Asn-Ala-Gly-Ala及Asn-Ala-Gly-Ala-Asn在溶液中的构象—远紫外圆二色性

用远紫外圆二色性研究了四肽Ash-Ala-Gly-Ala和Asn-D-Ala-Gly-Ala-NH_2及五肽Asn-Ala-Gly-Ala-Asn的构象。在低pH的水溶液中,五肽给出一正一负的峰,正的在215nm,负的在232.5nm。[θ]_(215)随pH的关系类似滴定曲线。推想此时呈β-转角。在近中性或碱性水溶液中,圆二色谱只有195nm的负峰,因此呈无规卷曲。pH5.8时加乙醇或三氟乙醇至90%,五肽给出218nm附近的负峰。设想此时分子呈类β-折迭。NAGA给出215nm附近的正峰,但没有负峰。讨论了此分子呈现β-转角的可能性。NDAGA只有在196nm附近的负峰,因此推测它具无规卷曲。潘小平等报道,上述肽都有镇痛作用,看来这种作用与分子的立体结构无关。     

东亚马氏钳蝎(Buthus martensi karsch)蝎毒神经毒素的园二色性研究

本文研究了从东亚马氏钳蝎中纯化的神经毒素BmKⅢ的园二色性,并对不同类型毒素的CD光谱进行了比较.BmKⅢ在水溶液中的近紫外CD谱在274和290nm处显示二正峰,279nm处显示一肩峰.远紫外CD谱在209nm处呈一强负峰,为典型的β-折迭图谱.在中性水溶液中,其主链构象参数分别为4.0%α-螺旋,63%B-折迭,33%无规卷曲和回折.溶液的pH对BmKⅢ的构象影响不大,但分子在碱性溶液中构象的变化较之中性及酸性溶液稍大.温度的升高对其分子的构象有影响,但这种温度诱导的构象变化是可逆的.SDS的加入可诱导β-折迭转变为α-螺旋.在同时存在β-疏基乙醇时,分子的有序结构完全消失.几种不同的哺乳动物神经毒素以及它们同甲壳动物神经毒素的比较研究指出,它们的远紫外CD谱很相似, 但其近紫外CD谱却有差异,尤其是哺乳动物类同甲壳动物类毒素之间差异更大.     

兔小肠刷状缘膜蔗糖酶—异麦芽糖酶复合体的圆二色光谱研究

在磷酸钾缓冲液中,pH6.8,25℃时,S-I酶复合体的近紫外CD谱显示280～281nm的负峰,293～294nm的正峰。在288,269,和263nm处有3个肩膀。溶液pH值变化和对此酶的热失活处理都能使280～281nm负峰缩小,可能表示酪氨酸残基微环境和酶活力有关。S-I酶复合体的远紫外CD谱显示较大的215nm负峰和较小的192nm正峰,表示其骨架构象以β-折迭和无规卷曲为主。此远紫外CD谱在pH2.3～11范围里维持不变,也不受55℃热失活处理的影响。Na~+和tris对此酶CD谱不产生影响。高浓度盐酸胍能改变其近紫外和远紫外CD谱形。     

东亚马氏钳蝎(Buthus martensi Karsch)神经毒素组分BmK Ⅲ的激光拉曼光谱研究

毒素BmKⅢ是从马氏钳蝎毒液中提取的一个毒性最强的α类神经毒素.从该组分的水溶液和重水溶液拉曼光谱(450—1750cm~(-1))的分析,可以确定其分子的二级结构中以β折迭为主,有较大量的β回折结构和一定数量的无规卷曲,α螺旋不多.采用Lippert提出的线性方程组法计算得到分子中含β折迭41.7%,α螺旋17.7%,无规卷曲40.6%.分子中的四对二硫键均为gauche—gauche—gauche构型.侧链芳香性氨基酸残基大多数暴露在分子表面.文中对有有关毒素构象方面的问题进行了讨论.     

