光棘球海胆(Mesocentrotus nudus)TGF-β基因克隆及其对海水酸化的响应

旨在明确光棘球海胆(Mesocentrotus nudus)转化生长因子-β(transforming growth factorβ,TGF-β)基因的序列及结构信息,探明该基因在海水酸化胁迫下的表达模式。利用同源克隆和cDNA末端快速扩增(RACE)技术首次获得光棘球海胆TGF-β基因(命名为MnTGF-β)的全长cDNA序列。结果显示:(1)光棘球海胆TGF-β基因的cDNA全长为2 299 bp,其中5'非编码区长度为745 bp,3'非编码区长度为261 bp;开放阅读框(ORF)长度为1 290 bp,编码430个氨基酸,相对分子量为48.31 kD,理论等电点为5.34。(2)同源性及系统进化分析显示,光棘球海胆MnTGF-β蛋白序列与紫球海胆(Strongylocentrotus purpuratus)SpTGF-β2蛋白序列高度保守(同源性97.69%)。(3)实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测发现,MnTGF-β基因在光棘球海胆性腺、体腔液、肠、围口膜、管足5种组织中均有表达,其相对表达量从高到低依次为:管足围口膜肠体腔液性腺。(4)与自然海水组(pH 8.06±0.01)相比,当海水△pH为-0.3时,随酸化时间延长,MnTGF-β基因在光棘球海胆性腺中的相对表达量呈先升高而后极显著降低(P0.01)再极显著升高(P0.01)趋势,在管足中的相对表达量呈现极显著上调趋势(P0.01),而在肠组织中的相对表达量则先极显著降低(P0.01)而后显著升高(P0.05);当海水△pH为-0.4和-0.5时,随酸化时间的延长,MnTGF-β基因在光棘球海胆性腺和管足中的相对表达量呈现先降低后升高的趋势,而在肠组织中的相对表达量则呈现极显著降低趋势(P0.01)。     

克雷伯杆菌所致肝脏巨大气性脓肿一例报告

目的:分析克雷伯杆菌导致肝脓肿的的可能原因和发病机理,提高诊断的准确性,并对临床治疗提供帮助.方法:本文报道了本院收治的一例肝内罕见巨大气性脓肿,详细分析了其影像学表现特点及临床表现、辅助检查等情况.结果:本病例细菌培养结果为克雷伯杆菌.患者经积极治疗后病情好转.结论:肺炎克雷伯杆菌引起的肝脓肿发病率呈上升趋势,并已经成为细菌性肝脓肿最常见的致病菌.克雷伯杆菌所致的肝脓肿除了有细菌性肝脓肿的普遍表现外,还有其独特的特点.另外,糖尿病是克雷伯杆菌肝脓肿常见的基础疾病,糖尿病患者的肝脓肿往往进展迅速,且早期症状及CT表现多不典型,因此对于感染入院的糖尿病患者应该警惕克雷伯杆菌肝脓肿的发生.     

RNA翻译的复杂性：不翻译、部分翻译、从头翻译及过度翻译

经典分子生物学的中心法则描述了遗传信息的传递方向.中心法则认为RNA只有通过翻译产生蛋白质才在生命活动中发挥功能.但是随着分子生物学的发展,很多RNA其本身就可以承担生命学功能.而且RNA的形式也不仅仅只有线性这一种.本文总结了RNA转录后命运的4种形式:不翻译、部分翻译、从头翻译和过度翻译.RNA命运的多样性使得对于翻译的理解比经典的中心法则规定的内容将更加丰富、复杂.充分了解RNA转录后的命运,对以后研究RNA的功能提出了更高的要求,也为我们真正而全面地了解RNA的功能提供了可能.     

郏县红牛ZAG基因多态性与生长性状的相关性

摘要: ZAG基因的功能主要是促进脂肪分解, 减少脂肪含量。文章利用PCR-SSCP和DNA测序技术研究了145头郏县红牛ZAG基因编码区4个位点(Z1、Z2、Z3、Z4)的多态性, 发现Z1、Z3、Z4 位点存在SSCP多态。对不同SSCP带型的对应片段进行了测序分析, 共发现6个新的SNP多态位点(C115T、A3257G、A4013G、T4027C、C4032T、T4120C)。Z3位点处于Hardy-Weinberg平衡状态, Z1、Z4 位点处于非平衡状态。不同基因型与生长发育性状的相关性分析显示, Z4位点上, AC基因型个体的体斜长、胸围、管围、体重指标显著(P<0.05)或极显著(P<0.01), 大于AA、AB基因型个体, 暗示该位点有可能作为郏县红牛生长性状标记辅助选择的标记之一。     

