血管活性肠肽可调节胆碱能神经的传递

Lundberg 等首先发现猫下颌腺副交感神经的节后纤维兴奋时,血管活性肠肽(VIP)和乙酰胆碱(ACh)共同释放。VIP 影响唾液腺突触后细胞膜的兴奋性,可使主递质ACh 和胆碱M 受体的亲合力激增10~5倍。在突触水平可能存在两种反馈调节:(1)由突触前胆碱M 受体介导的抑制性回路,控制ACh 和VIP 释放。(2)ACh 和VIP 作用于突触前及突触后胆碱M 受体,降低ACh 的周转率。切断ACh 代谢的中枢性调     

抗体片段在铂纳米粒子表面的构象重构

目的 最近在金纳米粒子（AuNPs）表面重构抗体片段的天然构象和功能的研究表明分子构象工程的可行性。本质上,分子构象工程就是要像蛋白质折叠一样,通过精确控制柔性非功能分子的构象使其产生新功能。本文在铂纳米粒子（PtNPs）表面重构抗体互补决定簇区（CDR）片段的天然构象和功能,旨在探索分子构象工程的普适性及揭示蛋白质结构-功能机制。方法 本文将抗溶菌酶抗体（cAB-lys3）中的CDR3片段（在单独存在时没有稳定构象和功能）通过两个Pt-S键偶联到PtNPs表面。CDR片段的天然构象和功能的恢复通过它对溶菌酶活性的抑制来表征。结果 通过多肽密度优化和表面聚乙二醇修饰,制得基于PtNPs的抗溶菌酶人工抗体（简称铂抗体）。溶菌酶活性测试结果表明,铂抗体可以特异性结合溶菌酶并显著抑制其活性。结论 本文第一次在PtNPs表面重构了蛋白质片段的天然构象并恢复了其功能,证明分子构象工程可作为一种通用方法制备基于纳米粒子的人工蛋白质。     

一种新型疫苗——抗独特型抗体

现行的疫苗均是以病原体为原料加工制得的。近年来,科学家们正在研究一种新型的疫苗——抗独特型抗体疫苗,该疫苗与现行疫苗的区别是,它不是直接用病原体材料进行加工制造的,在性质上,它属于抗体。所谓独特型,是指存在于抗体分子某些部位上由数个氨基酸构成的一种特殊基团,该基团主要位于抗体分子的三个部位:高变区内、高变区附近区域和可变区骨架上。它们均具有抗原性,即能在自体或异体     

抗独特型抗体在自身免疫性疾病中的意义

<正> Jerne在Burnet选择学说的基础上,提出了著名的免疫网络学说,认为抗体分子的可变区不仅表现出抗体活性,而且也显示具有抗原性,所以IgG分子既是抗体又是抗原,对Ig可变区表现为抗原特异性的称为独特型。专有的独特型仅存在于一种Ig上,而共同的独特型是一种以上抗体所共有的。在同种异体或异体间还存在一种交叉反应性独特型(CRI)。在此等CRI中有相同抗原性,一种CRI的     

抗原化抗体

抗原化抗体余拥军吴祥甫（中国科学院上海生物化学研究所,上海２０００３１）关键词抗原化抗体抗体基因工程抗原性免疫原性抗体是哺乳动物免疫系统的重要组成部分,担负着机体抵御外来入侵者及清除体内病变、衰老细胞等重要生理功能。抗体分子因其结构的特殊性、对抗原分...     

核酸抗体

核酸抗体的研究始于五十年代中期。最初一些研究者试图用纯DNA免疫动物制备抗体,均告失败。稍后,人们才用DNA与载体蛋白组成复合物免疫动物,获得了核酸抗体,同时还发现既便用碱基、核苷、单核苷酸或寡核苷酸与牛血清清蛋白的复合物也能产生特异性抗体。至此人们开始认识到核酸物质具有抗原性。由于抗体-抗原反应的高度特异性,核酸抗体的研究在核酸的检测、分离和提纯,核酸结构与功能的研究及临床应用等方面都发挥着重要的作用。本文拟就核酸抗体的某些研究情况作一简要介绍。一、核酸的抗原性核酸由碱基、戊糖和磷酸组成。核酸的抗原性由碱基或戊糖-磷酸所决定,因此核酸的抗     