东亚马氏钳蝎(Buthus martensi Karsch)神经毒素组分BmK Ⅲ的激光拉曼光谱研究

毒素BmKⅢ是从马氏钳蝎毒液中提取的一个毒性最强的α类神经毒素.从该组分的水溶液和重水溶液拉曼光谱(450—1750cm~(-1))的分析,可以确定其分子的二级结构中以β折迭为主,有较大量的β回折结构和一定数量的无规卷曲,α螺旋不多.采用Lippert提出的线性方程组法计算得到分子中含β折迭41.7%,α螺旋17.7%,无规卷曲40.6%.分子中的四对二硫键均为gauche—gauche—gauche构型.侧链芳香性氨基酸残基大多数暴露在分子表面.文中对有有关毒素构象方面的问题进行了讨论.     

岩豆凝集素的圆二色性与生物学活性关系的研究

岩豆凝集素（ＭＤＬ）的远紫外圆二色性谱（ＣＤ谱）显示２１６－２１７ｎｍ处的单一负峰。此时ＭＤＬ分子含有１６．２％的α螺旋,４６．３％的β折叠和３７．５％的无规卷曲。ｐＨ９．０时负峰红移至２２０ｎｍ,且在２１７－２２２ｎｍ处的峰值几乎相同;在２０－４０℃范围内,ＣＤ谱的变化甚微;６０℃时谱峰蓝移;在８０℃或１００℃时,２１２ｎｍ处出现一大负峰。１ｍｏｌ／Ｌ或２ｍｏｌ／Ｌ脲时,ＭＤＬ的ＣＤ谱已发生明显     

尖吻蝮蛇毒出血毒素DaHT—3的红外光谱测定

目的观察蛇毒出血毒素结构的变化对功能的影响。方法利用傅利叶变换红外光谱仪对尖吻蝮蛇毒出血毒素（ＤａＨＴ－３）在溶液中酰胺Ｉ带吸收光谱的研究,探测了此出血毒素在溶液中的自然构象和加入ＥＤＴＡ螯合剂除去金属离子后构象的变化。结果此出血毒素在水溶液中的自然构象分别是：α－螺旋为３１．８％、β－折叠为５６．１％、转角为１２．１％;而在去除金属离子情况下α－螺旋和β－折叠减少,转角和无规卷曲增加,即加入螯合剂后其α－螺旋、β－折叠、转角和无规卷曲分别变为１１％、２６．４％、４６．２％和１６．５％。由于结构的变化,它的出血活性和蛋白水解酶活性均被丧失。结论金属离子,特别是锌离子在维系蛇毒出血蛋白酶分子中的二级结构中起着很重要的作用。     

黑曲霉突变株葡萄糖淀粉酶的化学组成及其光谱学性质

黑曲霉突变株葡萄糖淀粉酶中一型GAI舍糖量为17.6%。氨基酸分析表明,天门冬氨酸和谷氨酸(包括酰胺)占20.3%,苏氨酸和丝氨酸占25.1%,三种碱性氨基酸占6%。紫外光谱在278nm和250nm处分别有最大和最小吸收;其荧光光谱的最大激发波长和发射波长分别为284nm与342nm;远紫外CD谱表现为一双负峰;在溶液中的构象是α-螺旋10.6%,β折叠16.3%和无规卷曲73.1%。     

胰岛素类似物的内源萤光光谱

为了进一步了解胰岛素构象与功能的关系,测定了不同条件下胰岛素和它的类似物的内源萤光光谱,胰岛素类似物包括去B链羧端五肽胰岛素,去B链羧端七肽胰岛素和去B链羧端八肽胰岛素。它们的发射光谱的峰在306nm,激发光谱峰在277nm。不同pH值,不同浓度的十二烷基硫酸钠和温度变化对胰岛素的荧光光谱的影响和对类似物的影响非常相似。说明这些类似物的环境酪氨酸残基的微环境是相似的。由于去五肽胰岛素有接近于天然胰岛素的生物活力,去七肽胰岛素没有生物活力,因此说明,胰岛素分子的受体结合部位中,B_(24～25)两个苯丙氨酸侧链本身具有重要的地位。并不是因为失去它们后引起胰岛素构象变化而失活的。     

