人乳头瘤病毒芯片寡核苷酸探针的研究

高危型人乳头瘤病毒（Human papillomavims,HPV）是宫颈癌的主要致病因子。利用Arraydesigner2．0和BLAST等生物学软件对10种型别的人乳头瘤病毒全基因组序列进行分析,设计高特异性、熔解温度（Tm）和GC含量相近的60mer HPV型特异性寡核苷酸探针,用于HPV检测芯片的制备,并对其中四型最常见HPV病毒（HPV6,11,16,18）探针的有效性进行初步验证,结果表明设计所得的探针型特异性好,可以应用于HPV的检测与分型。     

目视化纳米探针检测宫颈癌组织HPV16E6基因的研究

目的：建立目视化纳米探针检测宫颈癌组织HPV16E6基因的方法,为临床降低HPV感染者宫颈癌的发病率提供技术支持。方法：采用固定于硅烷化片基上的捕获探针,特异性结合单链人乳头瘤病毒16型新疆株E6基因(HPV16E6)扩增片断,再与互补的纳米金颗粒标记的探针结合,通过银染加强显色。结果：初步建立了金标银染法快速检测HPV16E6 DNA的技术。结论：金标银染法灵敏,可以快速特异地检测出各类宫颈组织中人乳头瘤病毒的感染,为进一步应用于临床检测降低新疆维吾尔妇女宫颈癌的发病率奠定了基础。     

HPV病毒检测分型芯片的研制和优化

研制和优化寡核苷酸芯片以初步实现对多种常见HPV(Human papillomavirus)病毒的分型检测.应用生物学软件对四型常见HPV病毒(6、11、16、18型)的全基因组序列进行分析,设计具有型特异性、熔解温度(Tm)相近的～60 mer寡核苷酸探针,对玻片片基进行优化处理后,点样制备成寡核苷酸基因芯片.将含HPV全长基因序列的质粒作为阳性标准品,利用梯度限制性荧光标记技术对其进行荧光标记,标记好的样品与芯片杂交.结果显示HPV样品与相应的型特异性探针杂交有明显的荧光信号,而与阴性对照探针和空白对照探针没有杂交信号.通过对芯片片基处理和样品荧光标记方法的优化,可以提高芯片检测的杂交特异性和荧光信号强度.     

人乳头瘤状病毒分型检测技术研究进展

HPV病毒有100多个亚型,反复持续的高危型人乳头瘤状病毒(Human papillomavirus,HPV)的感染是子宫颈癌发生的必要条件.对其进行分型检测,对子宫颈病变的早期发现和预防有很重要的意义.近年来,HPV分型检测技术发展十分迅速,本文对其相关研究新进展进行综述.     

基于环介导等温扩增技术对人乳头瘤病毒的分型检测

目的:利用环介导等温扩增技术(LAMP)对人乳头瘤病毒(HPV)进行快速分型检测。方法:以HPV59、HPV66和HPV68等3种病毒亚型为实验对象,选择合适的特异性核酸序列作为检测的靶序列并构建质粒,针对每个待检靶序列设计若干组扩增引物,并利用构建的质粒筛选出特异性强、灵敏度高的引物组合;将筛选成功的引物加至微流控芯片上,实现人宫颈脱落上皮细胞样本内HPV的快速核酸分型检测。结果:针对HPV59、HPV66和HPV68这3种病毒亚型,设计筛选出具有一定灵敏度的特异性引物,结合微流控芯片,无需对样本进行复杂的核酸提取纯化操作,实现了对临床样本的直接快速检测,整个检测过程在1.5 h内即可完成。结论:LAMP技术可用于临床样本中HPV的分型检测,与微流控芯片结合后操作简单、检测时间短,在临床上有较好的应用前景。     

采用PCR-测序法对北京地区325例妇女宫颈脱落细胞样品中人乳头瘤病毒进行检测和基因分型

为了探讨PCR-测序法在宫颈脱落细胞样品中人乳头瘤病毒 (Human papillomavirus, HPV) 临床检测中的应用价值,采用HPV通用引物PGMY09/11针对HPV L1区基因序列进行PCR扩增,并通过DNA测序法对HPV进行基因分型。对于混合感染样品,利用HPV型别特异性引物PCR的方法进行基因分型。325例临床样品中,228例为HPV阳性,其中66例为混合感染。共发现27种不同的HPV型别,其中HPV 16比例最多,其次是HPV 58和52。高危型HPV检出率随病变程度加重显著性增加     