戊型肝炎病毒样颗粒在重组汉逊酵母中的发酵表达、纯化及其免疫原性分析

为了研制戊型肝炎新型基因工程疫苗,利用汉逊酵母表达系统表达重组戊型肝炎病毒样颗粒,成功构建了重组戊型肝炎疫苗工程菌株HP/HEV2.3,对该菌株的发酵条件和纯化工艺进行了研究。先将工作种子批进行发酵培养,收集发酵后的细胞培养物;对其先后进行细胞破碎、澄清和超滤、硅胶吸附和解吸附、超滤浓缩换液、色谱纯化及除菌过滤,制得重组汉逊酵母戊型肝炎病毒样颗粒,纯化收率为33%,纯度达99%;电镜观察显示该重组汉逊酵母戊型肝炎病毒样颗粒与天然戊型肝炎病毒颗粒理论大小一致,为32 nm;基因序列与理论一致;SDS-PAGE分析结果表明其表达的外源蛋白质分子量与预期的目的蛋白质分子量大小一致,均为56 k Da,表达量占细胞总蛋白的26%,表达水平为1.0 g/L发酵液;Western blotting、ELISA活性检测及小鼠免疫接种效力试验ED_(50)结果表明,此重组汉逊酵母戊型肝炎病毒样颗粒具有良好的抗原性和免疫原性,可用于制造戊型肝炎新型基因工程疫苗。     

运动神经末梢的突触前M-胆碱受体是兴奋性的还是抑制性的?

Gangul等曾发现,M-激动剂oxotremorine可使大鼠膈神经-膈制备(phrenic nerve-diaphragm preparation)的ACh释放增加,而M-阻断剂阿托品则使之减少。然而,Abbs等最近在类似的实验中却得到截然不同的结果。他们将成年Wistar大鼠的膈神经-膈制备与[~3H-甲基]-胆碱共同孵育后测定了阿托品和oxotremorine对该制备释放ACh的影响。发现阿托品(10~(-6)-10~(-5)M)不影响静息情况下ACh的释放,但阿托品(10~(-5)M)可增强电刺激引起的ACh释放;oxotremorine(10~(-5)M)对静息时及电刺激引起的ACh释放均无影响;阿托品(10~(-5)M)与oxotremorine(10~(-5)M)     

不同功能基团对3型肺炎球菌荚膜多糖免疫原性影响的初步研究

目的比较3型肺炎链球菌荚膜多糖不同基团活化对多糖抗原性及结合物免疫原性的影响。方法分别采用1-氰基-4-二甲氨基-吡啶四氟硼酸(1-cyano-4-dimethylaminopyridinium tetrafluoroborate, CDAP)活化多糖羟基,碳二亚胺(1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochloride, EDC)活化多糖羧基,再与己二酰肼(adipic dihydrazide, ADH)偶联获得活化度相近的多糖衍生物。用三硝基苯磺酸方法(trinitrobenzene sulfonic acid, TNBS)测定多糖活化度;高效液相分子排阻与多角度激光散射仪联用(HPLC-SEC-MALLS)分析衍生物分子分布和大小;Zeta电位仪与滴定仪联用分析其表面电荷变化;速率比浊法和免疫双扩散法比较其抗原性变化;利用多糖衍生物与载体蛋白偶联获得的不同结合物免疫小鼠,间接ELISA分析不同结合物免疫后的IgG抗体浓度,进一步阐述活化过程中多糖抗原性的变化对结合物免疫原性的影响。结果 TNBS结果显示,获得同一基团不同活化度(5%～30%)、不同基团(羟基和羧基)活化度相近的多糖衍生物;等电点分析结果显示,不同基团的活化会导致多糖表面不同的电荷变化;而速率比浊和免疫双扩散的结果显示,多糖羟基的活化会导致多糖抗原性略有下降,但不同活化度之间差异较小;在相似活化度情况下,羧基衍化物的抗原性更低,随着羧基活化度的增加,多糖抗原性下降明显(约60%)。小鼠ELISA结果显示,对羧基不同程度活化得到的结合物,其免疫原性较多糖明显提高,差异具有统计学意义(P<0.05);随着多糖羧基活化度的增加,结合物免疫原性先增加后降低。结论 3型多糖重复单位上的羧基的改变对抗原性影响较羟基更大,对羧基的过度活化会影响结合物的免疫原性。     