胰岛素类似物的内源萤光光谱

为了进一步了解胰岛素构象与功能的关系,测定了不同条件下胰岛素和它的类似物的内源萤光光谱,胰岛素类似物包括去B链羧端五肽胰岛素,去B链羧端七肽胰岛素和去B链羧端八肽胰岛素。它们的发射光谱的峰在306nm,激发光谱峰在277nm。不同pH值,不同浓度的十二烷基硫酸钠和温度变化对胰岛素的荧光光谱的影响和对类似物的影响非常相似。说明这些类似物的环境酪氨酸残基的微环境是相似的。由于去五肽胰岛素有接近于天然胰岛素的生物活力,去七肽胰岛素没有生物活力,因此说明,胰岛素分子的受体结合部位中,B_(24～25)两个苯丙氨酸侧链本身具有重要的地位。并不是因为失去它们后引起胰岛素构象变化而失活的。     

岩豆凝集素分子修饰与圆二色性的关系研究

天然态岩豆凝集素（ＭＤＬ）远紫外圆二色性（ＣＤ）谱显示２１６ｎｍ处单一负峰,是一种高β－折叠构象凝集素;近紫外ＣＤ谱呈现２８２ｎｍ处负峰和２６０～２７５ｎｍ及２９５ｎｍ处的负肩,经Ｎ－乙基顺丁烯二酰亚胺（ＮＥＭＩ）和对氯汞苯甲酸（ＰＣＭＢ）修饰ＭＤＬ的巯基,其近紫外ＣＤ谱未发生变化,远紫外ＣＤ谱仅发生细微变化,ＭＤＬ凝集活性保持不变;ＰＣＭＢ过量时,ＣＤ谱呈现典型的无规卷曲谱形,ＭＤＬ完全丧失凝集活性,去除ＰＣＭＢ后,活性又全部恢复．二硫苏糖醇（ＤＤＴ）修饰ＭＤＬ的二硫键并用碘乙酸（ＩＣＨ２ＣＯＯＨ）保护巯基,ＭＤＬ远紫外ＣＤ谱２１６ｎｍ处的负峰红移至２２５ｎｍ,且显著减小;同时,近紫外ＣＤ谱２８２ｎｍ处负峰几乎消失,两负肩分别保持完整,分子中α－螺旋降低,无规卷曲增加较多,ＭＤＬ凝集活性未发生变化．用Ｎ－溴代丁二酰亚胺（ＮＢＳ）修饰ＭＤＬ分子中的色氨酸,导致２１６ｎｍ负峰蓝移至２０８ｎｍ且变小,分子中无规卷曲和α－螺旋增加,β折叠减少,近紫外ＣＤ谱２９５ｎｍ负肩消失,２８２ｎｍ负峰红移至２８７ｎｍ,ＭＤＬ凝集活性完全丧失．     

高粱叶片磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶溶液构象状态的紫外差示吸收光谱研究

PEP诱导产生的差光谱在237nm是一强负峰,在252nm附近呈宽负峰。Mg~(2+)产生的差光谱在275nm附近为正的阔峰,在237nm处为一负峰。PEP、Mg~(2+)共同与酶作用的差光谱在263nm附近呈宽的负峰。正效应剂G6P、Gly及GG分别存在条件下PEP羧化酶的差光谱亦各具明显差异,在270nm以下光区内尤其显著。在284nm和291nm为两个负峰,Gly诱导的峰强度大于G6P的,而GG复合效应剂对此两峰的影响表现很大的协同作用。Mal作用于酶的差光谱在246nm处有一负峰。     