用聚合酶链式反应法检测人乳头状瘤病毒DNA

实验研究表明,宫颈癌的发生和发展与人乳头状瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)的感染有着密切关系。约有80％的宫颈癌组织中含有人乳头状瘤病毒第16型(HPV 16)及18型(HPV 18)的DNA,因此,检测宫颈癌组织中的HPV DNA对研究宫颈癌的发生和发展机制以及宫颈癌的防治都有重要意义。目前检测HPV DNA的手段都采用DNA探针杂交技术,该方法要有高比活的同位素,而且费时。聚合酶链式反应(Polymerase Chain Rea-     

《柳叶刀-肿瘤学》：高危HPV DNA检测可初筛宫颈癌

高危型人乳头瘤病毒（HPV）DNA检测可作为宫颈癌初筛方法,用于中国及其他发展中国家宫颈癌的二级预防。这一结论来自题为《高危型人乳头瘤病毒DNA检测作为宫颈癌初筛方法的有效性研究——中国以人群为基础的17个筛查研究综合分析》的论文。     

用光敏生物素标记探针检测宫颈癌、尖锐湿疣及假性湿疣组织中HPV DNA

人乳头瘤病毒(简称HPV)能引起人皮肤及粘膜的多种良恶性肿瘤,特别多见于女性生殖系统如宫颈癌、尖锐湿疣和假性湿疣。但由于HPV尚不能在体外细胞培养中增殖,因此目前对其研究主要用核酸杂交和PCR方法,检测HPV DNA。本文采用光敏生物素标记HPV16、HPV18 DNA探针,分别对宫颈癌组织进行斑点杂交,检测宫颈癌组织中HPV16、18DNA并以正常宫颈组织做对照。以同样方法用HPV6b DNA探针检测尖锐湿疣及假性湿疣组织中HPV6b DNA。结果如下:18例宫颈癌组织中仅有1例与HPV16 DNA探针杂交阳性(5.7%);10例与HPV18杂交刚性(55.6%);4例为HPV16+18混合杂交阳性(22.2%)。12例尖锐湿疣组织中8例与HPV6b DNA杂交阳性(66.7%);12例假性湿疣组织中有6例与HPV6b探针杂交阳性(50%)。10例正常宫颈组织对照均为阴性。     

Cervarix人乳头瘤病毒疫苗诱导的交叉中和抗体表现α-9种系型间特异性

正高度有效的人乳头瘤病毒(HPV)疫苗含有包括HPV16型和HPV18型两种基因型的病毒样颗粒(VLP),覆盖子宫颈癌病例的70%。疫苗型的保护被认为是由高滴度的型特异性中和抗体所介导的。该疫苗还可以针对某些来自于α-9(HPV16样:HPV31、HPV33、HPV35、HPV52、HPV58)和α-7(HPV18样:HPV39、HPV45、HPV59、HPV68)种群的相关基因型产生一定程度的交叉保护力。交叉保护     

人乳头瘤病毒检测方法研究进展

人乳头瘤病毒(Human papilloma viruses,HPV)是少数几种明确与人类癌症相关的病毒之一,其持续感染是导致宫颈癌发生的重要危险因素。HPV的检测对宫颈癌的筛查及治疗宫颈病变药物的有效性评价有重要作用,因此国内外对HPV的检测方法不断革新。纵观近年来HPV检测方法,主要依赖于分子生物技术检测HPV的DNA、RNA、癌蛋白等,但各种检测方法的原理、适用范围及临床意义均不相同。本文将就目前常用的HPV检测技术及试剂盒进行简要介绍,并对各方法的优缺点、灵敏度及特异性进行分析,以期为临床选择合适的检测方法提供参考。     

