殖适宜培养基为MS+1.0 mg·L^-1 6-BA+0.2 mg·L^-1 IBA,增殖系数为4.33、株高为3.67 cm、地径为1.04 mm。生根培养11 d基部出现不定根,生根适宜培养基为MS+1.5 mg·L^-1 IBA,生根率75.00%、根长5.06 cm、根数3.50、根粗0.82 mm。根数大于3的组培苗,移栽成活率80%以上。     

Micropropagation of <Emphasis Type="Italic">Arnebia hispidissima</Emphasis> (Lehm). DC. and production of alkannin from callus and cell suspension culture

Alkannin, a red-purple dye and bioactive compound found in the roots of Arnebia hispidissima has antibiotic and anti-inflammatory properties and is also used in cosmetic and textile industries at a large-scale. In the present communication, we demonstrate the establishment of callus and cell suspension culture of A. hispidissima with the aim of optimizing the production of alkannin. Highest alkannin content was recorded in cell suspension and callus culture established on M-9 medium. Production of alkannin was influenced by the different culture medium. Evaluation of alkannin content of roots of field-grown plants and in vitro grown cell, tissue and organ showed that alkannin production was higher in all in vitro grown culture systems (cell suspension, callus and roots) than the roots of field-grown plants. The present investigation may be applicable in designing systems for the large-scale cultivation of A. hispidissima cell suspensions for the production of alkannin.     

Establishment of Orthosiphon stamineus Cell Suspension Culture for Cell Growth

Callus of Orthosiphon stamineus could be induced successfully from petiole, leaf and stem tissues but not roots when cultured on MS medium containing different concentration of NAA (0–4.0 mg l^–1) and 2,4-D (0–2.0 mg l^–1). Highest fresh weight callus production was obtained from leaf explants and those with best friability were obtained on MS medium plus 1.0 mg l^–1 2,4-D plus 1.0 mg l^–1 NAA. Cell suspension cultures were established from these cultures. The appropriate cell inoculum size for the best cell growth was 0.75 g of cells in 20 ml culture medium. Cell suspension culture using MS medium supplemented with 1.0 mg l^–1 2,4-D promoted the best cell growth with maximum biomass of 8.609 g fresh weight and 0.309 g dry weight 24 days after inoculation. Cells that grew in MS medium supplemented with 1.0 mg l^–1 2,4-D reached the stationary growth phase in 15 days as compared to the cells that grew in MS medium supplemented with 1.0 mg l^–1 2,4-D + 1.0 mg l^–1 NAA reached the stationary phase in 24 days. MS medium supplemented with 1.0 mg l^–1 2,4-D was considered as the maintenance medium for maintaining the optimum cell growth of O. stamineus in the cell suspension cultures with 2-week interval subculture.     

广西绞股蓝的组织培养和快速繁殖

广西绞股蓝是极具开发潜力的绞股蓝属植物。以其茎尖和叶片为外植体进行的组织培养试验表明,茎尖为最适的外植体,愈伤组织诱导和不定芽增殖的最适培养基为MS+6-BA 1.0mg.L-1+NAA 0.02mg.L-1,在此培养基中,茎尖和叶片的愈伤组织诱导率平均达95%,丛芽增殖系数平均达14。广西绞股蓝最适的生根培养基为MS+NAA 0.20mg.L-1,生根率92.50%。炼苗后组培苗的移栽成活率达95.5%。     

三七.人参和西洋参细胞悬浮培养的比较研究

用薄层层析对三七、人参和西洋参愈伤组织进行的初步鉴定表明,三种愈伤组织都含有皂甙和主要皂甙成分Rb_1、Rg_1,三七愈伤组织还含有一种抗癌皂甙Rh_1。对愈伤组织的生长,三七低于人参高于西洋参;对愈伤组织中总皂甙含量,三七均高于人参和西洋参。三种植物细胞悬浮培养结果类似于他们的愈伤组织培养,但生长又进一步提高。三七细胞悬浮培养中皂甙产生的时间进程几乎与生长平行,合适的收获期为培养30天。寡糖素不仅增强三七培养细胞的皂甙形成而且促进细胞生长,较合适的浓度为1.25 ppm。通过以上研究,使三七悬浮培养细胞的生长(干重增加178毫克)为最初培养愈伤组织的4倍以上,总皂甙产率高达20.6毫克,为最初培养愈伤组织的8.5倍。     

羊草与灰色赖草F1代细胞悬浮系的建立及植株再生

本研究以羊草(L eym us ch inensis)与灰色赖草(L eym us cinereus)杂种F1代幼穗为外植体诱导愈伤组织,在3.0 m g/L 2,4-D M S培养基上继代1次后,转入不同浓度激素(2,4-D、IAA、KT)配比和不同浓度蔗糖的M S液体培养基进行振荡培养,建立杂种F1代细胞悬浮系和植株再生体系.结果表明,细胞悬浮培养时,M S 1.0 m g/L2,4-D 0.1 m g/L KT 4%蔗糖的液体培养基最佳;悬浮细胞分化时,1.0 m g/L 2,4-D 0.1 m g/L KT 4%蔗糖 M S和1.0 m g/L 2,4-D 4%蔗糖 M S培养的悬浮细胞在1.0 m g/L NAA 0.5 m g/L KT M S分化培养基上的绿苗分化率分别达到83%和80%.细胞悬浮系及再生体系的建立为杂种F1代育性恢复的研究奠定了基础.     

南荻的组织培养与快速繁殖技术

以南荻幼穗为外植体,进行了组织培养与快速繁殖技术的研究。结果表明：最佳诱导培养基：MS＋2.0mg·L-12,4-D＋0.1mg·L-16-BA＋0.5g·L-1水解酪蛋白＋0.5g·L-1脯氨酸;最佳分化培养基：MS＋0.5mg·L-1NAA＋0.5mg·L-1KT＋0.5mg·L-1IAA＋2.0mg·L-16-BA＋0.5g·L-1水解酪蛋白＋0.5g·L-1脯氨酸;最佳生根培养基：MS＋1.0mg·L-1NAA＋0.25mg·L-1Met。炼苗后,移入营养土与珍珠岩（1：1）的基质中,移栽成活率高达100%。该体系的建立为南荻规模化生产及遗传改良提供了前提条件。     

费约果外植体灭菌及愈伤组织的诱导

以费约果(Feijoa sallowiana Berg.)嫩叶和带芽茎段作为外植体,研究费约果愈伤组织诱导的最佳条件和方法.结果表明:(1)最佳基本培养基是MS;(2)二步灭菌法优于一步灭菌法;(3)嫩叶和带芽茎段愈伤组织诱导的最佳活性炭浓度分别为2.0 g L-1和3.0 g L-1;(4)最佳青霉素浓度分别为200 mg L-1和50 mg L-1;(5)光培养方式优于暗培养方式.(6)费约果嫩叶诱导愈伤组织的最佳培养基是MS 2.0 mgL-1 2,4-D 1.0 mg L-1 KT(或0.1 mg L-1NAA);(7)带芽茎段的最佳培养基是MS 1.0 mg L-16-BA 0.5 mg L-1NAA 1.0 mg L-1GA或MS 2.0 mg L-16-BA 0.1 mgL-1NAA 1.0 mgL-1GA.