岩豆凝集素的圆二色性与生物学活性关系的研究

岩豆凝集素（ＭＤＬ）的远紫外圆二色性谱（ＣＤ谱）显示２１６－２１７ｎｍ处的单一负峰。此时ＭＤＬ分子含有１６．２％的α螺旋,４６．３％的β折叠和３７．５％的无规卷曲。ｐＨ９．０时负峰红移至２２０ｎｍ,且在２１７－２２２ｎｍ处的峰值几乎相同;在２０－４０℃范围内,ＣＤ谱的变化甚微;６０℃时谱峰蓝移;在８０℃或１００℃时,２１２ｎｍ处出现一大负峰。１ｍｏｌ／Ｌ或２ｍｏｌ／Ｌ脲时,ＭＤＬ的ＣＤ谱已发生明显变化,二级结构单元也有变化,凝集兔红细胞的活性也随之减弱;随脲浓度的增加,ＭＤＬ的谱峰蓝移,最终在２１２ｎｍ处出现大负峰。当胍浓度为０．７５ｍｏｌ／Ｌ时,ＭＤＬ的ＣＤ谱即有明显变化和活性丧失;胍浓度继续增加,ＣＤ谱逐渐成为特征的无规卷曲的谱形。在ｐＨ９．０、温度超过８０℃、脲或胍浓度分别高于２ｍｏｌ／Ｌ和０．７５ｍｏｌ／Ｌ时,ＭＤＬ的ＣＤ谱发生显著变化的同时,其凝集兔红细胞的生物学活性全部丧失,分子的二级结构单元也发生很大改变。     

用圆二色性探测绿豆胰蛋白酶抑制剂的构象

绿豆胰蛋白酶抑制剂的紫外圆二色谱与一般球状蛋白质不同,属典型的Bowman-Birk抑制剂的图形,具有231nm正峰,245nm肩,275nm负峰及202nm大负峰。异硫氰酸苯酯修饰Lys活力中心后,使抑制剂失去一半活力,但CD谱变化不大。溴化氰处理后,抑制剂Arg活力区破坏,231nm峰消失,202nm峰变小。这两个峰可能与抑制剂特定的硫-硫键构象有关。研究了此抑制剂及上述衍生物与羊胰蛋白酶形成的络合物的CD谱。从CD谱看,羊胰蛋白酶属无规卷曲。络合物CD谱与两游离组分CD谱的加和谱比,有一些不同,但大体上是相似的。因此,络合物中两组分的构象与游离时的构象大体上相似。     

用圆二色性探测绿豆胰蛋白酶抑制剂的构象

绿豆胰蛋白酶抑制剂的紫外圆二色谱与一般球状蛋白质不同,属典型的Bowman-Birk抑制剂的图形,具有231nm正峰,245nm肩,275nm负峰及202nm大负峰。异硫氰酸苯酯修饰Lys活力中心后,使抑制剂失去一半活力,但CD谱变化不大。溴化氰处理后,抑制剂Arg活力区破坏,231nm峰消失,202nm峰变小。这两个峰可能与抑制剂特定的硫-硫键构象有关。研究了此抑制剂及上述衍生物与羊胰蛋白酶形成的络合物的CD谱。从CD谱看,羊胰蛋白酶属无规卷曲。络合物CD谱与两游离组分CD谱的加和谱比,有一些不同,但大体上是相似的。因此,络合物中两组分的构象与游离时的构象大体上相似。     

萱草花粉中微管蛋白生物化学性质

微管（microtubule）是细胞骨架的重要成份,参与囊泡运输、信息传递等多种生命活动。我们从萱草花粉中纯化了植物微管蛋白,对其生物化学及生物物理学部分性质研究表明,纯化的微管蛋白经超离心法测定沉降系数为6．2S,SDS-PAGE分析α,β微管蛋白分子量为56kD、58kD,凝胶扫描分析纯度为93．7％。等电聚焦电泳测定等电点为pI=5．35。光谱学性质研究结果表明,最大紫外吸收峰为280．8nm,荧光光谱研究表明最大激发波长为282nm;此时的最大发射峰为338nm,圆二色光谱分析二级结构表明小螺旋占27．24％,β-折叠占24．48％,无规卷曲为48．28％,呈典型球蛋白特征。     