高危型人乳头瘤病毒、P16和ki67在宫颈上皮内瘤变临床意义及相互关系

目的:探究P16、ki67和高危型人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)在宫颈上皮内瘤变中诊断临床意义,并就上述指标的相关性进行分析。方法:选择2019年1月至2019年12月于我院接受治疗的31例宫颈炎患者、45例上皮内瘤变患者(其中25例为低级别上皮内瘤变,20例为高级别上皮内瘤变)为研究对象,分别对上述患者采用免疫组化法检测P16和ki67的表达,并采用PCR法对高危型人乳头瘤病毒的表达进行检测,而后实施组间比对。结果:高级别人乳头瘤变组和低级别人乳头瘤变高于宫颈炎组(P<0.05),高级别人乳头瘤病变组感染率高于低级别人乳头瘤变组,但是对比无统计学意义(P>0.05);P16表达阳性率由高至低为高级别内瘤变组、低级别内瘤变组和宫颈炎组,各组间表达阳性率比对差异具有统计学意义(P<0.05);ki67表达阳性率由高至低为高级别内瘤变组、低级别内瘤变组和宫颈炎组,各组间表达阳性率比对差异具有统计学意义(P<0.05);P16和ki67表达阳性率与HPV16/18感染率呈正相关联系(P<0.05)。结论:高危型人乳头瘤病毒、P16以及ki67对宫颈上皮内瘤变具有较好的诊断鉴别价值,可依据上述指标判断患者病程进展程度,对临床治疗具有一定指导意义。     

ELISPOT检测人乳头瘤病毒特异性的记忆T细胞

应用ELISPOT方法检测人乳头瘤病毒感染后自发清除者外周血中抗原特异性的记忆T细胞。收集人乳头瘤病毒（HPV）感染后自发清除者外周血（病毒清除后74个月）,分离外周血单个核细胞（peripheralblood mononuclear cells,PBMC）。体外应用已鉴定的表位肽刺激PBMC,10 d后计数细胞,去除表位肽,继续培养。第11天,ELISPOT方法检测PBMC中HPV抗原特异性的记忆T细胞。PBMC经表位肽刺激10 d后,细胞数量有明显增加,由最初的4.1×105增加为4.2×106。第11天,细胞数量增加为4.65×106,为抗原刺激前细胞数的11.3倍。ELISPOT结果显示,PBMC中的记忆T细胞活化后,能够识别抗原递呈细胞递呈的抗原肽,并分泌IFN-γ。此HPV自发清除者外周血中抗原特异性的记忆T细胞的频数为0.007%。人乳头瘤病毒（HPV）感染后自发清除者外周血存在抗原特异性记忆T细胞,抗原肽可激活记忆T细胞,使之数量增加,分泌IFN-γ。ELISPOT可用于检测外周血中HPV特异性的记忆T细胞。     

高危型人乳头瘤病毒基因多态性研究进展

高危型人乳头瘤病毒已被证实是宫颈癌发生发展的必要因素,但不同型别的流行特征存在广泛的区域差异性,且即使是同一型别,其基因组同样存在基因多态性.这些基因多态性可能导致蛋白质功能的差异,进而造成病毒生存能力,致病能力以及与宿主细胞相互作用的差异.现已有大量研究表明HPV16和HPV18型基因多态性在病毒的生物学功能和导致临床疾病进展具有重要意义,因此更多的相关研究围绕着HPV高危型中不同型别的基因多态性相继开展,本文对高危型人乳头瘤病毒HPV16,HPV18,HPV58,HPV52,HPV31和HPV33型的基因多态性研究现状加以综述.     

人乳头瘤病毒及宫颈癌疫苗的研究——解读2008年诺贝尔生理学或医学奖

德国科学家Harald zur Hausen因发现人乳头瘤病毒（HPV）导致子宫颈癌,与另外两位科学家共享了2008年的诺贝尔生理学或医学奖．HPV是一组小DNA病毒,目前己鉴定有118型．HPV感染人的上皮组织,诱发产生包括妇女宫颈癌和尖锐湿疣在内的多种良恶性增生性疾病,目前已有两种人乳头瘤病毒预防性疫苗上市．对病毒的生物学特性、致癌机制及相关的疫苗的研究进行综述．     