介绍几种起鹿和运鹿的方法

冬季是狩猎和捕鹿的季节,但如何保证捕一只活一只,以各地捕鹿情况来看,确实是一项急待解决的问题。通河县捕了20多只活鹿,由于起鹿和运输不当,结果死了10多只。据不完全统计,全省已捕住的活鹿,由于起鹿不当而死亡的即占30—40%,由于运输不当而死亡的也在20—30%。为了扭转这种现象,提高捕鹿的成活率,现把我省各地较好的起鹿和运鹿方法介绍如下。     

大肠杆菌poly(A)化mRNA基因的芯片制备*

利用大肠杆菌mRNA中存在的一定程度的poly (A)现象 ,利用oligo (dT)与poly(A)特异结合的特性 ,纯化并逆转录mRNA ,并应用RD PCR方法获得了 1 70多条大肠杆菌poly (A)化mRNA的基因片段 ,利用这些片段打印成基因芯片 ,以供后续大肠杆菌的基因表达研究。     

应用限制性显示PCR技术构建细菌poly(A)化mRNA的cDNA文库

针对细菌mRNA poly(A)化位点的高度多态性,利用oligo(dT)与poly(A)特异结合的特性,以oligo(dT)一纤维素纯化mRNA,并以oligo(dT)18为引物逆转录合成cDNA,用限制性内切酶消化cDNA,所得的限制性内切酶片段与通用接头相连,通过10个选择性引物组合进行选择性PCR,使各片段得以扩增并分布于10个亚组中,并进行克隆,成功地克隆了100多个基因片段,已对其中40个进行了测序分析,探讨了限制性显示PCR技术在细菌poly(A)化mRNA cDNA库构建中的应用价值。     

应用RD-PCR技术制备基因芯片靶基因片段

应用RD－PCR技术分离SH－SY5Y细胞的基因片段。从正常培养的SH－SY5Y细胞中提取总RNA,经oligo(dT）纤维素柱纯化分离出mRNA,然后以oligo(dT18)为锚定引物反转录生成单链cDNA,再以此为模板合成DNA的第二条链;将双链DNA经Sau3AI酶切之后,接上接头,经通用引物和选择性引物进行扩增;然后与载体pMD18-T相连,克隆鉴定、筛选、测序。所分离的cDNA片段经过扩增后用于制备基因芯片的靶基因,杂交检测的结果表明,此种方法所分离的基因片段可以用于基因芯片的靶基因片段,所制备的芯片将为进一步研究神经细胞基因表达提供了条件。     

纯化探针降低基因芯片杂交结果的背景

研究探针的纯化对基因芯片杂交结果的影响。将乙醇沉淀的探针和用DNA纯化试剂盒纯化的探针分别与基因芯片交,在同等条件下进行杂交后清洗和芯片扫描检测。结果表明,纯化的探针与基因芯片杂交结果的背景低,而未纯化的探针背景强,阳性信号界限比较模糊。运用基因芯片进行基因表达谱研究,要求杂交检测的结果必须低背景。探针的纯化是影响芯片杂交结果的一个重要因素。     

LipofectAMINE2000与Fugene6转染细胞的效率比较

目的:比较LipofectAMINE2000与Fugene6转染细胞的效果。方法:将含有Firefly和Renilla荧光素酶基因的质粒分别用LipofectAMINE2000和Fugene6转染293T、HepG2和DLD-1细胞,于48h后裂解细胞测定荧光素酶活性。结果:在293T细胞中,LipofectAMINE2000转染组的萤火虫(Firefly)和Renilla荧光素酶活性分别是Fugene6转染组的6.5和5.6倍(P<0.005);在HepG2细胞中,LipofectAMINE2000转染组的Firefly和Renilla荧光素酶活性分别是Fugene6转染组的44和49倍(P<0.001);而在DLD-1细胞中,两者无差别。结论:转染试剂LipofectAMINE2000和Fugene6对不同细胞的转染效果存在差异,当进行转染实验时,对于不同的细胞须根据情况进行选择。