南极假丝酵母脂肪酶B催化3-(4-氟苯基)戊二酸酐不对称醇解

采用分子模拟技术,研究了南极假丝酵母脂肪酶B(Candida antarctica lipase B,CALB)催化3-(4-氟苯基)戊二酸酐(3-FGA)不对称醇解的分子机制。首先借助力场修改的Autodock 4.2软件将过渡态底物与CALB进行对接,根据对接自由能差异解析了CALB催化3-FGA与不同醇反应的立体选择性差异,得到的S型底物结合能小于R型底物;其次,基于扭转角机制分析发现,S型底物扭转角小于R型底物,从分子水平上揭示了CALB对S型底物选择性优于R型底物的机制。     

14型肺炎球菌荚膜多糖-破伤风类毒素结合疫苗的研制

将14型肺炎球菌的荚膜多糖(PS)与破伤风类毒素(TT)通过化学方法结合,制备成多糖-蛋白结合疫苗(PS14-TT)。用该结合疫苗免疫小鼠,在小鼠体内产生了高滴度的PS-IgG抗体和TT-IgG抗体,且再次注射后有加强应答效应,表明制备的结合疫苗保留了完好的抗原性,具有胸腺依赖性抗原的特性。     

人红细胞内乙酰胆碱/胆碱活度的微电极测量及临床意义

本文采用新发展的乙酰胆碱/胆碱(ACh/Ch)离子选择微电极对人体单个红细胞内的ACh/Ch活度进行了测量。实验对象是25位正常人及8位躁狂症病人的红细胞。正常人红细胞内ACh/Ch的活度值为24.O±8.3×10^-6mol/L,而躁狂症病人的红细胞内ACh/Ch的活度值为98.3±41.4×10^-6mol/L,是正常人的4倍。本文对ACh/Ch离子选择微电极的结构和特性参数亦作了描述。     

科学出版社生命科学编辑部新书推介

蛋白质芯片(影印版)Protein M icroarraysMark Schena7-03-014321-3/Q.14762005.565元生物芯片技术是一种高通量检测技术,它包括基因芯片、蛋白芯片及芯片实验室三大领域.蛋白质芯片以蛋白质代替DNA作为检测目的物,比基因芯片更接近生命活动的物质层面,能直接测定蛋白质的相对水平及与其他分子的交互作用情况,以定量化的方式反映基因的活动情况,因而蛋白质芯片有着比基因芯片更加直接的应用前景.本书对蛋白质芯片技术进行了全面细致的阐述,包括技术原理、生产方法、表面化学、检测策略,以及抗原、抗体数据分析,同时全书图文并茂,提供了…     

L形管培养法用于检测大肠杆菌耐热肠毒素的研究

引起人和家畜急性腹泻的产毒性大肠杆菌,产生两种不同类型的肠毒素。一种是不耐热肠毒素(LT),分子量大于80,000的蛋白质,具有良好的抗原性,与霍乱肠毒素有密切的抗原关系,而且其化学结构、功能与致病的作用     

胚胎型与成年型肌肉乙酰胆碱受体分子有区别

电鱼N 型乙酰胆碱(ACh)受体是由五条多肽链:α_2βγδ组成。这四种亚基构成一个离子通道。现已弄清这四个亚基的一级结构。当两个ACh 分子与α亚基的细胞外受点结合时,激活离子通道,完成一个快速的化学传递。哺乳动物其ACh 受体的生理特性随胚胎发育的进行而不同。在运动神经开始对肌肉支配之     

大鼠快、慢肌终板乙酰胆碱受体的比较及去神经后的变化

经化学方法合成的辣根过氧化酶-α-银环蛇毒复合物(HRP-α-BuTx)能专一地结合乙酰胆碱受体,从而显示肌纤维终板区,可作组织化学观察,DAB 棕色沉淀的深度反映了 ACh受体的密度。实验结果表明,大白鼠趾伸长肌的终板 ACh 受体密度无例外的比比目鱼肌的板终 ACh 受体密度高;正常终板具有很多分枝的沟糟结构,DAB 沉淀分布于沟糟内壁。切断神经后终板结构变得不甚清晰。与正常相比,去神经 SOL 的终板 ACh 受体密度显著升高,去神经 EDL 的终板 ACh 受体密度虽也有升高,但由于 EDL 的终板 ACh 受体密度本来较高,差别没有 SOL 的显著。     

