7号淀粉酶链霉菌M1033菌株木糖异构酶晶体结构研究

7号淀粉酶链霉菌M1033菌株木糖异构酶(SDXyI).19nm分辨率晶体结构已经解出.晶体空间群为I222,晶胞参数为a=9.884nm,b=9.393nm,c=8.798nm.参考锈赤链霉菌木糖异构酶(SRXyI)的晶体结构模型,通过分析晶体密堆积关系和晶体学R因子搜索,获得了SDXyI晶体结构的初始模型.采用PROLSQ软件包使用0.60～0.19nm分辨率衍射数据对模型进行了修正.最终模型的晶体学R因子为0.177,键长键角均方根偏差分别为0.0019nm和2.1°.与SRXyI相比较,SDXyI整体构象未发生明显变化,活性中心构象有显著差异.     

Crystal structure of Streptomyces diastaticus No. 7 strain M1033 xylose isomerase

The crystal structures of Streptomyces diastaticus No. 7 strain M1033 xylose isomerase (SDXyI) have been analysed and refined at 0.19nm. The crystal space group is I222, with unit cell dimensions of a=9.884 ran, b=9.393nm and c=8.798nm. Based on the coordinates of the Streptomyces rubiginosus xylose isomerase (SRXyI), the initial model of SDXyl was built up by the dose packing analysing and R-factor searching and refined by PROLSQ to a final R-factor of 0.177 with the rms deviations of bond lengths and bond angles of 0.001 9nm and 2.1°, respectively. No significant global conformation change existed between SRXyI and SDXyI except the local conformation in the active site.     

GI双突变体GIK253RA198C的构建及其性质分析

以双引物法对葡萄糖异构酶（GI）基因进行定点突变,将突变体基因于大肠杆菌中表达,获得了GI双点突变体GIK253RA198C.研究K253R和A198C双点突变对GI的结构和性质的作用,结果表明GIK253RA198C的热稳定性明显下降,最适反应温度降低5℃.文章从结构和机制上解释了为何同是K253R突变,对SM33 GI和密苏里游动放线菌GI的热稳定性产生不同的影响,认为这是由于Lys253在两种GI结构的位置上存在微小差异,从而使引入的Arg对亚基间的相互作用产生了相反效应所引起.     

快原子轰击质谱法测定肽序列

本文通过对合成的五肽胃泌素及人类粒细胞慢性白血病蛋白P₂₁₀的抗原簇十肽的研究,探讨了小肽氨基酸序列直接测定的快原子轰击质谱法(FABMS)。从谱图中可以观察到显著的分子量信息和序列离子,并由此确定出肽的氨基酸序列。结果表明,一般C-端无碱性氨基酸时肽链比较容易形成N-端序列离子。 对掺杂有氧化态的还原型谷胱甘肽及其经巯基乙醇处理后的混合物FAB谱图的研究表明,后者具有更强的分子离子峰和更完整的序列离子,为含有胱(半胱)氨酸的肽序列分析提供了一个方法。     

7号淀粉酶链霉菌M1033木糖异构酶基因的启动子活性检测、转录起始点的确定

分别从重组质粒ｐＵＢ１及其Ｍ（１３）亚克隆Ｓ１中将７号淀粉酶链霉菌（ＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｄｉａｓｔａｔｉｃｕｓＮｏ．７）Ｍ１０３３（以下简称Ｓ．ｄｉ．Ｍ１０３３）木糖异构酶基因的－１９２－＋５８１ｂｐ片段克隆入链霉菌启动子探测质粒ｐＩＪ４０８３中,转化变铅青链霉菌（Ｓ．ｌｉｖｉｄａｎｓ）ＴＫ２４。通过对其邻苯二酚加双氧酶活性的检测表明,该片段具有启动子活性。应用Ｍ１３亚克隆Ｓ１和合成引物Ｐ６延伸制备放射性标记的单链ＤＮＡ探针;通过Ｓ．ｄｉ．Ｍ１０３３的总ＲＮＡ的Ｓ１核酸酶保护实验,确定了其转录的起始位点,并由此探讨了与木糖异构酶基因表达有关的一些因素。     

尖吻蝮蛇(Agkistrodon acutus)蛇毒的研究——Ⅰ.三个毒性组分的纯化

从尖吻蝮(五步蛇)蛇毒中用DEAE-Sephadex A-50,Sephadex G-75,DEAE 纤维素和CM-Sephadex C-25柱层析分离纯化,得到三个毒性组分,分别简称为AaT-Ⅰ,AaT-Ⅱ和AaT-Ⅲ。经聚丙烯酰胺凝胶电泳和琼脂免疫电泳鉴定,均表现均一。AaT-Ⅰ和AaT-Ⅱ是酸性蛋白质,等电点分别是4.6及5.3。AaT-Ⅲ是碱性蛋白质,pI>9。它们的分子量均约为22000。     