SOD活性对高温酵母菌株乙醇忍受性的影响

研究了超氧化物歧化酶（SOD）活性与乙醇忍受性关系。结果表明,环境pH改变导致SOD构象及活性变化。酸性条件下,SOD在220nm波长附近吸收峰紫移,酶活性减弱或丧失,热致死最高温度降低;中、碱性条件（pH7～9）下,220nm波长附近吸收峰红移,酶活性及热致死温度未发生显著性改变。热休克和乙醇预处理MnSOD、CuZnSOD缺失菌株,不同程度提高细胞存活率,证实了MnSOD比CuZnSOD对菌株乙醇抗性起了更为重要的作用．     

火菇素的溶液二级结构与变性动力学

为了弄清抗肿瘤活性物质火菇素蛋白的二级结构及其活性在保存时自然衰减的规律 ,为临床应用提供依据 ,测定了火菇素的圆二色性并用蛋白质二级结构解析程序分析了火菇素的溶液二级结构 ,研究了火菇素的变性动力学 .火菇素的远紫外圆二色性的研究表明 ,其水溶液在 2 0 8nm处表现为大负峰 ,最大平均残基摩尔椭圆度 [θ]2 0 8=- 6574deg·cm2·dmol-1,在 2 2 3nm处为肩 .经二级结构解析程序计算分析 ,火菇素的二级结构组成为 :α螺旋 1 5.2 % ,平行 β折叠片和 β转角6.1 % ,反平行 β折叠片 32 .7% ,无规卷曲和 γ转角 2 3.4% ,其中二硫键和芳香氨基酸对火菇素圆二色性的贡献占 2 2 .6% .热变性几乎使所有的二级结构都遭到破坏 ,转化为无规卷曲 .利用已建立的火菇素免疫单向琼脂扩散定量检测技术 ,对在 4℃下保存的火菇素进行了长期跟踪检测 ,结果表明 ,在保存过程中火菇素的活性逐步降低 ,同时其二级结构也被破坏 .根据实验结果 ,建立了火菇素变性的一级动力学方程模型 :ct=coe-t/τ,该模型方程能很好地拟合实验结果 .根据模型方程计算的火菇素的寿命为 370 d,半衰期为 2 56d.说明火菇素这种很有应用前景的抗肿瘤药物比较容易长期保存 .     

天花粉蛋白小结构域N端TCS182—200同源片段的构象研究

以天花粉蛋白小结构域Ｎ端ＴＣＳ１８２－２００同源片段序列为基础,设计Ｔ１４,Ｔ１８和ＴＤＫ３个模型肽。本文分析了模型肽的肽链柔性和侧链两亲性,预测二级结构形成势,并通过多肽固相合成和圆二色性研究模型肽的溶液二级结构,比较理论预测和实测结果。在水溶液中,Ｔ１８为β－折叠,ＴＤＫ含有一定量α－螺旋;而Ｔ１４基本上为无规卷曲,但在碱性条件下有类似螺肇的亚稳结构存在。     

用2D—NMR测定人卵泡促性腺激素释放肽（hF—GRP）的溶液构象

人卵泡促性腺激素释放肽是１９８７年才被发现的一种激素类１４肽,本文利用２Ｄ－ＮＭＲ技术首先测定了它的溶液构象,在残基归属的基础上,据ＲＯＥＳＹ距离信息得到该１４肽的初步构象为,羧基端三个残基是运动性较大的无规卷曲,氨基端Ｔｈｒ１的侧链靠近主链,Ｈｉｓ１０－Ｐｒｏ１１间的肽链以ｔｒａｎｓ构型占优势,在Ｓｅｒ４－Ｈｉｓ５－Ｈｉｓ６区域可能形成一个部分类似β－转角Ⅱ的弯曲。