蛋白质内含子在特定氨基酸序列中的剪接

基因工程技术已经被广泛应用于抗体的生产。但是由于抗体的分子量较大,导致合成抗体较为困难。蛋白质内含子是前体蛋白质中的一段氨基酸序列,能够将自身剪切出来,并将两端的外显子连接形成成熟的蛋白质。将抗体的Fab(antigen binding fragment)和Fc(crystalline fragment)分别与蛋白质内含子(intein) 的N端(IN)和C端(IC)融合表达,利用蛋白质内含子的剪接功能,可形成完整的抗体分子。KSCDKTH是存在于抗体铰链区(hinge region)的一段氨基酸序列,如果在KSCDKTH序列中筛选到高效剪接的蛋白质内含子,即可通过蛋白质剪接,将抗体分子的Fab和Fc剪接形成完整抗体。本文筛选发现,Ssp DnaX的3种断裂蛋白质内含子(S0, S1, S11)具有在KSCDKTH序列中高效剪接的能力,这一研究结果为抗体的剪接合成提供了可行性。     

蜜蜂脑乙酰胆碱免疫反应阳性神经元的分布

通过免疫组织化学方法-PAP法,使用乙酰胆碱(ACh)抗体,研究了中华蜂(Apis sinensis)和意大利蜂(Apis mellifera L)脑中具有乙酰胆碱免疫阳性反应的神经元胞体的形态、分布及神经元类型.并和已知的在其他昆虫脑中用ACh的合成酶ChAT和其水解酶AChE的抗体免疫组化法所获得的结果进行了比较.     

家兔第四脑室注射乙酰胆碱对肺动脉血压的影响

本工作将乙酰胆碱(ACh)注入麻醉家兔第四脑室,观察其对肺动脉血压的影响。结果发现(1)脑室注射50—100μg ACh后,肺动脉压和颈动脉压均下降。与此同时心率也出现一过性减慢。(2)切断两侧颈部迷走神经,ACh不再使心率减慢,但其降低肺动脉压和颈动脉压的作用不受到任何影响。(3)预先由第四脑室注射阿托品,可阻断AGh引起的肺动脉降压反应和颈动脉降压反应。(4)第四脑室注射六甲双铵或酚妥拉明,均不能阻断这二个降压反应。(5)第四脑室注射心得安不能阻断ACh引起的肺动脉降压反应,但能阻断ACh降低颈动脉压的作用。 实验结果表明:脑中ACh水平升高可通过激活胆碱能M-受体引起肺动脉压和颈动脉压下降;在ACh引起的颈动脉降压反应的中枢环节中有肾上腺素能β-受体活动参与;而且ACh降低肺动脉压和颈动脉压的作用不是通过迷走神经实现的,可能是由于延髓交感缩血管中枢紧张性降低所造成的。     

神经元营养因子对大鼠隔—海马通路损伤的影响

为评价神经生长因子(NGF)、混合型神经节苷脂(GM)和单唾液酸神经节苷脂(GM1)对中枢胆碱能神经损伤早期的影响,在大鼠单侧隔-海马通路部分损伤后即时经脑室分别注入上述三种神经元营养因子,7d后取两侧海马分别测定乙酰胆碱(ACh)、胆碱乙酰基转移酶(ChAT)和胆碱酯酶(ChE)。损伤对照组(脑室注入盐水)术侧海马ACh含量保留率为对侧的20.3％,ChAT活力为50％,ChE活力为48.3％。给予NGF、GM或GM1的实验组,ACh含量保留率分别为34.9％,35.3％和47.7％;ChAT活力为77.4％,78.4％和69.2％;而ChE活力的保留率未见明显改变。这些神经元营养因子显著增加了大鼠隔-海马通路损伤后海马内ACh含量和ChAT活力,说明它们减轻了损伤侧海马胆碱能神经纤维的破坏,具有明显的损伤早期保护作用。