Tetramer技术检测人乳头瘤病毒抗原特异性T细胞条件的优化

人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染是宫颈癌发生的首要因素。针对病毒早期蛋白E6的特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic Tlymphocyte,CTL)在清除HPV感染细胞和病毒转化形成的肿瘤细胞过程中发挥重要作用,因此检测体内抗原特异性CTL的频数和功能有助于了解病毒感染者或宫颈癌患者体内的特异性细胞免疫反应。利用加载HPV16 E6表位抗原肽(E6 133-142;HNIRGRWTGR)的HLA-A6801四聚体(Tetramer),即HPV16 E6 133-142/HLA-A6801-PE四聚体,通过检测混有HPV特异性CTL的PBMC标本,优化Tetramer染色的实验条件,探讨染色的最佳温度及Tetramer浓度。结果显示,染色温度(4℃、室温及37℃)对Tetramer与CTL的结合无明显影响。Tetramer稀释度为1∶1 600时,HPV特异性CTL荧光强度保持高水平,且非特异性染色少,为最佳染色浓度。研究结果为进一步检测HPV感染者或宫颈癌患者体内抗原特异性的CTL打下基础。     

重组人乳头瘤病毒核酸疫苗诱导特异性淋巴细胞增殖

采用分子克隆技术 ,将人乳头瘤病毒 16型E7(HPV 16E7)基因重组于真核表达载体上 ,构建了HPV 16E7核酸疫苗。将该疫苗通过皮内注射方式免疫Balb/c纯系小鼠。基因免疫后制备小鼠脾淋巴细胞悬液 ,经体外E7蛋白再次刺激后用MTT比色法检测出了特异性淋巴细胞增殖反应。由于特异性淋巴细胞增殖是反映细胞免疫功能的简便有效方法 ,所以本实验表明HPV 16E7核酸疫苗构建正确 ,并能够诱导机体产生特异性细胞免疫应答     

表达人乳头瘤病毒16型E6/E7融合蛋白的非复制型重组痘苗病毒的构建及免疫效果观察

采用基因工程方法将HPV16E6、E7基因融合后插入痘苗病毒载体,通过同源重组构建表达人乳头瘤病毒16型E6/E7融合蛋白的非复制型重组痘苗病毒疫苗,用C57BL/6小鼠观察其免疫原性和抗肿瘤移植情况。测序结果表明融合的HPV16E6、E7基因序列与设计相符;构建的非复制型重组痘苗病毒经Dot blot鉴定,显示有E6、E7融合基因的插入;Western blot检测表明该重组病毒在鸡胚成纤维细胞中能表达HPV16型E6/E7融合蛋白。动物免疫试验表明,该重组病毒在小鼠体内可诱发E6、E7特异性抗体;被免疫小鼠能抵抗TC-1肿瘤细胞的攻击。此结果为将来进一步研制HPV16、18型联合疫苗打下了基础。     

重组人乳头瘤病毒核酸疫苗诱导特异性淋巴细胞增殖

采用分子克隆技术,将人乳头瘤病毒16型E7(HPV 16 E7)基因重组于真核表达载体上,构建了HPV 16 E7核酸疫苗.将该疫苗通过皮内注射方式免疫Balb/c纯系小鼠.基因免疫后制备小鼠脾淋巴细胞悬液,经体外E7蛋白再次刺激后用MTT比色法检测出了特异性淋巴细胞增殖反应.由于特异性淋巴细胞增殖是反映细胞免疫功能的简便有效方法,所以本实验表明HPV 16 E7核酸疫苗构建正确,并能够诱导机体产生特异性细胞免疫应答.     

头颈部肿瘤基因组中HPV16DNA的同源序列

利用头颈部肿癌临床活检新鲜组织和石蜡包埋组织的两种处理标本,分别采用核酸分子杂交和聚合酶链反应(PCR)两种技术,分析了头颈部肿瘤组织基因组中人乳头瘤病毒16型的同源序列,并研究HPV16的感染同头颈部肿瘤发生发展的关系。结果表明:1.喉鳞状细胞癌DNA中有HPV16 DNA同源序列,检测频率在20.0％以上。2.PCR扩增石蜡包埋肿瘤组织DNA中HPV16的URR(病毒基因上游调控区)中的序列,电泳分析扩增产物在喉乳头状瘤、喉癌、鼻腔内翻性乳头瘤和口腔癌中检测率分别是11.1％、20.0％、42.9％和27.3％。3.研究表明HPV16 DNA阳性率与喉癌原发部位,分化程度和临床分期之间可能有一定的相关性。人乳头瘤病毒可能是头颈部肿瘤的病毒病因之