Mg~(2+)、Co~(2+)、Mn~(2+)和Ca~(2+)对葡萄糖异构酶活性的影响

Ｄ－木糖异构酶（ＥＣ５．３．１．５）能催化醛糖Ｄ－木糖至酮糖Ｄ－木酮糖的转化,又能催化Ｄ－葡萄糖至Ｄ－果糖的异构化反应．故被称为葡萄糖异构酶（ＧＩ）．一般认为,葡萄糖异构酶存在二种作用机制：烯醇化和氢转移机制．对我国自行筛选的链霉菌Ｎｏ．７Ｍ１０３３菌株葡萄糖异构酶的晶体结构研究表明［１］,异构化可能是采用氢转移机制．这一机制认为催化需要半径≤０．０８ｎｍ的二价金属离子如Ｍｇ２＋、Ｃｏ２＋和Ｍｎ２＋等激活,而离子半径＞０．０８ｎｍ的二价金属离子则对酶的活性有抑制作用．Ｍｇ２＋、Ｃｏ２＋和Ｍｎ２＋…     

尖吻蝮蛇(Agkistrodon acutus)蛇毒出血毒素Ⅰ的萤光光谱、萤光淬灭以及和出血活性的关系

根据徐洵等人的分离方法,我们从皖南山区尖吻蝮蛇蛇毒中得到出血毒素Ⅰ(AaH-1),它的萤光激发峰在284nm,发射峰在350nm,表现出Trp残基的萤光光谱。AaH-1的萤光强度和峰位随pH值的升高而增强且红移,在pH5～6萤光强度出现跃增,活性从无到有。pH7～9萤光强度稳定,出血活性的变化规律与此相似。升温到50℃以上其萤光强度急骤下降,并失活。一定浓度的SDS,EDTA均使AaH-1的萤光强度下降,出血活性也减弱。表明能改变AaH-1的pH环境、构象或使之变性的因素都能使它的萤光强度和出血活性同时发生相应的改变。AaH-1的萤光能分别被Ⅰ~-和丙烯酰胺碰撞淬灭,从萤光峰位和丙烯酰胺淬灭常数,可见Trp残基处于这些淬灭剂可以作用的位置。NBS能氧化AaH-1的Trp残基的吲哚环,而使Trp残基的萤光淬灭,致使AaH-1的活性也相应地减弱,说明Trp残基与出血活性有关。     

胰岛素类似物的内源萤光光谱

为了进一步了解胰岛素构象与功能的关系,测定了不同条件下胰岛素和它的类似物的内源萤光光谱,胰岛素类似物包括去B链羧端五肽胰岛素,去B链羧端七肽胰岛素和去B链羧端八肽胰岛素。它们的发射光谱的峰在306nm,激发光谱峰在277nm。不同pH值,不同浓度的十二烷基硫酸钠和温度变化对胰岛素的荧光光谱的影响和对类似物的影响非常相似。说明这些类似物的环境酪氨酸残基的微环境是相似的。由于去五肽胰岛素有接近于天然胰岛素的生物活力,去七肽胰岛素没有生物活力,因此说明,胰岛素分子的受体结合部位中,B_(24～25)两个苯丙氨酸侧链本身具有重要的地位。并不是因为失去它们后引起胰岛素构象变化而失活的。     

胰岛素类似物的内源萤光光谱

为了进一步了解胰岛素构象与功能的关系,测定了不同条件下胰岛素和它的类似物的内源萤光光谱,胰岛素类似物包括去B链羧端五肽胰岛素,去B链羧端七肽胰岛素和去B链羧端八肽胰岛素。它们的发射光谱的峰在306nm,激发光谱峰在277nm。不同pH值,不同浓度的十二烷基硫酸钠和温度变化对胰岛素的荧光光谱的影响和对类似物的影响非常相似。说明这些类似物的环境酪氨酸残基的微环境是相似的。由于去五肽胰岛素有接近于天然胰岛素的生物活力,去七肽胰岛素没有生物活力,因此说明,胰岛素分子的受体结合部位中,B_(24～25)两个苯丙氨酸侧链本身具有重要的地位。并不是因为失去它们后引起胰岛素构象变化而失活的。